PPO基因在制备腺癌诊断试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了PPO基因在制备腺癌诊断试剂中的应用，主要涉及基因医药技术领域。研究从PPO基因与乳腺癌的发生、发展和转归的关系以及探索分子靶向治疗的可能性开始，并逐一研究PPO基因与其它腺癌如肺癌、胰腺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、胆管癌、前列腺癌、卵巢癌、子宫癌等的关系。在分子、细胞、器官和整体等不同层面作深入细致的系列研究。通过大量的病理学实验表明，该基因只在腺癌中过表达。因此，该基因可以作为腺癌的特异性抗体，应用于临床诊断或生物制药。本发明专利技术的有益效果在于：本发明专利技术首次揭示了PPO基因用于制备腺癌诊断药剂或试剂盒的新用途，将为癌症诊断和将来分子靶向性治疗提供帮助。

Application of PPO gene in the preparation of diagnostic reagents for adenocarcinoma

The invention discloses the application of PPO gene in the preparation of a diagnostic reagent for adenocarcinoma, mainly relating to the field of gene medicine technology. Research from the PPO gene and the occurrence and development of breast cancer and the relationship with the development and exploration of molecular target therapy to the possibility, and each of the PPO gene and other cancer such as lung cancer, pancreatic cancer, colon cancer, gastric cancer, liver cancer, bile duct cancer, prostate cancer, ovarian cancer, uterine cancer relationship. A series of detailed studies are carried out at different levels of molecules, cells, organs, and whole bodies. A large number of pathological studies show that the gene is expressed only in adenocarcinoma. Therefore, the gene can be used as a specific antibody for adenocarcinoma and is used in clinical diagnosis or biological pharmacy. The invention has the advantages that the invention discloses the new application of PPO gene for preparing the diagnostic reagent or reagent box for adenocarcinoma, and will provide the aid for cancer diagnosis and molecular targeted therapy in the future.

【技术实现步骤摘要】
PPO基因在制备腺癌诊断试剂中的应用
本专利技术涉及基因医药
，具体是PPO基因在制备腺癌诊断试剂中的应用。
技术介绍
恶性肿瘤严重威胁人类健康和生命，全球因癌症每年死亡人数约600万，我国因癌症死亡数每年约130万，按目前趋势预测在2020年随全球人口达80亿，将有2000万新发癌症病人，每年死亡人数达1200万，因此肿瘤的早期发现和早期诊断对肿瘤的预防和治疗至关重要。探索有价值的肿瘤分子标记物则有助于治疗前，对肿瘤进展的程度进行评估，从而为治疗决策提供参考。在诊治癌症过程中引入肿瘤分子生物标记物，有以下三个好处：①预测癌症患病风险，早期诊断，对患癌风险较高者采取预防措施，防止癌症发生；在早期癌症患者，体内癌细胞数较少时及时采取措施，彻底根治癌症；②指导治疗：对经过生物标记物检查，估计预后不好的患者采取更为猛烈的治疗方法，增加生存可能性；对于估计预后好的患者避免采用不必要的猛烈的治疗方法，防止药物本身给患者带来的巨大打击；③发现新药适应人群，仔细观察患者体内某个肿瘤相关分子，对治疗的反应情况，据此对治疗方案做出进一步调整，构成一整套癌症病人的诊疗循环。在这个诊疗循环中，临床医生会收集很多病人对诊疗方案的具体反应，这些反应对于开发新药有非常重要的作用。21世纪肿瘤治疗进入了分子靶向治疗和个体化治疗的时代。随着肿瘤生物学与肿瘤基因组学的发展，涌现出一些新型的肿瘤分子标志物，这些分子标志物对于肿瘤的早期诊断、分子分型、预后估评和针对性治疗起着非常重要的作用。理想的肿瘤标志物应该是特异性高、敏感性强、可信度高、稳定性强，能早期检测出肿瘤患者；特异性好，能准确鉴别肿瘤/非肿瘤患者；有器官特异性，方便对肿瘤的定位；血清中水平与肿瘤体积大小、临床分期相关，用以判断预后；半衰期短，可反映肿瘤的动态变化，监测治疗效果、复发和转移；测定方法精密度、准确性高，操作方便。然而迄今为止尚没有一种肿瘤标志物能同时满足以上要求。目前，人类发现的肿瘤标志物已有百余种，但临床常用的仅20多种，能用于大规模人群普查的肿瘤标志物更少。比如宫颈腺癌的临床及分子生物学特性不同于宫颈鳞癌，患者5年生存率较宫颈鳞癌低，预后差，因此对其标志物的研究具有重要的意义；乳腺癌检测c-erbB-2、Cath-D(组织蛋白酶D)、p53、PCNA表达阳性，ER、PR表达阴性，表明存在播散高风险因素，对预后有不良影响。同时，正是由于分子标志物的发现，使肺癌的治疗进入了个体化时代，而随着研究的不断深入，将有越来越多的患者享受到个体化治疗的成果，肺癌转变为慢性病的奇迹正在成为现实。因此如何发现新型肿瘤分子标志和如何应用新型肿瘤分子标志来指导肿瘤的靶向治疗和个体化治疗成为当今肿瘤诊疗领域的重要课题。申请人在2004年利用克隆筛选技术，在1p36区找到了一个新的癌基因，在活体动物的研究表明，用干扰RNA(RNAi)的方式,阻断该基因的表达，可以减少磷酸化和核增殖抗原(PCNA)的表达，并且能够抑制卵巢癌的生长。我们将其并命名为PPO(PhosphorylationandProliferationOncogene)，就相关技术申请了国家专利技术专利并获得授权(专利名称“一种癌症基因及其医药用途”专利号“200410012307X”)。PPO基因(KIAA0090，genebank)是一个新的癌基因，PPO基因在基因库的编码为KIAA0090。申请者对该基因的研究已有近十年的历史，从基因分离、克隆到功能鉴定；从分子、细胞、器官水平进行了系列研究。对该基因的结构及功能有了初步的了解。它位于1号染色体末端1p36.13区，DNA长度约36000bp，cDNA长度6022bp。共有25个外显子，编码993个氨基酸，蛋白质分子量为110KD。最保守的氨基酸恰恰位于磷酸化功能域内，功能域分析显示该基因可能与磷酸化有关，包括依赖cAMP和cGMP蛋白激酶磷酸化点、蛋白激酶C磷酸化点、激酶II磷酸化点、酪氨酸激酶磷酸化点。它属于蛋白激酶类，主要激活途径是基因扩增.在细胞学水平的研究表明，该基因有使MAPK和ERK2的磷酸化蛋白表达明显增加的作用，，同时还有促进细胞增殖的作用。通过研究，PPO基因在癌症的表达并非普遍覆盖，很有可能是某一类癌症的特异性基因。具有深入研究的价值及意义。如果能够有所斩获，将有助于人类对于不同癌症的特异性研究，并为癌症诊断以及讲来的分子靶向性治疗提供帮助。而之前的研究对于PPO基因能否作为某一类癌症的特异性诊断基因应用于医学诊断或药剂，尚未见公开。
技术实现思路
在上述技术的基础上，本专利技术经过研究，发现了PPO基因的新用途——在制备腺癌诊断试剂中的应用，即作为腺癌诊断药剂、试剂盒的应用，并完成了该基因抗体的制作，为腺癌病因的解析及将来的分子靶向性提供帮助。本专利技术为实现上述目的，通过以下技术方案实现：研究从PPO基因与乳腺癌的发生、发展和转归的关系以及探索分子靶向治疗的可能性开始，并逐一研究PPO基因与其它腺癌如肺癌、胰腺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、胆管癌、前列腺癌、卵巢癌、子宫癌等的关系。在分子、细胞、器官和整体等不同层面作深入细致的系列研究。通过大量的病理学实验表明，该基因只在腺癌中表达。因此，该基因可以作为腺癌的特异性抗体，应用于生物试剂的制备。具体应用时，以PPO基因制备的单克隆抗体，用于制备腺癌诊断的试剂或试剂盒。对比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次揭示了PPO基因用于制备腺癌诊断试剂的新用途，经过实验验证，PPO基因仅在腺癌中有表达，是一种腺癌的特异性基因，将有助于提高人们对腺癌的发生、发展规律，细胞的增殖、分化的调控机制的认识，将为腺癌病因的解析及治疗提供帮助。目前，人类癌症中三分之二是腺癌，腺癌特异性抗体的应用，将为癌症诊断和将来分子靶向性治疗提供帮助。附图说明附图1是PPO基因在卵巢癌、肺腺癌、骨肉瘤细胞株中的表达情况。附图2是PPO基因在肺腺癌、肺鳞癌和小细胞癌中的表达情况。附图3是PPO基因在卵巢囊肿、粘液性囊腺瘤、粘液性囊腺癌和浆液性乳头状囊腺癌中的表达情况。附图4是PPO基因在子结肠癌、胃癌、胆管癌、肝癌、食管癌中的表达情况。附图5是PPO基因在乳腺癌、子宫内膜癌和前列腺癌中的表达情况。附图6是PPO基因在甲状腺癌中的表达情况。附图7是PPO基因在软骨肉瘤、骨髓瘤、孤立性浆细胞肉瘤、骨巨细胞瘤、恶性神经肉瘤、原始神经外胚瘤、恶性纤维组织纤组织细胞瘤、恶性淋巴瘤、脂肪瘤和骨组织恶性纤维细胞瘤的表达情况。附图8是提取肝癌和肺腺癌患者的血液中淋巴细胞，用蛋白免疫沉淀可以找到PPO蛋白的表达。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所限定的范围。下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。实施例1：PPO基因在卵巢癌、肺腺癌、骨肉瘤细胞株中的表达实验。详见附图1。实施例2：P本文档来自技高网...

【技术保护点】
PPO基因在制备腺癌诊断试剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.PPO基因在制备腺癌诊断试剂中的应用。2.根据权利要求1所述PPO基因在制备腺癌诊断试剂中的应用，其特征在于：具体应用时，以PPO基因制备的单克隆抗体用于制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉想，刘思源，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三零九医院，
类型：发明
国别省市：北京,11