一种中药组合物的指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术提供一种中药组合物的指纹图谱建立方法，以及采用所述方法建立的指纹图谱来检测所述中药组合物的成分的方法。所述中药组合物的原料组成为：狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎、牛大力、蒸女贞子、蒸桑寄生、盐水制菟丝子、制延胡索、两面针、制乳香和制没药；所述指纹图谱的建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物和药材的保留时间；其中所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相由乙腈和重量百分浓度0.1％的磷酸水溶液组成，0～170min乙腈在流动相中的体积百分比由5％匀速地递增至90％；流速1ml/min；柱温为30℃；紫外检测波长为254nm。

Method for establishing fingerprint of Chinese medicinal composition

The present invention provides a fingerprint construction method of traditional Chinese medicine composition, and a method for detecting the composition of the traditional Chinese medicine composition by using the fingerprint established by the method. The Chinese medicine composition of the raw materials are: Rhizoma cibotii, Caulis Spatholobi, Rosa, waras, black tiger, cattle vigorously, steamed Ligustrum lucidum, steamed mistletoe, salt water dodder, Rhizoma Corydalis, Radix zanthoxyli, prepared frankincense and myrrh system; the establishing method of fingerprint including using HPLC detection of the retention time of all kinds of Chinese medicinal composition and medicinal compounds; wherein the HPLC conditions are as follows: Eighteen alkyl silane bonded silica stationary phase; the mobile phase from the aqueous solution of phosphoric acid group into acetonitrile and weight percentage concentration of 0.1%, 0 ~ 170min in the mobile phase of acetonitrile percentage by volume 5% speed is increased to 90% 1ml/min; flow rate; column temperature is 30 DEG C; the UV detection wavelength was 254nm.

【技术实现步骤摘要】
一种中药组合物的指纹图谱的建立方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种中药组合物的指纹图谱的建立方法，所述中药组合物为舒筋健腰丸。
技术介绍
基于中医药理论的中药组合物(中成药)，药味组成一般比较繁多；在药物组合物的制备过程中，不同成分之间还可能相互发生反应，导致药物组合物的成分更加复杂。仅靠定性或定量检测其中某个或某几个成分，由于信息量有限，难以体现组合物作为整体的化学特征。随着现代分析技术的发展，指纹图谱已经成为评价多组分中药组合物样品的整体质量的有效手段。美国食品药品管理局(FDA)在植物药制品指导原则中允许申报者提供产品的色谱指纹图谱资料,德国药用植物学会、英国草药典、印度草药典以及加拿大药用及芳香植物学会也都将指纹图谱作为质量控制标准的内容之一。因此，建立指纹图谱对于中药组合物的质量控制和研究具有重要意义。中药组合物指纹图谱的建立，应以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，体现系统性、特征性和稳定性三个基本原则。才能保证指纹图谱的标准化、规范化、客观化，从而便于推广和应用。高效液相色谱法(HPLC)具有分离效率高，分析速度快，定量精密度高，检测器种类多，稳定性好等特点。不受样品挥发性和热稳定性的限制，样品中大多数成分均可在高效液相色谱仪上进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。2010版《中国药典》收载了中成药品种共计1069个，但是仅收载了高效液相指纹图谱9项，其中中成药仅6项。可见中成药指纹图谱的建立，绝非易事，需要解决众多的技术问题，花费大量的劳动。舒筋健腰丸，由狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎、牛大力、女贞子、桑寄生、菟丝子、延胡索、两面针、乳香、没药等13味中药材组成，具有补益肝肾、强健筋骨、驱风除湿、活络止痛的作用，用于腰膝酸痛、坐骨神经痛。舒筋健腰丸最早收载于《广东省药品标准》(1985年版)第243页，现执行标准为《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第十二册(1997年编，第194页)，标准编号：WS3-B-2441-97，标准中仅有显微鉴别、化学鉴别、薄层鉴别(狗脊、没药)。上述药品标准是对个别成分进行的鉴别，理化反应仅表明含生物碱类成分，无法全面表征舒筋健腰丸的化学特征和质量情况。因此，有必要研究如何建立舒筋健腰丸的指纹图谱，从而更好地保证临床用药的质量和治疗效果。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的一个目的在于提供一种中药组合物指纹图谱的建立方法，其中所述中药组合物为舒筋健腰丸。本专利技术利用HPLC-UV技术，建立了舒筋健腰丸指纹图谱共有模式，标定了40个共有峰，其中，确定了6个峰的化学成分归属：原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲、乙酰日本南五味子素甲和(2′S)-南五味子木质素；同时可以鉴别出处方中狗脊、千斤拔、女贞子、两面针、没药、黑老虎、乳香等7味药材的特有峰，从而可以用这些指标成分来检测舒筋健腰丸中上述各味药材的投料情况，并且提供了比现有技术的检测方法更深层次和更全面的质量评价依据。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用了如下的技术方案：一种中药组合物的指纹图谱建立方法，所述中药组合物以狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎、牛大力、蒸女贞子、蒸桑寄生、盐水制菟丝子、制延胡索、两面针、制乳香和制没药为原料，通过本领域常用的方法，与药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂；所述指纹图谱建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间，其中所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相由乙腈和体积百分浓度0.1％的磷酸水溶液组成，0～170min乙腈在流动相中的体积百分比由5％匀速地递增至90％；流速1ml/min；柱温为30℃；紫外检测波长为254nm。优选的，所述指纹图谱建立方法还包括通过以下方法制备供试品溶液：取所述中药组合物5g，粉碎，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，超声30min，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。优选的，所述指纹图谱建立方法还包括通过如下方法制备对照品溶液：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲、乙酰日本南五味子素甲、(2′S)-南五味子木质素对照品，加甲醇制成浓度为原儿茶酸90μg/ml、原儿茶醛30μg/ml、特女贞苷50μg/ml、日本南五味子素甲20μg/ml、乙酰日本南五味子素甲20μg/ml、(2′S)-南五味子木质素40μg/ml的混合对照品溶液，即得。作为一个优选的实施方式，本专利技术提供上述中药组合物的指纹图谱建立方法，具体的操作步骤包括：1)对照品溶液的制备：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲、乙酰日本南五味子素甲、(2′S)-南五味子木质素对照品，加甲醇制成浓度为原儿茶酸90μg/ml、原儿茶醛30μg/ml、特女贞苷50μg/ml、日本南五味子素甲20μg/ml、乙酰日本南五味子素甲20μg/ml、(2′S)-南五味子木质素40μg/ml的混合对照品溶液，即得；2)供试品溶液的制备：取所述中药组合物5g，粉碎，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，超声30min，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，记录170min内的色谱图，得到指纹图谱：色谱柱：WatersAtlantis色谱柱，250×4.6mm，固定相平均粒径5μm；流动相：乙腈-体积百分浓度0.1％的磷酸水溶液，0～170min乙腈在流动相中的体积百分比由5％匀速地递增至90％；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；紫外检测波长：254nm。优选的，上述指纹图谱建立方法，建立的指纹图谱包括原儿茶酸吸收峰，并以原儿茶酸吸收峰为参照。更优选的，上述指纹图谱建立方法，建立的指纹图谱以原儿茶酸吸收峰为参照，还包括原儿茶醛吸收峰、特女贞苷吸收峰、日本南五味子素甲、乙酰日本南五味子素甲、或(2′S)-南五味子木质素吸收峰中的一个或多个，相对保留时间分别为：原儿茶醛吸收峰：1.348±0.13％，特女贞苷吸收峰：2.870±0.05％，日本南五味子素甲吸收峰：7.423±0.02％，乙酰日本南五味子素甲：8.185±0.02％，(2′S)-南五味子木质素吸收峰：10.145±0.02％。优选的，上述指纹图谱建立方法中，所述的中药组合物的原料由如下重量份的药材组成：狗脊600重量份，金樱子192重量份，鸡血藤360重量份，千斤拔144重量份，黑老虎360重量份，牛大力240重量份，蒸女贞子30重量份，蒸桑寄生180重量份，盐水制菟丝子30重量份，制延胡索26重量份，两面针26重量份，制乳香12重量份，制没药20重量份。还优选的，所述中药组合物为丸剂。更优选的，所述中药组合物为舒筋健腰丸，通过如下方法制备：1)准备如下重量份的药材：狗脊600重量份，金樱子192重量份，鸡血藤360重量份，千斤拔144重量份，黑老虎360重量份，牛大力240重量份，蒸女贞子30重量份，蒸桑寄生180重量份，盐水制菟丝子30重量份，制延胡索26重量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中药组合物的指纹图谱建立方法，所述中药组合物以狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎、牛大力、蒸女贞子、蒸桑寄生、盐水制菟丝子、制延胡索、两面针、制乳香和制没药为原料，通过本领域常用的方法，与药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂；所述指纹图谱建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间，其中所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相由乙腈和体积百分浓度0.1％的磷酸水溶液组成，0～170min乙腈在流动相中的体积百分比由5％匀速地递增至90％；流速1ml/min；柱温为30℃；紫外检测波长为254nm。

【技术特征摘要】
1.一种中药组合物的指纹图谱建立方法，所述中药组合物以狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎、牛大力、蒸女贞子、蒸桑寄生、盐水制菟丝子、制延胡索、两面针、制乳香和制没药为原料，通过本领域常用的方法，与药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂；所述指纹图谱建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间，其中所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相由乙腈和体积百分浓度0.1％的磷酸水溶液组成，0～170min乙腈在流动相中的体积百分比由5％匀速地递增至90％；流速1ml/min；柱温为30℃；紫外检测波长为254nm。2.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，还包括通过以下方法制备供试品溶液：取所述中药组合物5g，粉碎，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，超声30min，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.根据权利要求1或2所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，还包括通过如下方法制备对照品溶液：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲、乙酰日本南五味子素甲、(2′S)-南五味子木质素对照品，混合，加甲醇制成浓度为原儿茶酸90μg/ml、原儿茶醛30μg/ml、特女贞苷50μg/ml、日本南五味子素甲20μg/ml、乙酰日本南五味子素甲20μg/ml、(2′S)-南五味子木质素40μg/ml的混合对照品溶液，即得。4.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，具体的操作步骤包括：1)对照品溶液的制备：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲、乙酰日本南五味子素甲、(2′S)-南五味子木质素对照品，混合，加甲醇制成浓度为原儿茶酸90μg/ml、原儿茶醛30μg/ml、特女贞苷50μg/ml、日本南五味子素甲20μg/ml、乙酰日本南五味子素甲20μg/ml、(2′S)-南五味子木质素40μg/ml的溶液，即得；2)供试品溶液的制备：取所述中药组合物5g，粉碎，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，超声30min，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，记录170min内的色谱图，得到指纹图谱：色谱柱：WatersAtlantis色谱柱，250×4.6mm，固定相平均粒径5μm；流动相：乙腈-体积百分浓度0.1％的磷酸水溶液，0～170min乙腈在流动相中的体积百分比由5％匀速地递增至90％；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；紫外检测波长：254nm。5.根据权利要求1至4中任一项所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，建立的指纹图谱包括原儿茶酸吸收峰，并以原儿茶酸吸收峰为参照；优选的，建立的指纹图谱以原儿茶酸吸收峰为参照，还包括原儿茶醛吸收峰、特女贞苷吸收峰、日本南五味子素甲、乙酰日本南五味子素甲、或(2′S)-南五味子木质素吸收峰中的一个或多个，相对保留时间分别为：原儿茶醛吸收峰：1.348±0.13％，特女贞苷吸收峰：2.870±0.05％，日本南五味子素甲吸收峰：7.423±0.02％，乙酰日本南五味子素甲：8.185±0.02％，(2′S)-南五味子木质素吸收峰：10.145±0.02％。6.根据权利要求1至5中任一项所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，所述的中药组合物的原料由如下重量份的药材组成：狗脊600重量份，金樱子192重量份，鸡血藤360重量份，千斤拔144重量份，黑老虎360重量份，牛大力240重量份，蒸女贞子30重量份，蒸桑寄生180重量份，盐水制菟丝子30...

【专利技术属性】
技术研发人员：何风雷，王亚琦，杨能英，彭富全，
申请(专利权)人：广州白云山陈李济药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44