一种检测益心复脉颗粒中153种农药残留的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测益心复脉颗粒中153种农药残留的方法，该方法为液相-质谱联用法，该方法包括以下步骤：供试品溶液的制备、基质混合对照品工作溶液的制备以及使用高效液相色谱-质谱进行检测，其中所述供试品溶液的制备包括以下步骤：益心复脉颗粒粉碎，称取1.8-2.2g益心复脉颗粒，加入80-120μL浓度为5μg/mL的内标溶液，然后加入8-12mL水浸润28-32min后，加入8-12mL含0.08-0.12％醋酸的乙腈溶液，于漩涡混合振荡仪上以4000-6000r/min速率振荡1.8-2.2min，加入3-5g无水硫酸镁和0.08-1.2g醋酸钠，涡旋振摇4-6min，然后以4000-6000r/min的速度离心4-6min，取上清液0.8-1.2mL，加入到预先装有140-460mg无水硫酸镁和23-27mg PSA、48-52mg C18、2.3-2.7mg GCB的离心管中，涡旋振摇2-4min后，以4000-6000r/min的速度离心4-6min，取上清液，经0.2-0.24μm滤膜过滤，即得。

Method for detecting 153 pesticide residues in Yixin Tongmai granule

The invention relates to a method for the detection of 153 kinds of compound Yixin granule in pesticide residues, the method for liquid chromatography mass spectrometry, the method comprises the following steps: sample solution preparation, matrix mixed standard solution preparation and the use of high performance liquid chromatography - mass spectrometry for detection. The sample solution preparation comprises the following steps: yixinfumai granules crushed, weigh 1.8-2.2g yixinfumai granules, adding 80-120 L concentration of 5 g/mL internal standard solution, then add 8-12mL water infiltration 28-32min after adding acetonitrile solution containing 8-12mL 0.08-0.12% acetic acid, mixed in the whirlpool based on 4000-6000r/min oscillator rate oscillation 1.8-2.2min, Magnesium Sulfate and 0.08-1.2g added 3-5g anhydrous sodium acetate, vortex shaking 4-6min, then to 4-6min 4000-6000r/min speed centrifugation, the supernatant was added to the pre 0.8-1.2mL. Centrifugal first with 140-460mg anhydrous PSA, 48-52mg Magnesium Sulfate and 23-27mg C18, 2.3-2.7mg GCB tube, the vortex shaker 2-4min, speed centrifugal 4-6min, 4000-6000r/min supernatant, 0.2-0.24 M filter membrane, i.e..

【技术实现步骤摘要】
一种检测益心复脉颗粒中153种农药残留的方法
本专利技术涉及一种中药制剂中农药残留物质的检测方法，特别涉及一种检测益心复脉颗粒中153种农残的方法。
技术介绍
药物首要的质量特征是安全性。中药的安全性除了自身的物质基础影响外，就是生长、加工、储存、生产等环节中引入的外来有害物质，残留农药就是其中之一。所谓农药残留：指受生长环境的影响或者在中药种植、加工、贮藏过程中使用农药后，残留在药用部位中的农药母体以及有毒理学意义的特殊衍生物，如降解或转化产物、代谢物以及工业杂质等。以农药残留为代表的外源性有害残留物是影响中药质量及安全性的重要因素，已成为中药走向国际市场的瓶颈之一，严重滞后了我国中药材现代化、国际化的步伐。因此，为了保证药品的安全性，必须对农药残留的检测和控制予以足够的重视。益心复脉颗粒是天津天士力(辽宁)制药有限责任公司出品的药品，其功能主治为益气养阴，活血复脉；用于气阴两虚，心血内阻，胸痹心痛，胸闷不舒，心悸脉结代。具有载药量高、起效快、无异味、携带方便等特性。益心复脉颗粒是由生晒参、黄芪、麦冬、五味子、丹参、川芎6味药材组成的复方制剂，其中生晒参：具有大补元气，益血，养心安神的作用。生晒参能提高脑、体力活动能力和免疫功能，增强抗应激、抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、益心、复脉、安神生津、补肺健脾。黄芪：有补气升阳、生血行滞之力，现在药理研究发现，黄芪还可清除氧自由基，减轻机体脂质过氧化损伤。麦冬：具有甘寒清润，善清心肺之热而养阴除烦，兼可清润胃肠而止渴润燥。抗实验性心律失常、增加冠脉流量。五味子：是一种具有辛、甘、酸、苦、咸五种药性。选用传统正品北五味入药，品质优良。收敛固涩，益气生津，补肾宁心。用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗，盗汗，津伤口渴，短气脉虚，内热消渴，心悸失眠。丹参：有活血祛瘀之功，不仅可以抑制血小板聚集，抑制血栓形成而且所含丹参素还可抑制胆固醇的合成、抗细胞氧化。川芎：活血行气，祛风止痛。可提高血小板中cAMP含量，降低TXA2活性；降低血小板表面活性、抑制血小板聚集、使已聚集血小板解聚。益心复脉颗粒的药物活性成分很多，主要包括：黄芪甲苷，川芎嗪，三七皂苷，丹参酮等。本专利技术意在通过在原有质量控制的基础上，增加了农药残留的检测。在国际市场上，我国许多出国产品被重金属、农药残留等所谓的绿色壁垒挡住，中药安全性问题成为制约我国中医药发展及国际化的瓶颈。中药中农药残留一方面是药材生长过程中从环境中如土壤、水源、空气中摄入，另一个原因是农药的不合理使用引起的，如过量使用化学农药或使用已禁用的农药等，其次中药材储存时喷撒农药或中用农药熏蒸以防虫、霉也是污染的原因，另外炮制加工过程中辅料也是引入农药污染的途径之一。《中国药典》2005年版中农药限量仅规定黄芪和刚才9种有机氯农药，刚才、黄芪、丹参、白芍、西洋参、金银花等六种药材五种重金属，2010年版药典有些增加，但也不多。涉及的农药残留包括有机氯类农药残留量的测定、有机磷农药的测定、拟除虫菊酯类农药残留量测定。农药残留的检测方法主要分为前处理和检测两部分。其中的前处理又分为提取、净化，其中提取方法应用较多的是振荡法、组织捣碎法、超声法，其中振荡法和超声法最为常见，提取的溶剂则要考虑纯度和极性问题，纯度方面，针对农药残留分析中所应用的溶剂较为特殊，必须经过处理并在色谱条件下检验不含杂质峰，极性方面，采用相似相容原理来选择溶剂，通常情况下，极性小的农药应选择低极性溶剂提取，如六六六、滴滴涕等应选用石油醚、正己烷等溶剂，极性较强的农药，如有机磷、拟除虫菊酯类农药应选择二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮等极性较大的溶剂。目前，中药中农药残留方法大多采用传统的提取和净化方法，溶剂消耗量大，操作过程繁琐，分析周期长，且易造成环境污染。中药相对于其他作物而言，其成分的特殊性和复杂性对前处理的要求更为严格，一些其他领域较为先进的前处理技术不能直接应用进来。美国农业化学协会(AOAC)制定的方法为指导分析中药茴香中有机氯、有机磷、拟除虫菊酯等农药，认为一般的多种类农药残留前处理方法不能无条件应用于特定中药，需要两种以上的方法方能实现准确定量，然而，这无疑增加了实验的工作量和成本，与农药残留分析的发展趋势背道而驰。QuEChERS(发音为Catchers)是Quick(快速)、Easy(简单)、Cheap(便宜)、Effective(高效)、Rugged(耐用)和Safe(安全)的缩写，它是用于高含水量食物中农药多残留检测的一种样品处理和净化技术。自2003年Anastassiades和Lehotay等人开发并公布了这个方法以来，QuEChERS大受欢迎。由于它简化了以前繁杂的萃取步骤并且扩大了所萃取农残的范围，因此成为食品分析方法中的一种选择。QuEChERS被认为是高含水量(80-95％)基质中弄残分析的一种多种类、多残留检测方法由于样品所具有的多种化学性质会与农药残留的性质发生冲突，食品和环境样品中的农药多残留分析很容易出现一些分离上的问题，而且，复杂的样品基质中，可能存在大量的叶绿素、脂类、甾体和其他化合物，会严重干扰样品的分析。针对益心复脉颗粒，专利技术人提供了应用液相色谱串联质谱的方法检测益心复脉颗粒中153种农残的方法，该方法灵敏度高、准确、可靠。通过本专利技术的检测方法可以更加严格的控制产品质量，更加严格的控制产品质量，确保益心复脉颗粒的品质和提高安全性。
技术实现思路
本专利技术提供的一种应用液相-质谱联用检测益心复脉颗粒中153种农药残留的方法，该方法包括以下步骤：供试品溶液的制备、基质混合对照品工作溶液的制备以及使用高效液相色谱-质谱进行检测。本专利技术所述的方法中：所述153种农药包括：fenthion-oxon-sulfone(氧倍硫磷砜)、maloxon(马拉氧磷)、bitertanol(联苯三唑醇)、thiamethoxam(噻虫嗪)、thiabendazole(噻菌灵)、admire(吡虫啉)、Fenamiphos(苯线磷)、orthene(乙酰甲胺磷)、fenthion(倍硫磷)、fenthion-oxon(氧倍硫磷)、iprodione(异菌脲)、etrimfos(乙嘧硫磷)、phosmet(亚胺硫磷)、ametryn(莠灭净)、disulfoton(乙拌磷)、diflubenzuron(除虫脲)、chlorophos(敌百虫)、pirimicarb(抗蚜威)、cyprodinil(嘧菌环胺)、pyriproxyfen(吡丙醚)、pretilachlor(丙草胺)、fenchlorphos-oxon(氧皮蝇磷)、ethion(乙硫磷)、monocrotophos(久效磷)、hexazinone(环嗪酮)、propanil(敌稗)、fensulfothion(丰索磷)、mercaptodimethur(灭虫威)、chinomethionate(灭螨猛)、dimethenamid(甲酚噻草胺)、chloantraniliprole(氯虫酰胺)、imazalil(烯菌灵)、ethiofencarb(乙硫苯威)、promecarb(猛杀威)、phoratesulfone(甲拌磷砜)、tolylfluanid(甲苯氟磺胺)、oxadia本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测益心复脉颗粒中153种农药残留的方法，该方法为液相‑质谱联用法，所述153种农药为氧倍硫磷砜、马拉氧磷、联苯三唑醇、噻虫嗪、噻菌灵、吡虫啉、苯线磷、乙酰甲胺磷、倍硫磷、氧倍硫磷、异菌脲、乙嘧硫磷、亚胺硫磷、莠灭净、乙拌磷、除虫脲、敌百虫、抗蚜威、嘧菌环胺、吡丙醚、丙草胺、氧皮蝇磷、乙硫磷、久效磷、环嗪酮、敌稗、丰索磷、灭虫威、灭螨猛、甲酚噻草胺‑p、氯虫酰胺、烯菌灵、乙硫苯威、猛杀威、甲拌磷砜、甲苯氟磺胺、恶草酮、肟菌酯、灭锈胺、氟胺氰菊酯、马拉硫磷、磷胺、二嗪磷、甲胺磷、咪酰胺、氧倍硫磷亚砜、灭蚜磷、毒虫畏、对氧磷(乙基)、乙拌磷砜、丙硫磷、苯线磷亚砜、甲拌磷、甲基嘧啶磷、甲霜灵、三唑磷、茚虫威、异柳磷、蝇毒磷、杀扑磷、速灭威、倍硫磷砜、百治磷、灭多威、醚菊酯、苯霜灵、吡氟氯禾灵、戊唑醇、灭线磷、敌草胺、除线磷、地虫磷、胺菊酯、益棉磷、喹硫磷、异丙威、烯草酮、氧乐果、辛硫磷、抑食肼、倍硫磷亚砜、甲基立枯磷、甲草胺、保棉磷、胺丙畏、丙溴磷、苯硫磷、甲氧虫酰肼、精吡氟禾草灵、残杀威、甲萘威、虫酰肼、伏杀硫磷、丁草胺、虫螨畏、稻瘟灵、氯苯嘧啶醇、啶酰菌胺、氟硅唑、啶虫脒、莠去津、腈菌唑、氟酰胺、哒螨灵、丙环唑、苯醚甲环唑、克瘟散、百克敏、稻丰散、噻嗪酮、多效唑、三环唑、噻唑膦、内吸磷‑O‑S、乐果、唑螨酯、恶霜灵、胡椒基丁醚、治螟磷、丙烯菊酯、己唑醇、联苯肼酯、腈嘧菌酯、噻虫啉、嘧啶磷、N‑去乙基甲基嘧啶磷、杀线威、3‑羟基‑克百威、氰氟草酯、烯唑醇、腈苯唑、甲基异柳磷、克百威、涕灭威亚砜、涕灭威砜、硫线磷、氧丰索磷、氧甲拌磷砜、炔螨特、草达灭、甲基对氧磷、呋线威、乙拌磷亚砜、速灭磷、涕灭威、氧丰索磷砜、多菌灵、氧甲拌磷、异丙甲草胺、丰索磷砜、苯线磷砜、草克净、氯唑磷和氘代莠去津。...

【技术特征摘要】
1.一种检测益心复脉颗粒中153种农药残留的方法，该方法为液相-质谱联用法，所述153种农药为氧倍硫磷砜、马拉氧磷、联苯三唑醇、噻虫嗪、噻菌灵、吡虫啉、苯线磷、乙酰甲胺磷、倍硫磷、氧倍硫磷、异菌脲、乙嘧硫磷、亚胺硫磷、莠灭净、乙拌磷、除虫脲、敌百虫、抗蚜威、嘧菌环胺、吡丙醚、丙草胺、氧皮蝇磷、乙硫磷、久效磷、环嗪酮、敌稗、丰索磷、灭虫威、灭螨猛、甲酚噻草胺-p、氯虫酰胺、烯菌灵、乙硫苯威、猛杀威、甲拌磷砜、甲苯氟磺胺、恶草酮、肟菌酯、灭锈胺、氟胺氰菊酯、马拉硫磷、磷胺、二嗪磷、甲胺磷、咪酰胺、氧倍硫磷亚砜、灭蚜磷、毒虫畏、对氧磷(乙基)、乙拌磷砜、丙硫磷、苯线磷亚砜、甲拌磷、甲基嘧啶磷、甲霜灵、三唑磷、茚虫威、异柳磷、蝇毒磷、杀扑磷、速灭威、倍硫磷砜、百治磷、灭多威、醚菊酯、苯霜灵、吡氟氯禾灵、戊唑醇、灭线磷、敌草胺、除线磷、地虫磷、胺菊酯、益棉磷、喹硫磷、异丙威、烯草酮、氧乐果、辛硫磷、抑食肼、倍硫磷亚砜、甲基立枯磷、甲草胺、保棉磷、胺丙畏、丙溴磷、苯硫磷、甲氧虫酰肼、精吡氟禾草灵、残杀威、甲萘威、虫酰肼、伏杀硫磷、丁草胺、虫螨畏、稻瘟灵、氯苯嘧啶醇、啶酰菌胺、氟硅唑、啶虫脒、莠去津、腈菌唑、氟酰胺、哒螨灵、丙环唑、苯醚甲环唑、克瘟散、百克敏、稻丰散、噻嗪酮、多效唑、三环唑、噻唑膦、内吸磷-O-S、乐果、唑螨酯、恶霜灵、胡椒基丁醚、治螟磷、丙烯菊酯、己唑醇、联苯肼酯、腈嘧菌酯、噻虫啉、嘧啶磷、N-去乙基甲基嘧啶磷、杀线威、3-羟基-克百威、氰氟草酯、烯唑醇、腈苯唑、甲基异柳磷、克百威、涕灭威亚砜、涕灭威砜、硫线磷、氧丰索磷、氧甲拌磷砜、炔螨特、草达灭、甲基对氧磷、呋线威、乙拌磷亚砜、速灭磷、涕灭威、氧丰索磷砜、多菌灵、氧甲拌磷、异丙甲草胺、丰索磷砜、苯线磷砜、草克净、氯唑磷和氘代莠去津。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：供试品溶液的制备、基质混合对照品工作溶液的制备以及使用高效液相色谱-质谱进行检测。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中所述供试品溶液的制备包括以下步骤：益心复脉颗粒粉碎，称取1.8-2.2g益心复脉颗粒，加入80-120μL浓度为5μg/mL的内标溶液，然后加入8-12mL水浸润28-32min后，加入8-12mL含0.08-0.12％醋酸的乙腈溶液，于漩涡混合振荡仪上以4000-6000r/min速率振荡1.8-2.2min，加入3-5g无水硫酸镁和0.08-1.2g醋酸钠，涡旋振摇4-6min，然后以4000-6000r/min的速度离心4-6min，取上清液0.8-1.2mL，加入到预先装有140-460mg无水硫酸镁和23-27mgPSA、48-52mgC18、2.3-2.7mgGCB的离心管中，涡旋振摇2-4min后，以4000-6000r/min的速度离心4-6min，取上清液，经0.2-0.24μm滤膜过滤，即得。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括以下步骤：益心复脉颗粒经粉碎机粉碎，过2号筛，称取2g益心复脉颗粒，加入100μL浓度为5μg/mL的内标溶液，然后加入10mL水浸润30min后，准确加入10mL含0.1％醋酸的乙腈溶液，于漩涡混合振荡仪上以5000r/min速率振荡2min，加入4g无水硫酸镁和1g醋酸钠，涡旋振摇5min，然后以5000r/min的速度离心5min，取上清液1mL，加入到预先装有150mg无水硫酸镁和25mgPSA、50mgC18、2.5mgGCB的离心管中，涡旋振摇3min后，以5000r/min的速度离心5min，取上清液，经0.22μm滤膜过滤，得到滤液。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述基质混合对照品工作溶液的制备包括：各农药单标准储备液的配制：取153种农药标准品分别用乙腈溶解，配成质量浓度为0.08-0.12g/L的各农药单标准储备液；混合储备溶液：分别吸取各农药单标准储备液用0.04-0.06％乙酸乙腈溶液稀释成各农药组分质量浓度均为0.8-1.2mg/L的混合储备溶液；混合标准工作溶液：取适量的内标溶液和混合储备溶液，得到混合农药的质量浓度分别为1、2、5、10、20、50、100μg/L的标准工作溶液；基质混合对照品工作溶液：按照如权利要求3所述的供试品溶液的制备步骤提取不含目标化合物的“空白”样品，将提取液作为溶剂，按照各农药单标准储备液、混合储备溶液、混合标准工作溶液的步骤配制，其中各农药单标准储备液的乙腈用溶剂替换，其余步骤同上，最终得到基质混合对照品工作溶液。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述基质混合对照品工作溶液的制备包括：各农药单标准储备液的配制：取农药标准品10mg，用乙腈溶解，配成质量浓度为1.0g/L的标准储备液，储存于4℃冰箱中备用；混合标准溶液：分别准确吸取一定体积的各农药单标准储备液，用0.05％乙酸乙腈稀释，配制成各农药组分质量浓度均为1.0mg/L的混合储备溶液，于-20℃冰箱中保存；混合标准工作溶液：取适量的内标溶液和混合标准溶液，得到混合农药的质量浓度分别为1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准工作溶液；基质混合对照品工作溶液：按照如权利要求4所述的供试品溶液的制备步骤提取不含目标化合物的“空白”样品，将提取液作为溶剂，按照各农药单标准储备液、混合储备溶液、混合标准工作溶液的步骤配制，其中各农药单标准储备液的乙腈用溶剂替换，其余步骤同上，最终得到基质混合对照品工作溶液。7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中所述UFLC-MS/MS(高效液相色谱-质谱)条件包括色谱条件和质谱条件，其中色谱条件为：色谱柱：AcquityUPLCHSST3柱，80-120mm×2-2.2mm，1.7-1.9μm及2-2.2mm，0.1-0.3μm的WatersIn-LineFilter；流速：0.25～0.4mL/min；进样体积：1.0～3.0μL；流动相A：0.08-0.12％(v/v)甲酸水，流动相B：乙腈；梯度洗脱程序：0～1.0min，95％A；1.0～4.0min，95％A～40％A；4.0～14min，40％A～0％A；14.0～15.0min，0％A；15.0～18min，95％A；质谱条件为：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正离子扫描；检测方式：按保留时间的多反应监测(ScheduledMRM)模式；离子化电压(IS)：5000～6000V；雾化温度(TEM)：500～600℃；气帘气(CUR)：30～40psi；喷雾气(Gas1)：50～60psi；辅助加热气(Gas2)：50～60psi；碰撞气压力(CAD)：medium。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，色谱条件和质谱条件为色谱柱：AcquityUPLCHSS...

【专利技术属性】
技术研发人员：佟玲，孟文婷，刘洁，张永志，李东翔，周水平，
申请(专利权)人：天士力制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12