一种孔雀草提取物、制备方法及其在制备抗癌药物中应用技术

本发明专利技术公开了一种孔雀草总酚酸提取物及其在制备抗癌药物中的应用。按照下述(1)或(2)中的方法制备：(1)用乙醇水溶液对孔雀草进行提取至少一次得提取液；浓缩所述提取液得浓缩液；所述浓缩液经正丁醇萃取后得萃取液即为所述孔雀草总酚酸提取物；(2)用乙醇水溶液对孔雀草进行提取至少一次得提取液；浓缩所述提取液得浓缩液；所述浓缩液用吸附树脂柱分离，洗脱剂依次为水、30％-70％乙醇水溶液和95％乙醇水溶液；收集30％-70％乙醇水溶液的洗脱液即为所述孔雀草总酚酸提取物；所述吸附树脂为HPD300和HPD700大孔吸附树脂中任一种。本发明专利技术提供的孔雀草总酚酸提取物的抗癌活性大于其中的主要单体成分。

Peacock grass extract, preparation method and application thereof in preparing anticancer medicine

The invention discloses a total phenolic acid extract of Tagetes and its application in preparing anticancer drugs. According to the (1) or (2) for preparing: (1) the peacock grass extract at least once to extract with ethanol water solution; concentrating the extract concentrated solution; the concentrated solution by butanol extraction after extraction for total phenolic acid of the peacock grass extract; (2) the peacock grass extract at least once to extract with ethanol water solution; concentrating the extract concentrated solution; the concentrated liquid adsorption resin column, eluting agent in water, 30%-70% aqueous solution of ethanol and 95% ethanol; collecting 30%-70% ethanol water solution to wash off the liquid is the total phenolic acid extract of Tagetes patula; the adsorption resin for any HPD300 and HPD700 macroporous adsorption resin. The anticancer activity of the total phenolic acid extracted from the herb is larger than that of the main monomer component.

【技术实现步骤摘要】
一种孔雀草提取物、制备方法及其在制备抗癌药物中应用
本专利技术涉及一种孔雀草总酚酸提取物及其在制备抗癌药物中的应用。
技术介绍
孔雀草(TagetespatulaL.)又名红黄草、藤菊、法国万寿菊、小万寿菊，为菊科万寿菊属植物，为一年生草本，花期为7月～9月。我国各地均有栽培，是一种常见的观赏花卉。孔雀草有药用和保健作用，其根、花和茎叶均可以入药。具有清热解毒，利湿，止咳和止痛作用。主治风热感冒，咳嗽，百日咳，痢疾，肋腺炎，乳痈，疖肿，牙痛，口腔炎和目赤肿痛。(《全国中草药汇编》编写组，全国中草药汇编[M]；人民卫生出版社，1975年版)。从20世纪80年代开始，人们即开始对孔雀草的化学成分进行研究，分离得到万寿菊素(patuletin)，槲皮万寿菊素(quercetagetin)，槲皮万寿菊甙(quercetagitrin)等黄酮类化合物(国家中医药管理局《中华本草》编委会；中华本草[M]；上海科学技术出版社，1999年版)。目前人们多对孔雀草花卉进行研究，药用价值研究较少。近年来，我们对孔雀草的化学成分进行研究，发现其含有较高含量的咖啡酸、绿原酸和3，5-二咖啡酰基奎宁酸等成分。由于环境污染等原因，癌症目前已成为严重威胁人类健康的疾病之一，已成为我国死亡率最高的疾病之一。我国抗癌临床实践表明西药由于毒副作用较大，不利于长期使用，而中药由于其毒副作用较低，较适合长期服用，已成为抗癌药物的主力军。为了更好地开发和利用孔雀草资源，有必要对孔雀草进行抗癌作用研究。我们研究表明除黄酮类化合物外，一些苯丙素类成分也具有较强活性。因这些物质都含有酚羟基，呈酸性，而统称为总酚酸类物质。我们的试验结果表明总酚酸的抗癌活性较强，强于分离得到的单体化合物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种孔雀草总酚酸提取物、制备方法及其在制备抗癌药物中的应用。本专利技术提供的孔雀草总酚酸提取物，按照下述(1)或(2)中的方法制备：(1)用乙醇水溶液对孔雀草进行提取至少一次得提取液；浓缩所述提取液得浓缩液；所述浓缩液经正丁醇萃取后得萃取液，即为所述孔雀草总酚酸提取物；(2)用乙醇水溶液对孔雀草进行提取至少一次得提取液；浓缩所述提取液得浓缩液；所述浓缩液用大孔吸附树脂分离，洗脱剂依次为水、体积百分含量为30％-70％乙醇水溶液和体积百分含量为95％乙醇水溶液洗脱；收集30％-70％乙醇水溶液的洗脱液即为所述孔雀草总酚酸提取物；所述大孔吸附树脂为HPD100、HPD300和HPD700大孔吸附树脂中任一种。上述的孔雀草为全草，包括根、茎叶和花，提取前应洗净、干燥、粉碎成5mm左右的粉末，以利于提取。上述的提取物中，(1)中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量可为0％-95％，优选60％；(1)和(2)中所述提取可为回流提取；(1)和(2)中所述提取可为2次；(1)和(2)中所述提取的时间可为0.5小时-2小时，优选1小时。上述的提取物中，(1)和(2)中所述浓缩液与所述提取液的体积份数比可为1∶(10-20)，最佳比例为1∶10。上述的提取物中，(1)和(2)中还可包括用石油醚对所述浓缩液进行脱脂的步骤；所述石油醚与所述浓缩液的体积份数比可为1∶(1-2)，优选1∶2。上述的提取物中，(1)中所述正丁醇与所述浓缩液的体积份数比可为1∶(1-3)，优选1∶2，所述正丁醇萃取可为1-4次，优选3次。上述的提取物中，(1)中还可包括将所述萃取液进行浓缩和干燥的步骤；(2)中还可包括将所述洗脱液进行浓缩和干燥的步骤。上述提取物中有绿原酸、咖啡酸、槲皮素和万寿菊素等酚酸类成分。本专利技术还提供了上述提取物在制备抗癌药物中的应用；具体可为在抗胃癌、结肠癌、乳腺癌和肝癌/或肿瘤药物中的应用。本专利技术提供的孔雀草总酚酸提取物的抗癌活性大于其中的主要单体成分(如绿原酸、槲皮素等)。由于酚酸具有较强的抗氧化和免疫增强作用，本专利技术提取物中的总酚酸将在多种机制上发挥其抗癌作用。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、孔雀草总酚酸提取物的制备将粉碎至5mm左右的的孔雀草全草(含根)粉末1kg，用乙醇的体积百分含量为60％的乙醇水溶液回流提取2次，每次用10倍药材体积量的上述乙醇水溶液回流提取2小时，合并提取液；回收乙醇水溶液，浓缩得浓缩液，浓缩液与回收的乙醇水溶液的体积份数比为1∶10；先用石油醚对上述浓缩液进行脱脂，其中，石油醚与浓缩液的体积份数比为1∶2；然后经水饱和的等量体积的正丁醇萃取三次(正丁醇与浓缩液的体积份数比为1∶2)，合并萃取液，减压浓缩回收正丁醇得到浸膏；将上述浸膏经减压干燥得孔雀草总酚酸提取物108.5g。测得总酚酸为56.4g，在浸膏中重量百分比为52.0％。采用比色法对上述孔雀草总酚酸提取物的总酚酸进行含量测定，测定方法采用下述文献报道的比色法对总酚酸的含量进行测定：石玉媛，何凡，李莹莹，窦德强，康廷国，董锋.不同产地亚贡叶中总酚酸的含量测定.中华中医药学刊，2010，28(7)：1475-1477。该方法的简要操作过程如下：精密称取一定量的总酚酸提取物，制备样品溶液。精密量取1ml供试品溶液，于25ml量瓶中，加甲醇5ml，加0.3％十二烷基硫酸钠2ml后，然后加0.6％FeCl3.6H2O∶0.9％K3[Fe(CN)6](1∶1，体积比)混合溶液2ml，在暗处放置5min，加0.1mol/lHCl溶液至刻度，在暗处放置20min，以显色剂为空白，以绿原酸为对品，在746nm处测定吸光度。实施例2、孔雀草总酚酸提取物的制备将目数为20目的孔雀草粉末1kg，乙醇的体积百分含量为60％的乙醇水溶液回流提取2次，每次用10倍体积量的上述60％乙醇水溶液提取2小时，合并提取液；回收乙醇溶液，浓缩得浓缩液，浓缩液与回收的乙醇水溶液的体积份数比为1∶10；先用石油醚对上述浓缩液进行脱脂得脱脂液，其中，石油醚与浓缩液的体积份数比为1∶2；脱脂液经已预先处理过的HPD700大孔吸附树脂柱，依次用水、60％的乙醇水溶液和95％的乙醇水溶液进行洗脱，60％的乙醇水溶液洗脱液减压回收乙醇，干燥得总酚酸提取物97.2g，测得总酚酸为56.3g，占所述干燥后的总酚酸提取物的重量百分比为57.9％。实施例3、孔雀草总酚酸提取物的体外抗癌活性研究1、孔雀草抗癌活性部位及活性成分的确定。抗癌活性研究采用体外试验，试验中采用的人肝癌细胞HEPG-2、胃癌细胞BGC823和乳腺癌细胞MDA-MB-435S均购自于中国科学院上海生命科学研究院细胞生物学研究所，5-氟尿嘧啶(5-Fu，美国Amresco公司)。活性成分：对实施例1中的石油醚层提取物、正丁醇层提取物和水层提取物(为正丁醇萃取后剩下的提取物)、实施例2制备的孔雀草总酚酸提取物以及槲皮素、万寿菊素和绿原酸进行体外抗癌活性研究。2、抗癌活性评价方法：(1)试验用主要试剂：RMPI1640培养基(美国GIBCO公司)；胎牛血清(美国Hyclone公司)；胰酶(美国Sigma公司)；噻唑蓝(MTT，美国Sigma公司)；台盼蓝(宝泰克生物科技公司)；二甲基亚砜(DMSO，美国AMRESCO公司)；AnnexinV-FITC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种孔雀草总酚酸提取物，按照下述(1)或(2)中的方法制备：(1)用乙醇水溶液对孔雀草进行提取至少一次得提取液；浓缩所述提取液得浓缩液；所述浓缩液经正丁醇萃取后得萃取液即为所述孔雀草总酚酸提取物。(2)用乙醇水溶液对孔雀草进行提取至少一次得提取液；浓缩所述提取液得浓缩液；所述浓缩液用大孔吸附树脂分离，洗脱剂依次为水、体积百分含量为30％‑70％乙醇水溶液和体积百分含量为95％乙醇水溶液；收集体积百分含量为30％‑70％乙醇水溶液的洗脱液即为所述孔雀草总酚酸提取物；所述大孔吸附树脂为HPD300和HPD700大孔吸附树脂中任一种。

【技术特征摘要】
1.一种孔雀草总酚酸提取物，按照下述(1)或(2)中的方法制备：(1)用乙醇水溶液对孔雀草进行提取至少一次得提取液；浓缩所述提取液得浓缩液；所述浓缩液经正丁醇萃取后得萃取液即为所述孔雀草总酚酸提取物。(2)用乙醇水溶液对孔雀草进行提取至少一次得提取液；浓缩所述提取液得浓缩液；所述浓缩液用大孔吸附树脂分离，洗脱剂依次为水、体积百分含量为30％-70％乙醇水溶液和体积百分含量为95％乙醇水溶液；收集体积百分含量为30％-70％乙醇水溶液的洗脱液即为所述孔雀草总酚酸提取物；所述大孔吸附树脂为HPD300和HPD700大孔吸附树脂中任一种。2.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述的孔雀草为全草，包括根、茎叶和花，提取前应洗净，干燥、粉碎成5mm左右的粉末，以利于提取。3.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：(1)和(2)中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量均为0％-95％；(1)和(2)中所述提取为回流提取；(1)和(2)中所述提取为2次；(1)和(2)中所述提取的时间为0.5小...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡德成，窦德强，
申请(专利权)人：蔡德成，窦德强，
类型：发明
国别省市：辽宁,21