一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法技术
Screening method of Aeromonas hydrophila live vaccine strain
The invention discloses a screening method of a Aeromonas hydrophila live bacterial vaccine strain, belonging to the technical field of aquaculture disease prevention and control. Key points of the technical scheme of the invention is that a live vaccine strains of Aeromonas hydrophila screening method, isolated Aeromonas hydrophila from the breeding environment, and to detect its virulence gene expression, through bacterial challenge and the immune protection rate of animal experiment, screened live vaccine of Aeromonas hydrophila for bacteria. The present invention through a series of primers listed, virulence and gene detection of Aeromonas hydrophila, live vaccine screening has broad application prospects, fish protection can be better against Aeromonas hydrophila infection. The vaccine was prepared using this method, than the inactivated vaccine and attenuated vaccine preparation procedure is more simple, the immune protective effect is better, and the isolated bacteria as the natural bacteria in the aquaculture environment, do not worry about the risk of rejuvenation, atavistic, has a higher security.
【技术实现步骤摘要】
一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法
本专利技术属于水产养殖疾病防控
，具体涉及一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法。
技术介绍
嗜水气单胞菌在河流、湖泊、池塘、食物、动物及人体等自然环境中广泛存在。嗜水气单胞菌属于条件性致病菌，可引起多种水生动物和陆生动物患病，是一种典型的人-畜-鱼共患病病原菌，当环境条件恶劣，机体抵抗力下降可导致鱼类、两栖类、爬行类等冷血动物和哺乳动物发病，引发水生动物细菌性出血病、体表溃疡症以及哺乳动物腹泻等，是鱼类、爬行类和人类的一种致命传染源。目前，水产养殖中用于治疗细菌感染性疾病的药物主要为抗菌药物，但抗菌药物的滥用导致水环境污染、药物残留和细菌耐药性产生的问题，特别是多重耐药菌迅速增加，使其不能有效控制感染，成为细菌性疾病治疗的难题，也加重了水产养殖的成本。细菌疫苗从机体免疫出发，能提高水产动物对病原菌的抵抗力，降低病原菌感染的发生率，有利于感染性疾病的控制。所以，开发相关细菌疫苗一直是水产养殖领域的研究热点。根据制备方式的不同，细菌疫苗可分为灭活疫苗和活菌疫苗。灭活疫苗是用免疫原性强的病原微生物制成的疫苗；活菌疫苗是用弱毒、但免疫原性强的病原微生物，经繁殖后制成的疫苗，也称减毒活疫苗。与灭活疫苗相比，活菌疫苗在免疫保护方面具有较大的优势，如(1)接种途径多样化，不仅可以注射，还可口服、浸泡等；(2)接种数量少，对动物品质影响较小；(3)产生免疫保护的时间短，一般一周内即可产生免疫保护力，而灭活疫苗需要二周以上；(4)免疫效果强且持久，一般只需要接种一次。然而，活菌疫苗有可能出现毒力返强的现象，使其具有一定的风险性...
【技术保护点】
一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法，其特征在于：从养殖环境中分离出嗜水气单胞菌，并检测其毒力基因表达情况，通过细菌攻毒和免疫保护率动物实验，筛选出用于活菌疫苗的嗜水气单胞菌。
【技术特征摘要】
1.一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法，其特征在于：从养殖环境中分离出嗜水气单胞菌，并检测其毒力基因表达情况，通过细菌攻毒和免疫保护率动物实验，筛选出用于活菌疫苗的嗜水气单胞菌。2.根据权利要求1所述的嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法，其特征在于具体过程为：从池塘水样、泥土及发病的黄河鲤和淇河鲫中分离获得9株不同批次的嗜水气单胞菌，将分离出的嗜水气单胞菌直接划线在普通营养琼脂平板上，培养单菌落，分别挑取单菌落于液体LB培养基中培养16h，按照试剂盒说明书提取细菌基因组DNA，与嗜水气单胞菌毒力相关的基因为鞭毛系统fla、粘附素aha、外膜蛋白omp、气溶素aerA、溶血素hlyA、β-溶血素β-hly、细胞兴奋性肠毒素altA、细胞毒性肠毒素act、胞外丝氨酸蛋白酶ahpA、弹性蛋白酶ahpB、脂酶酶lip、III型分泌系统aopB和VI型分泌系统vasH，根据嗜水气单胞菌毒力相关基因的基因序列，利用Primerpremier5.0软件设计引物，通过PCR检测...
【专利技术属性】
技术研发人员：孔祥会，赵贤亮，张杰，李莉，陈鹤，梁旭晨，王莉平，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：河南,41
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