The invention relates to a method for determination of biological activity of CPE+MTT to extract Sonneratia: MTT method: MDCK cells 37 degrees C in entering 5%CO
【技术实现步骤摘要】
拟海桑提取物的生物活性CPE+MTT测定方法
本专利技术属于海洋生物医药
,具体涉及一种拟海桑提取物的生物活性CPE+MTT测定方法。
技术介绍
拟海桑(Sonneratiaparacaseolaris)属于海桑科海桑属,为我国稀有濒危红树植物,仅天然分布于海南岛,分布范围狭窄,个体数量稀少。正处于濒危状态,被列入《中国生物多样性国情研究报告》中国被子植物濒危及稀有种名录。在前期的生物活性筛选实验中,拟海桑的甲醇提取物对小鼠白血病肿瘤细胞株P-388和人肝癌细胞株BEL-7402显示较强的细胞毒活性。因此,本项目选择拟海桑进行细致的化学成分研究,期望发现海洋来源活性先导化合物。拟海桑化学成分的研究只有一篇报道,2012年郭跃伟课题组对采自广东湛江的拟海桑进行化学成分研究,从中分离得到一个新骨架化合物ParacaseolideA(69)是一个二聚-烷基丁内酯类化合物内酯甲素,体外药理活性筛选显示该化合物对细胞周期分裂蛋白25B具有显著的抑制活性。
技术实现思路
本专利技术旨在为拟海桑的提取物提供一种方便可靠的生物活性测定方法。拟海桑提取物的生物活性CPE+MTT测定方法:包括MTT法和CPE法;MTT法:MDCK细胞37ºC下在通入5%CO2和95%氧气,含有10%FBS的RPMI-1640细胞悬浮液中培养。将细胞密度调至5×104个/mL,在96孔细胞培养板中每孔加入200uL培养24h。每孔加入2uL,50ug/mL含药物的甲醇溶液的维持液继续培养72h。然后,每孔加入20uLMTT(5mg/mL的RPMI-1640)溶液,继续培养4h。以DMSO更换 ...
【技术保护点】
拟海桑提取物的生物活性CPE+MTT测定方法,其特征在于,包括MTT法和CPE法;MTT法:MDCK细胞37ºC下在通入5%CO
【技术特征摘要】
1.拟海桑提取物的生物活性CPE+MTT测定方法,其特征在于,包括MTT法和CPE法;MTT法:MDCK细胞37ºC下在通入5%CO2和95%氧气,含有10%FBS的RPMI-1640细胞悬浮液中培养;将细胞密度调至5×104个/mL,在96孔细胞培养板中每孔加入200uL培养24h;每孔加入2uL,50ug/mL含药物的甲醇溶液的维持液继续培养72h;然后,每孔加入20uLMTT(5mg/mL的RPMI-1640)溶液,继续培养4h;以DMSO更换溶解MTT的介质,至Formazan结晶完全溶解;酶标仪测定每孔540nm处的吸光值(OD值);获得剂...
【专利技术属性】
技术研发人员:褚方强,
申请(专利权)人:青岛清泉生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
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