The invention discloses a preparation method of non small cell lung cancer cell antigen pulsed dendritic cell vaccine, which comprises the following steps: whole cell tumor antigen preparation: cell suspension; cell suspension was placed in constant temperature water bath; bath is removed after the cell suspension into 75 85 C ultra low temperature refrigerator, 1H, shaking to 37 DEG C in a water bath, gently, to melt completely, again into the ultra low temperature refrigerator, so repeated 3 times; under the condition of 12000rpm centrifugal 10min by freeze-thaw antigen; heat shock tumor cells; DC cell preparation; DC vaccine preparation. The invention has the advantages of good immunity effect, no side effect, etc..
【技术实现步骤摘要】
一种非小细胞肺癌全细胞抗原树突状细胞瘤苗的制备方法
本专利技术属于肿瘤免疫治疗领域,具体涉及一种非小细胞肺癌全细胞抗原树突状细胞瘤苗的制备方法。
技术介绍
肺癌发生于支气管黏膜上皮,近50年来肺癌的发病率显著增高,在欧美工业发达国家和我国的一些工业大城市中,肺癌发病率在男性恶性肿瘤中已居首位,在女性发病率也迅速增高,占女性常见恶性肿瘤的第2位或第3位。肺癌成为危害生命健康的一种主要疾病,肺癌通常分为两种:非小细胞肺癌(non-smallcelllungcarcinoma,NSCLC)约占80±85%,小细胞肺癌(smallcellcarcinoma,SCC),约占15±20%。非小细胞肺癌主要有三种亚型,包括腺癌(50%)、鳞癌(30%)、大细胞癌(5%),尽管手术、放疗、化疗的技术在不断进步,但25年来,其五年期生存率也仅从5%提高到15%,因此开发一种新的治疗方法也就尤为必要。肿瘤疫苗是肿瘤生物治疗的重要组成部分,近年来发展迅速,为肿瘤的预防和治疗开辟了新的途径,肿瘤疫苗原理是利用肿瘤抗原激发机体自身的免疫保护机制,达到全身性的特异性抗肿瘤作用,与现有治疗方法相比,肿瘤疫苗毒副作用小,特异性高,作用范围广,在阻止肿瘤扩散,防止复发等方面逐渐展现出其功效。树突状细胞(dendriticcell,DC)是体内功能最强的抗原提呈细胞,能有效摄取、加工肿瘤抗原,表达高水平MHC-Ⅰ,MHC-Ⅱ类分子及CD54、CD80、CD86等多中共刺激分子,并分泌多种细胞因子如IL-12p70,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞,也促进了体液免疫,在机体抗肿瘤免疫中发挥着重要作 ...
【技术保护点】
一种非小细胞肺癌全细胞抗原树突状细胞瘤苗的制备方法,其特征在于:具体步骤为:(一)、全细胞肿瘤抗原制备:(1)、分别取对数生长期的小细胞肺癌细胞系H520和H522各2×10
【技术特征摘要】
1.一种非小细胞肺癌全细胞抗原树突状细胞瘤苗的制备方法,其特征在于:具体步骤为:(一)、全细胞肿瘤抗原制备:(1)、分别取对数生长期的小细胞肺癌细胞系H520和H522各2×106个,悬浮于1mlPBS中,得到细胞悬液;(2)、将细胞悬液置于40-43℃恒温水浴锅中,处理1h;(3)、水浴锅中取出细胞悬液,立即放到-75--85℃超低温冰箱中,1h之后,转入37℃水浴锅中,轻轻摇晃,至完全融化,再次放入-75--85℃超低温冰箱中,如此反复3次;(4)、在12000rpm的条件下,离心10min;(5)、取上清,即为热休克肿瘤细胞冻融抗原,并用0.2μm孔径过滤器过滤上清液,去除杂质后,将上清液置于-75--85℃超低温冰箱中保存备用;(二)、DC细胞制备:(6)、取自体外周血100ml于血袋中,在无菌条件下分装于含有15ml淋巴细胞分离液的离心管中,每管15ml,在2000rpm的条件下,离心15-25min;(7)、离心结束后,吸取黄色透明层上的白膜层,再用生理盐水重悬于50ml离心管中,离心3-8min,弃上清,如此反复两次;(8)、将细胞重悬于10ml的GT-T551培养基中,然后装于T75培养瓶中,在37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中孵育2h;(9)、吸弃悬浮液,DC细胞贴壁,再加入40mlGT-T551培养基培养,隔天换一次培养液;(三)、DC瘤苗制备:(10)、DC细胞培养第6天,将冻融抗原加入DC细胞中孵育4h;(11)、加入Poly(I:C)25μg/ml孵育20小时,...
【专利技术属性】
技术研发人员:韦玉军,陆宝石,李航,吴远航,苏军,
申请(专利权)人:安徽安龙基因医学检验所有限公司,
类型:发明
国别省市:安徽,34
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