柯萨奇病毒A6型感染动物模型及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了柯萨奇病毒A6型感染动物模型及其制备方法与应用。本发明专利技术公开的柯萨奇病毒A6型感染动物模型的制备方法包括：将灭活的柯萨奇病毒A6型毒株感染动物，得到柯萨奇病毒A6型感染动物模型；柯萨奇病毒A6型毒株为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.13393的毒株。本发明专利技术利用CVA6毒株WF057R构建了稳定且重复性好的柯萨奇病毒A6型感染动物模型，该模型可为下一步进行药物的抗病毒治疗和评估病毒灭活疫苗的免疫保护效果提供研究工具。

【技术实现步骤摘要】
柯萨奇病毒A6型感染动物模型及其制备方法与应用
本专利技术涉及生物
中，柯萨奇病毒A6型感染动物模型及其制备方法与应用。
技术介绍
柯萨奇病毒(Coxsackievirus，CV)为单股正链RNA病毒，属于小RNA病毒科，肠道病毒属。柯萨奇病毒颗粒为二十面体立体对称，呈球形，直径约23～33nm，核衣壳裸露，无包膜和突起；柯萨奇病毒基因组只包含一个开放阅读框架(ORF)，编码一个较长的多聚蛋白前体。该ORF依次分为P1、P2和P33个区，其中P1区编码病毒的结构蛋白VP1～VP4，组成病毒衣壳。P2和P3区编码非结构蛋白。柯萨奇病毒是引起儿童手足口病(HFMD)的主要病原体，尤其是3岁以内的婴幼儿，能够导致其严重的神经系统并发症。引起HFMD的肠道病毒(EVs)主要包括四种类型：EV-A、EV-B、EV-C和EV-D。柯萨奇病毒A6型(CVA6)属于肠道病毒A组，共16个亚型，其中亚型A组11个和B组5个。根据基因型的不同，CVA6划分为A～E五个分支，E基因型又分为E1和E2基因亚型。自2008年CVA6首次爆发于芬兰以来，E2亚型成为世界范围内流行的主要基因型。临床数据表明，相比经典的HFMD病例，E2亚型CVA6感染人后往往会导致更严重的呼吸系统和神经系统疾病。更重要的是，该病毒感染会导致严重的疱疹性咽峡炎，甚至引起新生儿的死亡。同时，该亚型病毒在流行季节很容易跟其它型肠道病毒混合感染，给疾病的治疗和诊断带来很多困难。在2010年之前，HFMD主要由EV71和CA16两种类型肠道病毒引起，关于CVA6的报道非常少。近几年，CVA6在全世界范围内流行，尤其是泛太平洋地区，包括中国台湾、新加坡、日本和泰国等，很多地区CVA6已取代EV71和CA16成为导致HFMD的主要流行株。自2011至2015年，欧洲和北美等其它国家和地区流行的肠道病毒也是CVA6。目前，在中国大陆的很多城市CVA6呈现爆发式流行，比如深圳、上海和青岛等地，其发病率和死亡率逐年升高。所以，E2型CVA6已逐渐成为在全世界范围内流行且能导致严重并发症的HFMD病原体。由于其它型肠道病毒(非EV71和非CA16)所引起的临床表现轻微，致病性较弱，并未引起人们对CVA6的关注。最近的报告表明，近期流行的E2型CVA6感染会导致严重的中枢神经系统(CNS)急性并发症，如无菌性脑膜炎、脑干脑炎、和急性弛缓性麻痹等。目前关于手足口病的发病机制还不清楚，特别是CVA6的致病机理尚未报道，筛选抗CVA6药物和疫苗缺乏稳定的动物感染模型，抗CVA6药物和疫苗的开发也受到制约，究其原因缺乏一合适的CVA6感染动物模型。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何治疗和/或预防柯萨奇病毒A6型所致疾病。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种柯萨奇病毒A6型感染动物模型的制备方法。本专利技术所提供的柯萨奇病毒A6型感染动物模型的制备方法，包括：将柯萨奇病毒A6型毒株感染动物，得到柯萨奇病毒A6型感染动物模型；所述柯萨奇病毒A6型毒株可为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.13393的毒株，该毒株的名称为WF057R。上述方法中，所述动物可为哺乳动物。所述哺乳动物具体可为小鼠。所述小鼠具体可为ICR小鼠。上述方法中，所述动物可为3-5日龄动物。上述方法中，所述柯萨奇病毒A6型毒株感染所述动物的量可为105.5TCID50/(3.5-4.5g)。所述柯萨奇病毒A6型毒株感染所述动物的量具体可为105.5TCID50/4g。上述方法中，所述将柯萨奇病毒A6型毒株感染动物可通过注射的方式进行。所述注射可为肌肉注射或腹腔注射。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了利用所述方法制备的柯萨奇病毒A6型感染动物模型在筛选抗柯萨奇病毒A6型药物和/或疫苗中的应用。本专利技术筛选了一株具有代表性的CVA6毒株WF057R，利用本专利技术的CVA6毒株WF057R还可以构建稳定且重复性好的柯萨奇病毒A6型感染动物模型，该模型可为下一步进行药物的抗病毒治疗和评估病毒灭活疫苗的免疫保护效果提供研究工具。生物材料保藏说明生物材料的分类命名：柯萨奇病毒A6型(Coxsackievirus)生物材料的菌株编号：WF057R生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心生物材料的保藏单位简称：CGMCC生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101生物材料的保藏日期：2016年12月26日生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.13393附图说明图1为不同感染条件组合下接种CVA6毒株WF057R乳鼠的临床表现、体重变化及生存率变化。A-C分别为5日龄乳鼠不同接种剂量和不同接种途径组合；D-F为不同剂量经IM途径接种3、7、9日龄乳鼠。图2为5日龄乳鼠接种CVA6后不同组织内病毒载量的变化。A-C的接种剂量均为105.5TCID50/只，A为5日龄乳鼠经肌肉注射感染CVA6病毒后各组织病毒载量随感染天数变化情况，B为5日龄乳鼠经腹腔注射感染CVA6病毒后各组织病毒载量随感染天数变化情况，C为5日龄乳鼠经脑内注射感染CVA6病毒后各组织病毒载量随感染天数变化情况；D-F的接种剂量均为107TCID50/只，D为5日龄乳鼠经肌肉注射感染CVA6病毒后各组织病毒载量随感染天数变化情况，E为5日龄乳鼠经腹腔注射感染CVA6病毒后各组织病毒载量随感染天数变化情况，F为5日龄乳鼠经脑内注射感染CVA6病毒后各组织病毒载量随感染天数变化情况。其中，log的底数均为10。图3为5日龄乳鼠感染310LD50剂量CVA6后1～5dpi外周血中炎性细胞因子的表达变化。CVA6代表接毒组，NC代表未接毒组，纵坐标的C表示表达量。图4为新生乳鼠感染CVA6毒株WF057R后大脑组织的HE染色和IHC结果。A:5dpi的HE染色；B:HE阴性对照；C:5dpi的IHC染色；D：IHC阴性对照。A和B放大200X，C和D放大400X。图5为新生乳鼠感染CVA6毒株WF057R后心脏组织的HE染色和IHC结果。A:5dpi的HE染色；B:HE阴性对照；C:5dpi的IHC染色；D：IHC阴性对照。A～D放大200X。图6为新生乳鼠感染CVA6毒株WF057R后肺脏组织的HE染色和IHC结果。A:5dpi的HE染色；B:HE阴性对照；C:5dpi的IHC染色；D：IHC阴性对照。A～D放大200X。图7为新生乳鼠感染CVA6毒株WF057R后骨骼肌的HE染色和IHC结果。A:5dpi的HE染色；B:HE阴性对照；C:5dpi的IHC染色；D：IHC阴性对照。A～D放大200X。图8为新生乳鼠感染CVA6毒株WF057R后肠道的HE染色和IHC结果。A:5dpi的HE染色；B:HE阴性对照；C:5dpi的IHC染色；D：IHC阴性对照。A～D放大200X。图9为CVA6抗血清在体内通过被动免疫对乳鼠的保护作用。图10为CVA6灭活全病毒免疫雌鼠母传抗体对乳鼠的保护作用。图11为CVA6抗血清体内对不同发病程度乳鼠的治疗效果。其中，CVA6表示CVA6对照组乳鼠。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进本文档来自技高网...

【技术保护点】
柯萨奇病毒A6型感染动物模型的制备方法，包括：将柯萨奇病毒A6型毒株感染动物，得到柯萨奇病毒A6型感染动物模型；所述柯萨奇病毒A6型毒株为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.13393的毒株。

【技术特征摘要】
1.柯萨奇病毒A6型感染动物模型的制备方法，包括：将柯萨奇病毒A6型毒株感染动物，得到柯萨奇病毒A6型感染动物模型；所述柯萨奇病毒A6型毒株为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.13393的毒株。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述动物为哺乳动物。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述哺...

【专利技术属性】
技术研发人员：张振杰，史卫峰，董兆鹏，
申请(专利权)人：泰山医学院，
类型：发明
国别省市：山东,37