用于检测胰腺癌的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种用于检测胰腺癌的组合物，所述组合物包括用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因的至少两个及其片段。本发明专利技术还提供了包括所述组合物的试剂盒。以及所述组合物在制备体外检测胰腺癌的试剂盒中的用途。因此本申请提供了一种通过检测样本中的SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因的甲基化状态来对胰腺癌进行体外检测的方法，从而提供了一种无创的、快速的胰腺癌筛查方法。

【技术实现步骤摘要】
用于检测胰腺癌的组合物及其用途
本专利技术属于生物
，涉及一种组合物及其在疾病检测中的用途，具体地涉及一种用于检测胰腺癌的组合物及其相应的试剂盒和用途。
技术介绍
癌症是一类严重危及公共健康的疾病。世界卫生组织下属的国际癌症研究机构公布的有关全球癌症状况的最新数据(GLOBOCAN2012)显示：2012年全球新增约1,410万例癌症病例，癌症死亡人数达820万；与2008年的数据相比，2012年新增癌症病例增加11％，癌症死亡人数增加8.3％。该机构根据现有数据预计，由于全球人口增长和老龄化，到2025年前，全球每年新增癌症病例数将高达1,930万例。由于近年来人口老龄化和人们生活方式的改变，我国的癌症发病形势严峻，发病率与死亡率呈持续上升趋势。2013年全国肿瘤登记中心发布的《2012中国肿瘤登记年报》的数据显示：中国每年新发癌症病例约350万，因癌症死亡约250万，全国每6分钟就有1人被确诊为癌症，每天有8550人成为癌症患者，每7到8人中就有1人死于癌症。未来10年，中国的癌症发病率与死亡率仍将继续攀升；预计到2020年，中国每年的癌症死亡总数将达300万左右，患病总数将达660万。全国肿瘤防治办公室数据显示：我国胰腺癌发病率为7.28例/105人，死亡率为6.61例/105人，位居常见癌症的第七位。虽然胰腺癌的发病率和死亡率低于五大癌症，但是胰腺癌特别值得关注，因为胰腺癌是一种恶性程度很高，检测和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤。目前，胰腺癌患者的五年存活率仅为5％，胰腺癌的病死率(death-to-caseratio)达90％以上，堪称癌症中的“绝症”。尽管新发胰腺癌仅占全部新发癌症的2.5％，死于胰腺癌的人数占全部癌症死亡人数的6％。此外，新发胰腺癌病例逐年增加；在过去二十几年中，全球死于胰腺癌的人数从1990年的20万人上升到2012年的33万人；我国胰腺癌新发病例在2003-2009年期间增加30％以上。胰腺癌死亡率较高，而治愈率很低，其中一个重要因素是胰腺癌早期的确诊率低。早期胰腺癌缺乏明显和特异性的症状，绝大部分患者确诊时属于晚期，病灶多已发生转移。临床研究发现，从胰腺癌病灶开始形成到患者出现临床症状的过程平均需要2-3年，这为发现早期胰腺癌、提高胰腺癌早期的确诊率提供了一个有效的窗口期。充分利用这个窗口期，有望提高胰腺癌治疗效果、降低胰腺癌死亡率。但是目前尚无简便、有效的筛查方法。常用血清肿瘤标识物(CEA，CA199等)对胰腺癌的检测灵敏度过低。而一些新型影像学检测技术，由于侵入性强，设备成本高，操作技术要求强，在胰腺癌的检测和诊断的使用非常有限(MRI：13.9％；PET/CT：1.8％；EUS：5.6％)。因此，研发方便、准确、灵敏的早期胰腺癌的体外诊断和检测技术，提高早期胰腺癌的发现率，是改善胰腺癌治疗效果、降低胰腺癌死亡率的重要途径。多年研究证明表观遗传学在癌症的发生、发展中起着极其重要的作用。作为表观遗传学的一种重要机制，DNA甲基化在多种肿瘤(肠癌、胃癌、肺癌等)中的调控得到了深入的研究。大量研究显示：基因甲基化的调控与染色质结构和基因表达调控等生物学机制相关联；细胞基因甲基化的变化发生在肿瘤形成的早期，并贯穿癌症的发生和发展过程；抑癌基因的甲基化是癌前病变组织转化为恶性肿瘤细胞的重要分子机制。因此，甲基化的研究，为癌症的早期预测、分类、分级及预后评估提供了新的依据，是目前的研究热点之一。
技术实现思路
本专利技术提供了一种用于体外检测胰腺癌的组合物、试剂盒及其用途，以及基于该试剂盒来执行检测的方法。根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种用于体外检测胰腺癌的组合物，所述组合物包括用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因的至少两个及其片段，例如所述目标基因选自SEPT9基因和BNC1基因、SEPT9基因和ADAMTS1基因，或SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因及其片段，以通过对目标基因的甲基化检测结果来检测胰腺癌。根据本专利技术的某些优选实施方式，所述组合物进一步包括用于检测目标基因的每一个的至少一个区域内甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因的至少两个及其片段，例如所述目标基因选自SEPT9基因和BNC1基因、SEPT9基因和ADAMTS1基因，或SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因及其片段，通过综合所述目标基因的甲基化检测结果来检测胰腺癌。进一步地，所述核酸包括选自所述目标基因的至少15个核苷酸的片段，其中所述核苷酸包含至少一个CpG二核苷酸序列，CpG的甲基化状态表明所述疾病的检测结果，其中所述目标基因选自SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因的至少两个及其片段，例如所述目标基因选自SEPT9基因和BNC1基因、SEPT9基因和ADAMTS1基因，或SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因及其片段。优选地，所述核苷酸的片段包含等同于、互补于或在中等严紧或严紧条件下杂交于选自SEQIDNO：10、SEQIDNO：11、SEQIDNO：12、SEQIDNO：22、SEQIDNO：23、SEQIDNO：24、SEQIDNO：25的至少15个核苷酸的片段及其互补序列。进一步优选地，所述核苷酸的片段包含等同于、互补于或在中等严紧或严紧条件下杂交于选自SEQIDNO：1至SEQIDNO：9，SEQIDNO：13至SEQIDNO：21和SEQIDNO：26的序列及其互补序列。所述组合物还包括将基因的5位未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶或在杂交性能方面可检测地不同于胞嘧啶的其他碱基的试剂。优选的试剂是亚硫酸氢盐。根据本专利技术的第二个方面，还提供了包括所述组合物的试剂盒。典型地，所述的试剂盒包括用于容纳患者生物样品的容器。并且，所述的试剂盒也包括使用和解释试剂盒结果的说明。根据本专利技术的第三个方面，还提供了所述组合物在制备用于体外检测胰腺癌的试剂盒中的用途。根据本专利技术的第四个方面，还提供了一种对胰腺癌进行体外检测的方法，所述方法包括以下步骤：1)分离待测生物样品中的目标基因，其中所述目标基因选自SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因的至少两个及其片段，例如所述目标基因选自SEPT9基因和BNC1基因、SEPT9基因和ADAMTS1基因，或SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因及其片段；2)确定所述目标基因中至少一个区域内的甲基化状态；3)通过所述目标基因的甲基化检测结果来对胰腺癌进行体外检测。在一个优选的实施方式中，所述方法包括以下步骤：1)分离待测生物样品中的目标基因，其中所述目标基因选自SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因的至少两个及其片段，例如所述目标基因选自SEPT9基因和BNC1基因、SEPT9基因和ADAMTS1基因，或SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因及其片段；2)确定所述目标基因的每个的至少一个区域内的甲基化状态；3)通过综合所述目标基因的甲基化检测结果来对胰腺癌进行体外检测。根据某些优选实施方式，所述方法还包括以下步骤：1)使用试剂将目标基因的5位本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于体外检测胰腺癌的组合物，所述组合物包括用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因的至少两个及其片段；优选地，所述组合物包括用于检测目标基因的每一个的至少一个区域内甲基化状态的核酸；优选地，所述目标基因选自SEPT9基因和BNC1基因、SEPT9基因和ADAMTS1基因，或SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因及其片段。

【技术特征摘要】
1.一种用于体外检测胰腺癌的组合物，所述组合物包括用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因的至少两个及其片段；优选地，所述组合物包括用于检测目标基因的每一个的至少一个区域内甲基化状态的核酸；优选地，所述目标基因选自SEPT9基因和BNC1基因、SEPT9基因和ADAMTS1基因，或SEPT9基因、BNC1基因和ADAMTS1基因及其片段。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述核酸包括选自所述目标基因的至少15个核苷酸的片段，其中所述核苷酸包含至少一个CpG二核苷酸序列。3.根据权利要求1-2中任一项所述的组合物，其中，所述核苷酸的片段包含等同于、互补于或在中等严紧或严紧条件下杂交于选自SEQIDNO：10、SEQIDNO：11、SEQIDNO：12、SEQIDNO：22、SEQIDNO：23、SEQIDNO：24、SEQIDNO：25的至少15个核苷酸的片段及其互补序列。4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：马竣，韩晓亮，王建铭，李兆申，
申请(专利权)人：博尔诚北京科技有限公司，博诚研究中心，
类型：发明
国别省市：北京,11