汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法技术

本发明专利技术公开了一种汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法，包括试样液的准备、接种菌液的准备、营养琼脂培养基的准备、抗菌测试四个步骤，本发明专利技术方法通过有机溶剂溶解待测的汉麻韧皮纤维提取物，获得不含固体物质的试样液，同时将接种菌液的浓度控制在1×10

【技术实现步骤摘要】
汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法
本专利技术属于微生物试验领域，尤其涉及一种汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法。
技术介绍
汉麻是一种绿色安全的低毒大麻，人们通过对大麻的基因改良，降低了其毒性成分(四氢大麻酚THC含量低于0.3％)，目前作为一种工业大麻(CannabisSativaL.)使用，是一种极具经济价值的麻类植物。我国是汉麻的主产国，种植区域遍及全国多个地区，产量占世界大麻产量的1/3左右，居世界第一位。丰富的资源储备为我国汉麻产业的发展提供了强有力的支撑。近年来，汉麻因其优良的抗菌性和其他特性，在当代纺织业中被广泛使用。现有研究普遍认为，汉麻韧皮纤维具有优良抗菌性能的主要因素为其胶质中所含的酚类物质，包括四氢大麻酚、四氢大麻二酚、大麻酚、大麻二酚等。文献报道这些抗菌有效物质可通过乙醇浸提等工艺提取获得，并通过石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等溶剂进行分离得到各相的浸膏。通过抗菌实验，可进一步检测汉麻韧皮纤维提取物的抗菌能力的大小，并定性鉴别其抗菌性能的优劣。抗菌实验是用于检测和评价抗菌物质抗菌效果的一种实验方法，也可用来筛选新的抗菌物质和用于检测细菌的耐药性。现有针对植物提取物的抗菌实验方法主要包括牛津杯法、K-B纸片扩散法、平板打孔法、试管二倍梯度稀释法。K-B纸片扩散法测试过程中纸片的含药量的准确性和均匀度不易控制，易导致测试结果偏差。试管二倍稀释法是一种精确定量的方法，但操作复杂繁琐，不适用于仅需定性分析的物质的快速测定。平板打孔法操作虽简单，但打孔准确度要求较高，孔内的琼脂块还须挑出，操作不慎易造成孔壁不整齐，影响实验结果。有文献报道，不同的抗菌实验方法对抗菌效果的评价有明显的影响，而牛津杯法对于琼脂扩散定性抗菌实验效果优于其他几种方法。牛津杯法又称晕圈试验法，是用于抗菌剂筛选的抗菌效力快速定性方法。原理是：在琼脂培养基上接种实验菌，再紧贴试样，在一定条件下培养后，观察菌类繁殖情况和试样周围无菌区的晕圈大小，与对照样的试验情况比较。此法一次能处理大量的试样，操作简便，可达到快速检测的目的。但采用此法作为汉麻韧皮纤维提取物的实验方法存在如下问题：首先，此法虽然规定在一定时间内培养实验菌液，但是菌液浓度没有明确规定，对于不同物质实验所适用的菌液浓度应不同；其次，实验过程中待测物须充分溶解至一定的质量浓度，方能有效开展实验，而汉麻韧皮纤维提取物水溶性差，在测试过程中需要选择适当的溶剂以达到充分溶解的目的；最后，所选择的溶剂不能影响实验结果，因此选择适当的溶剂成分和质量浓度配比对于实验结果的准确性至关重要。汉麻韧皮纤维抗菌性类物质的鉴定和明晰，可以对大麻纤维产品的进一步开发利用具有重要的指导意义，从而在工业上具有良好的应用前景和潜力，这也正是本专利技术得以完成的动力所在。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，针对现有技术的不足，提供一种汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法，通过此方法可快速、简便地测定汉麻韧皮纤维提取物的抗菌能力，该方法也可适用于其他麻类纤维提取物抗菌能力的快速测定。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法，包括以下步骤：(1)试样液的准备：将汉麻韧皮纤维提取物溶解于有机溶剂中，得到汉麻韧皮纤维提取物浓度为80-120mg/mL的试样液；(2)接种菌液的准备：首先活化接种菌，再用接种环将活化后的接种菌加至灭菌后的生理盐水中碾磨、混匀，调节获得麦氏单位达到0.5的菌液，再将菌液加入到含有100mL无菌的营养琼脂的锥形瓶中混匀，最后使用灭菌后的生理盐水将锥形瓶内的混合液稀释，得到浓度为1×105-5×105CFU/mL的接种菌液，待用；(3)营养琼脂培养基的准备：将无菌的营养琼脂培养基在45℃温度下融化后，取10-15mL移至培养皿中，待常温冷却凝固后，取5-8mL所述的接种菌液加至所述的培养皿中，轻轻摇晃，使接种菌液均匀分布在培养皿的平板表面，常温冷却，待用；(4)抗菌测试：在步骤(3)中常温冷却后的培养皿内放入牛津杯，再在牛津杯内加入200μL所述的试样液，随后将培养皿放入培养箱中培养24-28h，培养结束后取出培养皿，测量培养皿中的抑菌圈宽度，判断汉麻韧皮纤维提取物的抗菌能力。汉麻韧皮纤维提取物可通过现有技术进行提取获得，例如可根据CN104018343A公开的中国专利技术专利申请中公布的制备方法进行制备提取。作为优选，步骤(1)中所述的有机溶剂为细胞培养级二甲基亚砜和吐温80混合而成的混合溶液，该混合溶液中，细胞培养级二甲基亚砜的体积浓度为15-25％，吐温80的体积浓度为8-12％。选择细胞培养级二甲基亚砜的体积浓度为15-25％、吐温80的体积浓度为8-12％的混合溶液作为有机溶剂，可迅速且充分溶解汉麻韧皮纤维提取物获得不含任何固体物质的试样液。同时，该混合溶液作为有机溶剂时，对于金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌均无抑制和干扰作用，可作为汉麻韧皮纤维提取物抗菌测试试样的溶剂。作为优选，步骤(2)中所述的接种菌为金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌或白色念珠菌。作为优选，步骤(2)中活化接种菌所用的活化培养基、活化温度和活化时间为：接种菌为金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌时，活化培养基为营养琼脂培养基，活化温度为35-37℃，活化时间为24-48h；接种菌为白色念珠菌时，活化培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基，活化温度为26-28℃，活化时间为48-120h。作为优选，步骤(4)中所述的培养皿在培养箱中的培养温度为：接种菌为金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌时，培养温度为37±1℃；接种菌为白色念珠菌时，培养温度为28±1℃。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术方法通过有机溶剂溶解待测的汉麻韧皮纤维提取物，获得不含固体物质的试样液，同时将接种菌液的浓度控制在1×105-5×105CFU/mL，可使测定过程中细菌繁殖密度达到要求，抑菌圈边界清晰，确保测定结果的准确性和测定过程的可操作性。本专利技术方法可快速、简便地测定汉麻韧皮纤维提取物的抗菌能力，此方法也可适用于其他麻类纤维提取物抗菌能力的快速测定。附图说明图1为实施例1中汉麻精干麻乙酸乙酯浸膏对金黄色葡萄球菌的抑菌圈的形貌；图2为实施例1中汉麻原麻乙酸乙酯浸膏对金黄色葡萄球菌的抑菌圈的形貌；图3为实施例2中汉麻精干麻乙酸乙酯浸膏对绿脓杆菌的抑菌圈的形貌；图4为实施例2中汉麻原麻乙酸乙酯浸膏对绿脓杆菌的抑菌圈的形貌；图5为实施例3中汉麻精干麻乙酸乙酯浸膏对白色念珠菌的抑菌圈的形貌；图6为实施例3中汉麻原麻乙酸乙酯浸膏对白色念珠菌的抑菌圈的形貌。具体实施方式以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。实施例1：采用本专利技术测定方法快速测定汉麻韧皮纤维提取物对金黄色葡萄球菌的抗菌能力，该汉麻韧皮纤维提取物为具体采用CN104018343A公开的中国专利技术专利申请中公布的制备方法制备的汉麻精干麻乙酸乙酯浸膏和汉麻原麻乙酸乙酯浸膏两种。以汉麻精干麻乙酸乙酯浸膏为例，其对金黄色葡萄球菌的抗菌能力的测定方法包括以下步骤：(1)试样液的准备：称取100mg汉麻精干麻乙酸乙酯浸膏，将其溶解于1mL的细胞培养级二甲基亚砜和吐温80混合而成的混合溶液中得到汉麻精干麻乙酸乙酯浸膏浓度为100mg/mL的试样液，其中，该本文档来自技高网...

【技术保护点】
汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法，其特征在于包括以下步骤：（1）试样液的准备：将汉麻韧皮纤维提取物溶解于有机溶剂中，得到汉麻韧皮纤维提取物浓度为80‑120 mg/mL的试样液；（2）接种菌液的准备：首先活化接种菌，再用接种环将活化后的接种菌加至灭菌后的生理盐水中碾磨、混匀，调节获得麦氏单位达到0.5的菌液，再将菌液加入到含有100 mL无菌的营养琼脂的锥形瓶中混匀，最后使用灭菌后的生理盐水将锥形瓶内的混合液稀释，得到浓度为1×10

【技术特征摘要】
1.汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法，其特征在于包括以下步骤：（1）试样液的准备：将汉麻韧皮纤维提取物溶解于有机溶剂中，得到汉麻韧皮纤维提取物浓度为80-120mg/mL的试样液；（2）接种菌液的准备：首先活化接种菌，再用接种环将活化后的接种菌加至灭菌后的生理盐水中碾磨、混匀，调节获得麦氏单位达到0.5的菌液，再将菌液加入到含有100mL无菌的营养琼脂的锥形瓶中混匀，最后使用灭菌后的生理盐水将锥形瓶内的混合液稀释，得到浓度为1×105-5×105CFU/mL的接种菌液，待用；（3）营养琼脂培养基的准备：将无菌的营养琼脂培养基在45℃温度下融化后，取10-15mL移至培养皿中，待常温冷却凝固后，取5-8mL所述的接种菌液加至所述的培养皿中，轻轻摇晃，使接种菌液均匀分布在培养皿的平板表面，常温冷却，待用；（4）抗菌测试：在步骤（3）中常温冷却后的培养皿内放入牛津杯，再在牛津杯内加入200μL所述的试样液，随后将培养皿放入培养箱中培养24-28h，培养结束后取出培养皿，测量培养皿中的抑菌圈宽度，判断汉麻韧皮纤维提取物的抗菌能力。2.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：王庆淼，刘健，于伟东，保琦蓓，
申请(专利权)人：雅戈尔服装控股有限公司，浙江纺织服装职业技术学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33