用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基制造技术

本发明专利技术用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基，由基础培养基与血清替代物组合混合构成，其基本组分包含2种糖类、22种氨基酸类、6种脂类、2种核苷类、11种维生素类、16种盐类、1种激素类、2种蛋白类以及羟乙基哌嗪乙磺酸和酚红；将本发明专利技术的血清替代物组合添加到本发明专利技术的基础培养基中可制成本发明专利技术的无血清培养基。本发明专利技术组分明确，能支持免疫杀伤细胞的体外扩增，具有高效性和稳定性；能促进生物治疗的深入研究和应用，促进免疫细胞治疗更顺利地进行，利国利民。

【技术实现步骤摘要】
用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基
本专利技术涉及现代生物技术之培养基研发
，具体地说，是一种用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基。技术背景随着现代生物技术研究的长足发展，生物治疗已成为继外科手术、放射治疗、化学治疗之后治疗肿瘤的第四种方式。在肿瘤的生物治疗中，免疫细胞治疗是其重要的一环。近年来，免疫细胞治疗在临床中已显示出了其重要的应用价值。所述免疫细胞治疗，包括肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）、淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）、细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）、树突状细胞（DC）、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）、T细胞受体基因修饰的T细胞（TCR-T）、嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）的细胞治疗，其中，TCR-T和CAR-T的细胞治疗目前属于较为前沿的过继免疫治疗。所述过继免疫治疗，其在实施过程中很重要的一个环节就是要通过人免疫细胞的体外扩增，使人免疫细胞数量符合临床注剂量的要求后再输给患者以达到生物治疗的目的。由于生物治疗的特殊性在于，是以人免疫细胞作为治疗药物输入患者体内的，因此，体外扩增免人疫细胞的安全性和质量的稳定性就显得尤为重要。在人免疫杀伤细胞的体外扩增过程中需要确保不能渗入任何可能会给患者生命带来安全风险的物质，例如异源病原菌和病毒。目前，常规的细胞培养是在有血清的体系中进行的，异源血清的加入可能会增加异源感染的风险，这在临床上是绝对不允许的。使用无血清培养基，即采用血清替代物替代血清在细胞培养中的作用来进行无血清扩增，则能解决上述问题。因此，将无血清培养基用于人免疫杀伤细胞的体外扩增就显得尤为重要。由于无血清培养基相对于有血清培养体系在成分上更加明确，批次间的质量更加稳定，且易于规模化制备和管理，易于规避异源物质的干扰，因此，其质量的稳定性和使用的安全性都有大幅度的提高。无血清培养基按其组成一般分为基础培养基和添加组分，其中，血清替代物可作为一种独立的添加组分，其提供与血清相似的作用效果，如生长因子、激素、蛋白、脂类或者微量元素等物质；而基础培养基则是提供细胞生长所必须的糖类、氨基酸类、脂类、无机盐类、微量元素和维生素类等物质。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基，它以所研发的血清替代物为依据，通过多次科学实验、设计与验证，逐步分析优化，最终获得了支持人免疫细胞体外高效扩增的无血清培养基；它组分明确，能支持人免疫杀伤细胞体外高效扩增，具有高效性和稳定性。为实现上述目的，本专利技术采取了以下技术方案。一种用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基，其特征在于，其组分中包括糖类、氨基酸类、脂类、核苷类、维生素类、盐类、激素类、蛋白类以及羟乙基哌嗪乙磺酸和酚红；所述糖类包括：D-葡萄糖、丙酮酸钠；所述氨基酸类包括：L-丙氨酸、L-精氨酸·盐酸、L-天冬酰胺·水、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐合水、L-胱氨酸·二盐酸、L-谷氨酸钠、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-组氨酸·盐酸·水、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸·盐酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸·二钠·二水、L-缬氨酸、对氨基苯甲酸；所述脂类包括：亚油酸、氯化胆碱、乙醇胺、α-硫代甘油、亚麻酸、胆固醇；所述核苷类包括：次黄嘌呤钠、胸苷；所述维生素类包括：D-生物素、叶酸、肌醇、烟酰胺、泛酸钙、吡哆醇盐酸盐、吡哆醛盐酸盐、核黄素、硫胺素盐酸盐、氰钴胺素、硫辛酸；所述盐类包括：氯化钙、硝酸钙、氯化钾、硝酸钾、磷酸氢二钠、氯化钠、一水合磷酸二氢钠、硫酸镁、氯化镁、碳酸氢钠、亚硒酸钠、九水硝酸铁、七水合硫酸亚铁、五水合硫酸铜、七水合硫酸锌、腐胺；所述激素类包括：胰岛素；所述蛋白类包括：牛血清白蛋白、转铁蛋白。一种用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基，其特征在于，其各种组分及最终使用的浓度为（单位为毫克/升）：D-葡萄糖2000～4500mg/L；丙酮酸钠0.01～110mg/L；L-丙氨酸0.1～14.725mg/L；L-精氨酸·盐酸14.725～242.13mg/L；L-天冬酰胺·水7.5～50mg/L；L-天冬氨酸6.65～30mg/L；L-半胱氨酸盐酸盐合水6.65～20mg/L；L-胱氨酸·二盐酸31.29～65mg/L；L-谷氨酸钠8.46～47.3675mg/L；L-谷氨酰胺300～563mg/L；甘氨酸10～24.375mg/L；L-组氨酸·盐酸·水17.676～36.74mg/L；L-异亮氨酸50～79.735mg/L；L-亮氨酸50～82.025mg/L；L-赖氨酸·盐酸40～118.625mg/L；L-蛋氨酸15～23.62mg/L；L-苯丙氨酸15～50.74mg/L；L-脯氨酸17.25～28.625mg/L；L-丝氨酸26.25～34.125mg/L；L-苏氨酸20～74.225mg/L；L-色氨酸5～12.51mg/L；L-酪氨酸·二钠·二水29～88.26mg/L；L-缬氨酸20～73.425mg/L；对氨基苯甲酸0.01～1mg/L；亚油酸0.001～0.042mg/L；氯化胆碱3～8.98mg/L；次黄嘌呤钠0.01～2.39mg/L；胸苷0.0001～0.365mg/L；D-生物素0.0035～0.2mg/L；叶酸1～3.325mg/L；肌醇9.9～35mg/L；烟酰胺1～3.01mg/L；泛酸钙0.25～3.12mg/L；吡哆醇盐酸盐1～2.031mg/L；吡哆醛盐酸盐0.001～0.1mg/L；核黄素0.2～0.3095mg/L；硫胺素盐酸盐1～3.085mg/L；氰钴胺素0.005～0.68mg/L；硫辛酸0.0001～0.105mg/L；氯化钙0.1～165mg/L；硝酸钙0.1～69.5mg/L；氯化钾311.8～400mg/L；硝酸钾0.001～0.076mg/L；磷酸氢二钠0.1～423.88mg/L；氯化钠5747.75～6995.5mg/L；一水合磷酸二氢钠62.5～676.13mg/L；硫酸镁40.276～73.255mg/L；氯化镁0.1～28.64mg/L；碳酸氢钠2000～2731mg/L；亚硒酸钠0.0001～0.0114mg/L；九水硝酸铁0.001～0.05mg/L；七水合硫酸亚铁0.001～0.417mg/L；五水合硫酸铜0.00001～0.0013mg/L；七水合硫酸锌0.001～0.432mg/L；羟乙基哌嗪乙磺酸2383～4766.25mg/L；酚红5～11.55mg/L；胰岛素0.5～20mg/L；转铁蛋白0.69～22mg/L；牛血清白蛋白3000～6000mg/L；乙醇胺0.61～2.44mg/L；α-硫代甘油5.41～10.82mg/L；亚麻酸0.5～5.0mg/L；胆固醇0.8～20mg/L；腐胺·二盐酸0.001～0.081mg/L。进一步，所述组分中还能添加柠檬酸铵铁：0.46～2.3mg/L；β-甘油磷酸二钠：300～1500mg/L；腐胺：0.25～1.25mg/L。一种用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基，其特征在于，由基础培养基与血清替代物组合混合构成；所述基础培养基各种组分及最终使用的浓度为（单位为毫克/升本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基，其特征在于，其组分中包括糖类、氨基酸类、脂类、核苷类、维生素类、盐类、激素类、蛋白类以及羟乙基哌嗪乙磺酸和酚红；所述糖类包括：D‑葡萄糖、丙酮酸钠；所述氨基酸类包括：L‑丙氨酸、L‑精氨酸·盐酸、L‑天冬酰胺·水、L‑天冬氨酸、L‑半胱氨酸盐酸盐合水、L‑胱氨酸·二盐酸、L‑谷氨酸钠、L‑谷氨酰胺、甘氨酸、L‑组氨酸·盐酸·水、L‑异亮氨酸、L‑亮氨酸、L‑赖氨酸·盐酸、L‑蛋氨酸、L‑苯丙氨酸、L‑脯氨酸、L‑丝氨酸、L‑苏氨酸、L‑色氨酸、L‑酪氨酸·二钠·二水、L‑缬氨酸、对氨基苯甲酸；所述脂类包括：亚油酸、氯化胆碱、乙醇胺、α‑硫代甘油、亚麻酸、胆固醇；所述核苷类包括：次黄嘌呤钠、胸苷；所述维生素类包括：D‑生物素、叶酸、肌醇、烟酰胺、泛酸钙、吡哆醇盐酸盐、吡哆醛盐酸盐、核黄素、硫胺素盐酸盐、氰钴胺素、硫辛酸；所述盐类包括：氯化钙、硝酸钙、氯化钾、硝酸钾、磷酸氢二钠、氯化钠、一水合磷酸二氢钠、硫酸镁、氯化镁、碳酸氢钠、亚硒酸钠、九水硝酸铁、七水合硫酸亚铁、五水合硫酸铜、七水合硫酸锌、β‑甘油磷酸二钠、柠檬酸铵铁、腐胺；所述激素类包括：胰岛素；所述蛋白类包括：牛血清白蛋白、转铁蛋白。...

【技术特征摘要】
1.一种用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基，其特征在于，其组分中包括糖类、氨基酸类、脂类、核苷类、维生素类、盐类、激素类、蛋白类以及羟乙基哌嗪乙磺酸和酚红；所述糖类包括：D-葡萄糖、丙酮酸钠；所述氨基酸类包括：L-丙氨酸、L-精氨酸·盐酸、L-天冬酰胺·水、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐合水、L-胱氨酸·二盐酸、L-谷氨酸钠、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-组氨酸·盐酸·水、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸·盐酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸·二钠·二水、L-缬氨酸、对氨基苯甲酸；所述脂类包括：亚油酸、氯化胆碱、乙醇胺、α-硫代甘油、亚麻酸、胆固醇；所述核苷类包括：次黄嘌呤钠、胸苷；所述维生素类包括：D-生物素、叶酸、肌醇、烟酰胺、泛酸钙、吡哆醇盐酸盐、吡哆醛盐酸盐、核黄素、硫胺素盐酸盐、氰钴胺素、硫辛酸；所述盐类包括：氯化钙、硝酸钙、氯化钾、硝酸钾、磷酸氢二钠、氯化钠、一水合磷酸二氢钠、硫酸镁、氯化镁、碳酸氢钠、亚硒酸钠、九水硝酸铁、七水合硫酸亚铁、五水合硫酸铜、七水合硫酸锌、β-甘油磷酸二钠、柠檬酸铵铁、腐胺；所述激素类包括：胰岛素；所述蛋白类包括：牛血清白蛋白、转铁蛋白。2.一种用于人免疫杀伤细胞体外扩增的无血清培养基，其特征在于，其各种组分及最终使用的浓度为（单位为毫克/升）：D-葡萄糖2000～4500mg/L；丙酮酸钠0.01～110mg/L；L-丙氨酸0.1～14.725mg/L；L-精氨酸·盐酸14.725～242.13mg/L；L-天冬酰胺·水7.5～50mg/L；L-天冬氨酸6.65～30mg/L；L-半胱氨酸盐酸盐合水6.65～20mg/L；L-胱氨酸·二盐酸31.29～65mg/L；L-谷氨酸钠8.46～47.3675mg/L；L-谷氨酰胺300～563mg/L；甘氨酸10～24.375mg/L；L-组氨酸·盐酸·水17.676～36.74mg/L；L-异亮氨酸50～79.735mg/L；L-亮氨酸50～82.025mg/L；L-赖氨酸·盐酸40～118.625mg/L；L-蛋氨酸15～23.62mg/L；L-苯丙氨酸15～50.74mg/L；L-脯氨酸17.25～28.625mg/L；L-丝氨酸26.25～34.125mg/L；L-苏氨酸20～74.225mg/L；L-色氨酸5～12.51mg/L；L-酪氨酸·二钠·二水29～88.26mg/L；L-缬氨酸20～73.425mg/L；对氨基苯甲酸0.01～1mg/L；亚油酸0.001～0.042mg/L；氯化胆碱3～8.98mg/L；次黄嘌呤钠0.01～2.39mg/L；胸苷0.0001～0.365mg/L；D-生物素0.0035～0.2mg/L；叶酸1～3.325mg/L；肌醇9.9～35mg/L；烟酰胺1～3.01mg/L；泛酸钙0.25～3.12mg/L；吡哆醇盐酸盐1～2.031mg/L；吡哆醛盐酸盐0.001～0.1mg/L；核黄素0.2～0.3095mg/L；硫胺素盐酸盐1～3.085mg/L；氰钴胺素0.005～0.68mg/L；硫辛酸0.0001～0.105mg/L；氯化钙0.1～165mg/L；硝酸钙0.1～69.5mg/L；氯化钾311.8～400mg/L；硝酸钾0.001～0.076mg/L；磷酸氢二钠0.1～423.88mg/L；氯化钠5747.75～6995.5mg/L；一水合磷酸二氢钠62.5～676.13mg/L；硫酸镁40.276～73.255mg/L；氯化镁0.1～28.64mg/L；碳酸氢钠2000～2731mg/L；亚硒酸钠0.0001～0.0114mg/L；九水硝酸铁0.001～0.05mg/L；七水合硫酸亚铁0.001～0.417mg/L；五水合硫酸铜0.00001～0.0013mg/L；七水合硫酸锌0.001～0.432mg/L；羟乙基哌嗪乙磺酸2383～4766.25mg/L；酚红5～11.55mg/L；胰岛素0.5～20mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡海波，谭文松，陈小东，周乐豪，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：上海,31