一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法技术

本发明专利技术属于海藻多糖的提取技术领域，提供了一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法，包括海带研磨成浆液；浸泡；加入酸性纤维素酶、半纤维素酶；加碱性果胶酶；加蛋白酶；加入氯化钠和水，反应，得到褐藻酸钠胶状物；加入改性凹凸棒土；离心机分离；加入酒精，脱水，得到固相褐藻糖胶。本发明专利技术提供的褐藻糖胶提取方法，采用生物酶解法，基于海带细胞壁的结构和成分基础上，分阶段，适量地加相关酶，以使细胞壁彻底地裂解，将其中的褐藻糖胶充分的释放出来，以此提高褐藻糖胶的提取率；在提取过程中加入改性凹凸棒土进行脱色和去除腥味，使制品外观更加纯净；另外，简化提取步骤，减少化学原料的使用，达到环保的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法
本专利技术属于海藻多糖的提取
，具体地，涉及一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法。
技术介绍
海藻是生长在海中的藻类，一般而言，藻类主要可分为绿藻、褐藻、红藻及蓝藻等四类，是植物界的隐花植物，藻类包括数种不同类以光合作用产生能量的生物。海藻富含营养成分和功能性成分，从海藻提炼出来的藻胶或海藻多糖具有特殊乳化性、凝胶性和药用价值、有增强免疫力及抗癌活性，因而逐渐应用于工业和医药产业中。海藻多糖具有抑制病毒、降低胆固醇、降血糖及降血脂等效果。其中，褐藻糖胶是一种存在于所有褐藻中的细胞多糖。近年来的研究发现，褐藻糖胶具有抗氧化、抗凝血、抗肿瘤、抗病毒、抑制补体激活及吸收重金属等功能，为一种重要的机能性保健素材，可将其用于兽药的制备。因此，如何从海藻中萃取出褐藻糖胶为一重要课题。褐藻糖胶萃取方法，一种是为用乙醇、丙酮和氯仿进行预处理，接着将样品经脱脂、脱盐和干燥后得干粉，再以热水萃取得到粗萃物，最后将粗萃物进一步纯化可得褐藻糖胶。此方法所制备的褐藻糖胶的萃取率为干粉重量的6.5％。一种是将藻体切成小片，浸在甲醛中，再以热水萃取得到粗萃物，最后将粗萃物进一步纯化可得褐藻糖胶。一种是用甲醇预处理后，以盐酸萃取预处理物，离心后取沉淀物再次萃取，合并上清液，用氢氧化钠中和，真空蒸发至干后溶于0.5公升水而制备为粗萃物，最后将粗萃物进一步纯化可得褐藻糖胶。此方法所制备的褐藻糖胶的萃取率为干粉重量的27．2％。现有的提取方法存在以下不足：（1）以上方法不能彻底破坏细胞壁结构，而使细胞壁内的褐藻糖胶充分释放出来，提取率低；（2）产品外观为浅黄色，不够美观，还留有藻腥味，影响制品的再次利用；（3）使用大量的乙醇、丙酮、氯仿和甲醇等有机溶液无机溶液进行处理，不够环保。生物酶解法具有针对性强，提取效率高的优点。目前国内利用生物酶解法提取褐藻糖胶方法还比较少，但也存在有效物质含量低的缺陷。因此，如何发展一种可改善上述技术缺陷的褐藻糖胶提取方法，为相关
急需解决的问题。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法。本专利技术提供的褐藻糖胶提取方法，采用生物酶解法，基于海带细胞壁的结构和成分基础上，分阶段，适量地加相关酶，以使细胞壁彻底地裂解，将其中的褐藻糖胶充分的释放出来，以此提高褐藻糖胶的提取率；在提取过程中加入改性凹凸棒土进行脱色和去除腥味，使制品外观更加纯净；另外，简化提取步骤，减少化学原料的使用，达到环保的目的。根据本专利技术提供的一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法，包括如下步骤：步骤（1）：海带预处理，清洗海带，切成小段、研磨成浆液；步骤（2）：向浆液中加入浆液重量5-7倍的水，搅拌均匀，浸泡12-36小时后，将浆液转入酶解容器内；步骤（3）：向酶解容器内加入酸性纤维素酶、半纤维素酶，搅拌均匀，PH控制在4.5-6.5之间，温度控制在45-55℃之间，反应8-12小时，冷却，得产品一；步骤（4）：向产品一加碱性果胶酶，搅拌均匀，PH控制在8.0-10.0之间，温度控制在40-70℃之间，反应7-12小时，冷却，得产品二；步骤（5）：向产品二加蛋白酶，搅拌均匀，PH控制在6.0-9.0之间，温度控制在30-60℃之间，反应3-11小时，冷却，得产品三；步骤（6）：向产品三中加入其重量5-7％的氯化钠和重量10-15倍的水，在50-80℃的温度条件下，反应120-160分钟，得到褐藻酸钠胶状物；步骤（7）：向褐藻酸钠胶状物加入重量为其0.2-5％的改性凹凸棒土，脱色除腥味20-40min，得产品四；步骤（8）：将得到的产品四通过离心机分离出残渣，得到产品五；用适量水洗涤残渣，再次离心，得到产品六；步骤（9）：向产品六加入质量浓度为90-94％的酒精，脱水15-30min，得到固相褐藻糖胶，酒精与产品六的体积比为1.5∶1。优选地，所述步骤（3）中酸性纤维素酶、半纤维素酶加入量分别为步骤（1）中加水后浆液重量的9-11%。优选地，所述步骤（4）中碱性果胶酶加入量为步骤（1）中加水后浆液重量的6-10%。优选地，所述步骤（4）中蛋白酶加入量为步骤（1）中加水后浆液重量的3-7%。优选地，步骤（3）：向酶解容器内加入酸性纤维素酶、半纤维素酶，搅拌均匀，PH控制在5.5之间，温度控制在48℃，反应9小时。优选地，所述步骤（4）：向产品一加碱性果胶酶，搅拌均匀，PH控制在8.5，温度控制在52℃，反应8小时。优选地，所述步骤（5）：向产品二加蛋白酶，搅拌均匀，PH控制在6.9，温度控制在42℃，反应7小时。优选地，向所述步骤（7）得到的产品四中加入700-800U/g褐藻糖胶裂解酶进行酶解，加入量为产品四重量的10-15％，搅拌均匀，再加质量浓度为8-9％的NaOH溶液，调pH至7-9，在20-45℃的温度条件下酶解反应3-4小时，得到褐藻胶裂解酶酶解液，将褐藻胶裂解酶酶解液通过离心机分离获得滤液，将滤液用酒精脱水得到固相褐藻糖胶寡糖。优选地，所述加入酒精质量浓度为80-90%，酒精与滤液的体积比为1.4∶1。与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：（1）本专利技术提供的褐藻糖胶提取方法，采用生物酶解法，基于海带细胞壁的结构和成分基础上，分阶段，适量地加酸性纤维素酶、半纤维素酶、碱性果胶酶、蛋白酶，以使细胞壁彻底地裂解，将其中的褐藻糖胶充分的释放出来，以此提高褐藻糖胶的提取率；（2）本专利技术提取过程中使用到多种酶，如酸性纤维素酶、半纤维素酶、碱性果胶酶、蛋白酶等，由于酶的特性限制，其生物活性受到温度、PH值的因素的影响，本专利技术在酸性纤维素酶、半纤维素酶、碱性果胶酶、蛋白酶各自最适温度范围和PH范围条件下进行生物酶解，在各类酶生物活性最大的条件下提取褐藻糖胶，可最大程度地将褐藻糖胶从海带细胞壁中分离出来，提高提取率，且提取过程安全环保；（3）本专利技术在提取过程中加入改性凹凸棒土进行脱色和去除腥味，使制品外观更加纯净；（4）本专利技术简化提取步骤，减少化学原料的使用，达到环保的目的；（5）本专利技术中使用的改性凹凸棒土，凹凸棒土是一种具有特殊层链状结构的天然纳米无机物，具有较大的比表面积，吸附性强，脱色能力强，吸附能力好，具有脱色率高、不含残留酸等诸多优点。凹凸棒石本身具有一定的L酸中心和B酸中心，通过改性后，可增强凹凸棒土的酸性，提高其与游离脂肪酸、蜡质、色素等杂质的结合能力，从而能有效地吸附油脂中的色素等杂质，是一种性能优异的吸附剂和脱色剂。本专利技术将其加入进行脱色和除腥，可使提取的褐藻糖胶外观好，无腥味；（6）本专利技术提取的褐藻糖胶具有抗氧化、抗凝血、抗肿瘤、抗病毒、抑制补体激活及吸收重金属等作用，因此可用于兽药的制备。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。本专利技术提供的褐藻糖胶提取方法，采用生物酶解法，基于海带细胞壁的结构和成分基础上，分阶段，适量地加相关酶，以使细胞壁彻底地裂解，将其中的褐藻糖胶充分的释放出来，以此提高褐藻糖胶的提取率；在提取过程中加入改性凹凸棒土进行脱色和去除腥味，使制品外观更加纯净；另外，简化提取步骤，减少化学原料的使用，达到环保的目的。本专利技术提供的一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1）：海带预处理，清洗海带，切成小段、研磨成浆液；步骤（2）：向浆液中加入浆液重量5‑7倍的水，搅拌均匀，浸泡12‑36小时后，将浆液转入酶解容器内；步骤（3）：向酶解容器内加入酸性纤维素酶、半纤维素酶，搅拌均匀，PH控制在4.5‑6.5之间，温度控制在45‑55℃之间，反应8‑12小时，冷却，得产品一；步骤（4）：向产品一加碱性果胶酶，搅拌均匀，PH控制在8.0‑10.0之间，温度控制在40‑70℃之间，反应7‑12小时，冷却，得产品二；步骤（5）：向产品二加蛋白酶，搅拌均匀，PH控制在6.0‑9.0之间，温度控制在30‑60℃之间，反应3‑11小时，冷却，得产品三；步骤（6）：向产品三中加入其重量5‑7％的氯化钠和重量10‑15 倍的水，在50‑80℃的温度条件下，反应120‑160分钟，得到褐藻酸钠胶状物；步骤（7）：向褐藻酸钠胶状物加入重量为其0.2‑5％的改性凹凸棒土，脱色除腥味20‑40min，得产品四；步骤（8）：将得到的产品四通过离心机分离出残渣，得到产品五；用适量水洗涤残渣，再次离心，得到产品六；步骤（9）：向产品六加入质量浓度为90‑94％的酒精，脱水15‑30min，得到固相褐藻糖胶，酒精与产品六的体积比为1.5∶1。...

【技术特征摘要】
1.一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1）：海带预处理，清洗海带，切成小段、研磨成浆液；步骤（2）：向浆液中加入浆液重量5-7倍的水，搅拌均匀，浸泡12-36小时后，将浆液转入酶解容器内；步骤（3）：向酶解容器内加入酸性纤维素酶、半纤维素酶，搅拌均匀，PH控制在4.5-6.5之间，温度控制在45-55℃之间，反应8-12小时，冷却，得产品一；步骤（4）：向产品一加碱性果胶酶，搅拌均匀，PH控制在8.0-10.0之间，温度控制在40-70℃之间，反应7-12小时，冷却，得产品二；步骤（5）：向产品二加蛋白酶，搅拌均匀，PH控制在6.0-9.0之间，温度控制在30-60℃之间，反应3-11小时，冷却，得产品三；步骤（6）：向产品三中加入其重量5-7％的氯化钠和重量10-15倍的水，在50-80℃的温度条件下，反应120-160分钟，得到褐藻酸钠胶状物；步骤（7）：向褐藻酸钠胶状物加入重量为其0.2-5％的改性凹凸棒土，脱色除腥味20-40min，得产品四；步骤（8）：将得到的产品四通过离心机分离出残渣，得到产品五；用适量水洗涤残渣，再次离心，得到产品六；步骤（9）：向产品六加入质量浓度为90-94％的酒精，脱水15-30min，得到固相褐藻糖胶，酒精与产品六的体积比为1.5∶1。2.根据权利要求1所述的生物酶解法提取褐藻糖胶的方法，其特征在于：所述步骤（3）中酸性纤维素酶、半纤维素酶加入量分别为步骤（1）中加水后浆液重量的9-11%。3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：何声武，程贤防，
申请(专利权)人：安徽天安生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34