一种荧光探针NASA及其制备和应用制造技术

技术编号:15626715 阅读:140 留言:0更新日期:2017-06-14 07:36
一种荧光探针NASA及其制备和应用。本发明专利技术提供了一种可用于检测体外S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase,简称SAHH)的荧光探针。主要合成方法为在SAHH的作用部位腺苷上通过C-S键连接1,8-萘酰亚胺生成结构为

【技术实现步骤摘要】
一种荧光探针NASA及其制备和应用
本专利技术涉及荧光探针领域,具体涉及一种可用于检测S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteinehydrolase,简称SAHH)的荧光探针。在1,8-萘酰亚胺上引入腺苷分子,利用反应物与产物的荧光差别实现选择性地检测S-腺苷同型半胱氨酸水解酶。
技术介绍
S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH,EC:3.1.3.1)是细胞内广泛存在的一种酶,它催化S-腺苷同型半胱氨酸(AdoHcy)水解生成腺苷和同型半胱氨酸。抑制SAHH将导致细胞内甲基化抑制物AdoHcy的堆积,从而对转甲基反应产生反馈性抑制作用。而甲基化对于维持细胞的活性是必需的。鉴于SAHH在调节生物体转甲基化反应中的核心地位,它已被选择作为多种新药研发的重要靶点,包括免疫抑制剂、抗病毒药、防治动脉粥样硬化和阿尔茨海默病药物。SAHH抑制剂全新的化学结构、良好的作用效果和独特的作用靶点已引起国内外研究者广泛的兴趣。荧光探针是有效检测生命体内SAHH的手段之一,相比吸光度法具有检测灵敏的优势。一个具有应用前景的荧光探针应具有作用前后荧光变化明显、对目标分子响应快、选择性好、合成简单等优点。目前应用于检测SAHH的荧光探针寥寥无几,查阅只见利用S-腺苷同型半胱氨酸的代谢产物Hcy来间接检测SAHH的方法。因此开发对其SAHH的探针具有很大挑战性。
技术实现思路
本专利技术就是针对上述问题,提供了一种可用于选择性检测细胞内SAHH的荧光探针,此探针可以在生理条件下选择性地与SAHH作用,作用后荧光显著增强。本专利技术采用如下技术方案:本专利技术提供了一种可用于检测S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteinehydrolase,简称SAHH)的荧光探针。主要合成方法为在SAHH的作用部位腺苷上通过C-S键连接1,8-萘酰亚胺;该化合物在SAHH作用下,生成4-巯基-1,8-萘酰亚胺,利用反应前后荧光性质的差异实现对SAHH的选择性检测。合成的探针化合物的结构用代号NASA表示。所述荧光探针的结构式Ⅰ如下。所述的荧光探针的制备方法为:在SAHH的作用部位腺苷上通过C-S键连接1,8-萘酰亚胺;具体制备步骤如下,1)在干燥THF50ml中加入三苯基膦(cas:603-35-0)3.76g,搅拌至全溶。冰浴条件下,5min内缓慢滴加偶氮二羧酸二乙酯(cas:1972-28-7)2.2ml。搅拌30min后,加入2',3'-异丙叉腺苷(cas:362-75-4)2.1g。维持0度搅拌10min。5min内缓慢滴加硫代乙酸(cas:507-09-5)1.0ml。0度反应1小时后,旋干溶剂,得到的黄色固体用柱层析(CHCl2-MeOH,100:0,95:5,90:10)分离。得到化合物11.62g,产率为65%。2)在20ml乙醇中,加入4-溴-1,8-萘酐(cas:81-86-7)1g与1-丁胺(cas:109-73-9)353uL,78度回流4小时。反应完后旋干溶剂,得到产物21.2g,产率100%。3)在干燥的甲醇中,加入步骤1)中产物1500mg和步骤2)中产物453mg,降温到-20度,加入甲醇钠(cas:124-41-4)147mg。溶液缓慢上升到室温,持续反应20h。反应结束后旋干溶剂,柱层析分离(CHCl2-MeOH,100:0,95:5,90:10),得到产物3314mg,产率40%。4)在水和甲酸1:1的溶液2ml中,0度下加入步骤3)中产物3100mg,缓慢上升到室温反应4h,加温到50度反应2h。反应完后旋干溶剂。柱层析得到荧光探针NASA50mg,产率53%。步骤1)中所述的三苯基膦、偶氮二羧酸二乙酯、2',3'-异丙叉腺苷、硫代乙酸的加入量为2:2:1:2;步骤3)中化合物1与甲醇钠的加入量为1:2.2。所述步骤1)中,所用的溶剂为无水四氢呋喃;所述的步骤1)—4)中搅拌的方式为磁力搅拌。所述的荧光探针可以被S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteinehydrolase,简称SAHH)代谢而产生荧光变化。即所述的荧光探针与SAHH作用后,荧光峰从500nm蓝移到470nm处,并且有显著的荧光增强。所述的荧光探针应用于检测SAHH时,其荧光变化是因为生成具有结构II的化合物;该探针可以用于S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的抑制剂筛选。本专利技术的有益效果:该化合物在SAHH存在下荧光发生显著改变,可用于高灵敏性、高通量地检测SAHH。尤其是,该化合物可用于S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的抑制剂筛选。本专利技术可用于检测体外S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteinehydrolase,简称SAHH)的荧光探针。主要合成方法为在SAHH的作用部位腺苷上通过C-S键连接1,8-萘酰亚胺生成结构为的化合物;在SAHH作用下,生成利用反应前后荧光性质的差异实现对SAHH的检测,该探针可以高灵敏性,高通量地用于SAHH抑制剂的筛选。附图说明图1实施例1中提供的荧光探针NASA的合成路线图;图2本专利技术提供的荧光探针NASA检测SAHH的原理示意图;图3实施例1中合成的探针NASA的1HNMR(a),13CNMR(b);图4实施例2中荧光探针NASA水溶液的荧光激发光谱(a)、发射光谱(b);图5实施例3中荧光探针NASA的水解产物水溶液的荧光激发光谱(a)、发射光谱(b);图6实施例4中荧光探针NASA与SAHH响应后光谱470nm峰值随时间的线性关系图;图7实施例5中荧光探针NASA与不同浓度的SAHH响应后光谱变化图;图8实施例6中荧光探针NASA与SAHH反应检测470nm荧光强度的动力学示意图;图9实施例7中以荧光探针NASA为底物,Dznep能够抑制SAHH的酶活性;图10实施例8中以荧光探针NASA为底物,检测SAHH的四种抑制剂的IC50值。具体实施方式下述实施例用于进一步说明本专利技术,但本专利技术不限于实施例。实施例1(探针的合成):如图1所示,NASA的合成分为4步(如上),化合物1的鉴定为:MS:366.12(positivemode).1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ(ppm):8.37(s,1H),8.19(s,1H),6.07(d,1H,J=2.08Hz),5.77(s,2H),5.51(d,1H,J=6.36Hz),4.97(d,1H,J=6.36Hz),4.34(t,1H,J=6.88Hz),3.29(d,1H,J=7.2Hz),3.08(d,1H,J=6.64Hz),1.60(s,3H),1.39(s,3H)。化合物3的鉴定:MS:575.20(positivemode).1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ(ppm):8.59(d,1H,J=7.28Hz),8.55(d,1H,J=8.48Hz),8.37(d,1H,J=7.76Hz),8.27(s,1H),7.78(s,1H),7.71(t,1H,J=8.16Hz),7.57(d,1H,J=7.8Hz),6.08(s,1H),5.56(d,1H,J=6.2Hz),5.20(d,1H,J=6本文档来自技高网...
一种荧光探针NASA及其制备和应用

【技术保护点】
一种荧光探针NASA,其特征在于:所述的荧光探针的结构为结构I所示,

【技术特征摘要】
1.一种荧光探针NASA,其特征在于:所述的荧光探针的结构为结构I所示,结构代号:NASA;R可以为氢原子、或也可以为具有1-10个碳原子的取代烷基、或苯基、或取代苯基,取代苯基上的取代基为C1-C5的烷基,苯基上取代基的个数为1-5个。2.根据权利要求1所述的荧光探针的应用,其特征在于:所述的荧光探针应用于检测SAHH时,其荧光变化是因为生成具有结构II的化合物;3.一种权利要求1所述的荧光探针的应用,其特征在于:所述的荧光探针可以用于S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteinehydrolase,简称SAHH)的检测。4.一种权利要求3所述的荧光探针的应用,其特征在于:所述的荧光探针可以用于检测细胞中的SAHH。5.根据权利要求3所述的荧光探针的应用,该探针可以用于S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的抑制剂筛选。6.根据权利要求3所述的荧光探针的应用,该探针可以用于离体血红细胞中S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的定量检测。7.一种权利要求1所述荧光探针的制备方法,其具体制备步骤如下,1)在干燥THF50ml中加入三苯基膦(cas:603-35-0)3.76g,搅拌至全溶,冰浴条件下,5min内缓慢滴加偶氮二羧酸二乙酯(...

【专利技术属性】
技术研发人员:贾燕韩克利李鹏
申请(专利权)人:中国科学院大连化学物理研究所
类型:发明
国别省市:辽宁,21

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