一种检测艰难梭菌的试剂盒及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种艰难梭菌的酶联免疫法检测试剂盒，它包括如下组分：稀释液、封闭液、包被有艰难梭菌抗体的酶标板、酶标二抗、阳性对照品、洗涤液、显色液和终止液，其中，稀释液为每100ml含有1mlNP‑40、0.5～2mlTritonX‑100、1gBSA，0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液。本发明专利技术还公开了前述试剂盒在检测艰难梭菌中的用途，本发明专利技术试剂盒可以高效检测艰难梭菌，应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
一种检测艰难梭菌的试剂盒及其用途
本专利技术涉及一种用于检测艰难梭菌的试剂盒及其用途。
技术介绍
艰难梭菌(C.DIFF)是一种革兰氏染色阳性、有芽孢、专性厌氧的梭状杆菌，是唯一能引起院内感染的厌氧菌，也是引起院内感染病原体中唯一能形成芽孢的细菌。艰难梭菌感染引起的腹泻主要原因是因为抗生素的使用导致菌群细菌组分改变引起菌群生态失调，从而使艰难梭菌菌群增殖，最终导致腹泻。较高的发生率已经被认为发生在那些长期暴露于抗生素以及具有严重潜在并存病的免疫能力低下的老年和儿童患者中。感染的症状变化范围广泛，从无症状状态或轻度艰难梭菌感染到严重及威胁生命的状态。自从21世纪初，艰难梭菌感染的发生率和严重性急剧上升，在发达国家，艰难梭菌是院内感染性腹泻的首要病因，高达20％报道的抗生素相关性腹泻以及近乎所有的假膜性结肠炎都是由艰难梭菌感染引起的。因此，高效检测艰难梭菌非常重要。临床上各种各样的检测方式不断发展，包括从最初的产毒株培养，细胞毒性检测和毒素中和试验，到现在最常用的酶联免疫两步法、三步法和PCR基因检测法。PCR基因检测法检测灵敏度过高，但导致的假阳性率也高。酶联免疫法二步法也存在检测效果不佳的问题，需要进一步改进。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种新的用于检测艰难梭菌的试剂盒。本专利技术艰难梭菌的酶联免疫法检测试剂盒，它包括如下组分：稀释液、封闭液、包被有艰难梭菌抗体的酶标板、酶标二抗、阳性对照品、洗涤液、显色液和终止液，其中，稀释液为每100ml含有1mlNP-40、0.5～2mlTritonX-100、1gBSA，0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液。其中，稀释液为每100ml含有1mlNP-40、0.5～2mlTritonX-100、1gBSA，0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液。所述稀释液为每100ml含有1mlNP-40、0.5～1mlTritonX-100、1gBSA，0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液；进一步优选所述稀释液为每100ml含有1mlNP-40、0.5mlTritonX-100、1gBSA，0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液。优选地，所述封闭液每100ml含有2gBSA、1g-5g海藻糖、1ml-5mlFBS。进一步优选地，所述封闭液为每100ml含有2gBSA、2g-3g海藻糖、2ml-3mlFBS的磷酸盐缓冲液；优选所述封闭液为每100ml含有2gBSA、3g海藻糖、3mlFBS的磷酸盐缓冲液。优选地，所述酶标板上包被的艰难梭菌抗体为鼠抗艰难梭菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体以及羊抗艰难梭菌毒素A多克隆抗体和羊抗艰难梭菌毒素B多克隆抗体的混合物。优选地，所述包被有艰难梭菌抗体的酶标板按照如下方法制备：取抗体，稀释制成溶液，以抗体计0.2-0.5微克/孔加入酶标板的孔中，4℃包被10-14小时。优选地，所述酶标二抗中的抗体分别为辣根过氧化物酶标记的羊抗艰难梭菌谷氨酸脱氢酶多克隆抗体以及辣根过氧化物酶标记的羊抗艰难梭菌毒素A多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗艰难梭菌毒素B多克隆抗体的混合物。优选地，所述酶标二抗包括酶标二抗1和酶标二抗2，酶标二抗1为每100ml含有1g-2gBSA、5ml-20mlFBS、20-50μg辣根过氧化物酶标记的羊抗艰难梭菌谷氨酸脱氢酶多克隆抗体、50ml甘油的磷酸盐缓冲液；酶标二抗2为每100ml含有1g-2gBSA、5ml-20mlFBS、20-50μg辣根过氧化物酶标记的羊抗艰难梭菌毒素A多克隆抗体、20-50μg辣根过氧化物酶标记的羊抗艰难梭菌毒素B多克隆抗体、50ml甘油的磷酸盐缓冲液。优选地，所述洗涤液是含有0.05％Tween20的磷酸盐缓冲液；所述显色液包括含过氧化物的A液及含四甲基联苯胺的B液。所述终止液是浓度为0.5M-2M的硫酸溶液。本专利技术还提供了前述试剂盒在检测艰难梭菌中的用途。NP-40：乙基苯基聚乙二醇。TritonX-100：聚乙二醇辛基苯基醚。BSA：牛血清白蛋白。Tween20：吐温20。FBS：胎牛血清。本专利技术稀释液通过各个组分的配合，可有效的帮助抗体捕获样本中的抗原，提高产品的敏感性。采用本专利技术试剂盒，应用酶联免疫法二步法可以高效快速检测艰难梭菌，应用前景良好。下面通过具体实施方式对本专利技术做进一步详细说明，但是并不是对本专利技术的限制，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。具体实施方式实施例1本专利技术用于检测艰难梭菌的试剂盒1、本专利技术试剂盒的组成(1)本专利技术稀释液：配方1：PBS(PH7.4)、1％NP-40、0.5％TritonX-100、1％BSA，0.05％Tween20配方2：PBS(PH7.4)、1％NP-40、1％TritonX-100、1％BSA，0.05％Tween20配方3：PBS(PH7.4)、1％NP-40、2％TritonX-100、1％BSA，0.05％Tween20PBS：磷酸缓冲盐溶(2)本专利技术封闭液配方1：PBS、2％BSA、1％海藻糖、1％FBS配方2：PBS、2％BSA、2％海藻糖、2％FBS配方3：PBS、2％BSA、3％海藻糖、3％FBS配方4：PBS、2％BSA、5％海藻糖、5％FBS(3)其余组分：包被有特异性抗体的酶标板、HRP酶标二抗、阳性对照品(GLDH重组抗原，ToxinA/B重组抗原)、洗涤液、显色液、终止液。特异性抗体的酶标板：特异性抗体为鼠抗艰难梭菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体，羊抗艰难梭菌毒素A多克隆抗体和羊抗艰难梭菌毒素B多克隆抗体，均购自南京钟鼎生物技术有限公司；各抗体以碳酸盐稀释后，以0.2-0.5微克/孔加入，4℃包被10-14小时，其中，鼠抗艰难梭菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体单独一个孔，羊抗艰难梭菌毒素A多克隆抗体和羊抗艰难梭菌毒素B多克隆抗体混在一起。HRP酶标二抗：辣根过氧化物酶标记的羊抗艰难梭菌谷氨酸脱氢酶多克隆抗体，辣根过氧化物酶标记的羊抗艰难梭菌毒素A多克隆抗体，辣根过氧化物酶标记的羊抗艰难梭菌毒素B多克隆抗体，购自武汉博欧特生物科技有限公司，制成每100ml含有1g-2gBSA、5ml-20mlFBS、抗体20-50微克(每种抗体20-50微克)、50ml甘油的磷酸盐缓冲液，pH5.0-7.0。阳性对照品：含有谷氨酸脱氢酶重组抗原，ToxinA/B重组抗原的磷酸盐缓冲液。谷氨酸脱氢酶重组抗原，ToxinA/B重组抗原均购自南京中鼎生物技术有限公司。洗涤液：每100ml含0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液。显色液：含过氧化物的A液及含TMB(四甲基联苯胺)的B液。购自北京索莱宝科技有限公司，使用时A液和B液等比混合后100微升/孔加入显色。终止液：每1L含有0.5M-2M的硫酸溶液。以下用实验例的方式来说明本专利技术的有益效果：实验例1与现有通用稀释液的比较1、实验材料本专利技术试剂盒：采用本专利技术实施例1的试剂盒，其中封闭液为配方2，稀释液分别采用配方1～配方10的稀释液。配方1：PBS(PH7.4)、1％NP-40、0.5％TritonX-100、1％BSA，0.05％Tween20配方2：PBS(PH7.4)、1％NP-40、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种艰难梭菌的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：它包括如下组分：稀释液、封闭液、包被有艰难梭菌抗体的酶标板、酶标二抗、阳性对照品、洗涤液、显色液和终止液，其中，稀释液为每100ml含有1mlNP‑40、0.5～2mlTritonX‑100、1gBSA，0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种艰难梭菌的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：它包括如下组分：稀释液、封闭液、包被有艰难梭菌抗体的酶标板、酶标二抗、阳性对照品、洗涤液、显色液和终止液，其中，稀释液为每100ml含有1mlNP-40、0.5～2mlTritonX-100、1gBSA，0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述稀释液为每100ml含有1mlNP-40、0.5～1mlTritonX-100、1gBSA，0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液；优选所述稀释液为每100ml含有1mlNP-40、0.5mlTritonX-100、1gBSA，0.05mlTween20的磷酸盐缓冲液。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述封闭液每100ml含有2gBSA、1g-5g海藻糖、1ml-5mlFBS。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述封闭液为每100ml含有2gBSA、2g-3g海藻糖、2ml-3mlFBS的磷酸盐缓冲液；优选所述封闭液为每100ml含有2gBSA、3g海藻糖、3mlFBS的磷酸盐缓冲液。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述酶标板上包被的艰难梭菌抗体为鼠抗艰难梭菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体以及羊抗艰难梭菌毒素A多克隆抗体和羊抗艰难梭菌毒素B多克隆抗体的混合物。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄绣川，邱兵，
申请(专利权)人：成都金思唯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51