一种菊花多糖的提取方法技术

一种菊花多糖的提取方法，它是用水先将粗多糖从原草药中提取出来，用氯仿、石油醚等除去脂溶性杂质，最后用乙醇将其从水提物中沉淀析出，从而分离出菊花多糖，经干燥即得到固体的菊花多糖。本发明专利技术填补了菊花多糖提取方法的空白，具有快速、简便、成本低、收率高的优点，并有利于进一步研究菊花多糖在医疗上的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药活性成份的提取方法，更具体地说它涉及。
技术介绍
多糖是极性大分子化合物。一般从天然产物中(植物、微生物、海藻等)提取。到目前为止，已有近百种多糖类化合物被提取出来.许多实验都证明多糖与感染、肿瘤、炎症及一些自身免疫性疾病有密切关系。因此对多糖的研究与开发已越来越引起人们的广泛关注。多糖类药物生物活性的研究是多糖类研究中最活跃亦是进展最快的领域。近年来糖类被发现在免疫系统中起十分关键的作用，在人体对病毒式细菌侵袭的防御过程中尤其如此。现代医学研究证菊花有显著扩张冠状动脉、增强冠状动脉血流量的作用，能抑制肝脏中胆固醇的合成和加快胆固醇的分解代谢，有抗炎解热的作用，常服可延年益寿。至今还未见有菊花多糖提取方法的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提出。本专利技术以正交实验法优化菊花中多糖采用醇析水提法，以菊花多糖提取产率和含量为指标，对提取过程中水浸提时间，浸提温度，沉析用的乙醇浓度三个因素三个水平的提取效果进行深入分析，最后确定提取菊花多糖的最佳提取条件，为菊花多糖的开发利用提供试验依据。本专利技术的目的是通过如下措施来达到的菊花多糖的提取采用水提乙醇析出沉淀法，其原理是根据菊花多糖易溶于水，难溶于乙醇，石油醚，氯仿等溶剂的性质，可用水先将粗多糖从原草药中提取出来，用氯仿、石油醚等除去脂溶性杂质，最后用乙醇将其从水提物中沉淀析出，从而分离出菊花多糖，经干燥即得到固体的菊花多糖。更具体地说它依次包括如下步骤①.取一定量的菊花加30倍水恒温浸泡，浸提时间为1-3小时，浸提恒温在80-100℃范围内，过滤，得提取液；②.将浸泡过的菊花残渣再加15-20倍水继续恒温浸泡30分钟，过滤得提取液；第三次将浸泡过的菊花残渣加15-20倍水继续恒温浸泡30分钟，过滤得提取液；合并三次提取液；③.将提取液置于旋转蒸发器浓缩至定量的菊花3倍量液体，离心收集上清液，用sevag试剂法除蛋白2次，用氯仿或乙酸乙酯2倍量萃取除去脂溶性杂质1-3次，取水层；④.在水层中加入乙醇，收集乙醇浓度范围为70-90％析出的沉淀，沉淀用丙酮和乙醚分别洗涤2次，干燥，即得固体菊花多糖。在上述技术方案中，所述浸泡时间为2小时、浸提温度为100℃、沉淀用乙醇浓度为80％。在上述技术方案中，所述浸泡时间为3小时、浸提温度为100℃、沉淀用乙醇浓度为80％。本专利技术是一种提取菊花多糖的方法，填补了菊花多糖提取方法的空白，本方法提取菊花多糖具有快速、简便、成本低、收率高的优点。有利于进一步研究菊花多糖在医疗上的应用。附图说明图1为本专利技术正交试验影响菊花多糖产率的因素比较图；图2为本专利技术正交试验影响菊花多糖含量的因素比较图。具体实施例方式下面结合附图详细说明本专利技术的实施情况(注在图1、图2中横坐标为影响因素，纵坐标为K值，同一因素MAX与MIN之差为极值R) 1、菊花多糖的提取方法①.取50g的菊花加30倍水1500ml恒温浸泡，浸提时间为1-3小时，浸提恒温在80-100℃范围内，过滤，得提取液；②.将浸泡的菊花再加900ml水继续恒温浸泡30分钟，过滤得提取液；再将浸泡的菊花加900ml水继续恒温浸泡30分钟，过滤得提取液；合并三次提取液；③.将提取液置于旋转蒸发器浓缩至150ml，离心收集上清液，用sevag试剂法除蛋白2次，用氯仿或乙酸乙酯100ml萃取除去脂溶性杂质1-3次，取水层；④.在水层中加入乙醇，收集乙醇浓度为70-90％析出的沉淀，沉淀用丙酮和乙醚分别洗涤2次，干燥，即得固体菊花多糖。2.菊花多糖含量的测定方法2.1测定方法用苯酚-硫酸法测定不同浓度葡萄糖的吸光度来制定浓度-吸光度标准曲线，再将菊花多糖样品配成一定浓度的溶液按标准曲线项下操作测其吸光度，代入浓度-吸光度标准曲线方程经计算得到所得多糖含量。2.2标准曲线的制备 精密称取干燥至恒重的葡萄糖对照品10.2mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得葡萄糖对照品储备液。准确量取上述对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置10ml量瓶中，再分别各取0.5ml加浓硫酸7.5ml和5％苯酚1.5ml，于40℃保温30分钟，在490nm波长处测定吸收度，得回归方程C＝132.57A-20.67，r＝0.9971。结果表明，在10.2～51.0μg·ml-1的浓度范围内具有良好的线性关系。2.3正交试验设计 按照上述试验的提取工艺，经过多次单因子对比试验，正交试验设计的因素为水浸提时间、浸提温度、沉淀的乙醇浓度等3个因素，每因素3水平(见表1)，以菊花多糖的产率和含量为考察指标，用L9(34)正交表安排试验。表1因素与水平表 (注试验时其它条件完全相同)3.结果按正交实验设计方法提取菊花多糖，收率和含量结果见表2。表2菊花多糖提取正交试验设计及结果 (注试验时其它条件完全相同)3.1最佳提取菊花多糖产率的工艺条件的确定经过运算可得出每个因素各水平之和K1、K2、K3。由表2中产率的R值及图1的峰值可以看出，影响提取产率的因素排序为B＞A＞C，B的影响最大，C则最小。综合各因素K值和直观比较，得出理论上最佳提取产率的工艺条件为A2B3C2。故确定其最佳提取产率工艺条件为浸提时间为2h，浸提温度为100℃，沉析用乙醇浓度为80％。3.2最佳提取菊花多糖含量的工艺条件的确定此外，由表2中含量的R值及图2来分析，影响其含量的因素排序为A＞B＞C。A的影响较显著。说明提取过程中，浸提时间对菊花多糖的含量影响是最大的，时间延长有利于提高菊花多糖的含量；乙醇浓度、浸提温度对菊花多糖含量的影响也较大，由表中可看出沉淀用乙醇浓度为80％，浸提温度为100℃时含量较高。从其含量的K1、K2、K3看到，所得菊花多糖含量最佳的工艺条件为A3B3C2。综上述提取菊花多糖的最佳工艺条件宜为浸提时间为3h，浸提温度为100℃，沉析用的乙醇浓度为80％。3.3验证实验为验证最佳工艺，称取菊花50g，按照优化后所得最佳提取工艺即加入30倍量水提取3次，浸提时间为3h，浸提温度为100℃，沉析用的乙醇浓度为80％进行提取，并对所得多糖称重并进行含量测定。结果表明，多糖得率为6.25％，菊花多糖相对百分含量为78.30％，可知与正交表中的最优水平一致，说明本专利技术所确定的工艺合理。需要说明的是对于所属领域的技术人员来说，在不改变本专利技术原理的前提下还可以对本专利技术做出若干的改变或变形，这同样属于本专利技术的保护范围。权利要求1.，其特征在于它依次包括如下步骤①.取一定量的菊花加30倍水恒温浸泡，浸提时间为1-3小时，浸提恒温在80-100℃范围内，过滤，得提取液；②.将浸泡过的菊花残渣再加15-20倍水继续恒温浸泡30分钟，过滤得提取液；第三次将浸泡过的菊花残渣加15-20倍水继续恒温浸泡30分钟，过滤得提取液；合并三次提取液；③.将提取液置于旋转蒸发器浓缩至定量的菊花3倍量液体，离心收集上清液，用sevag试剂法除蛋白2次，用氯仿或乙酸乙酯2倍量萃取除去脂溶性杂质1-3次，取水层；④.在水层中加入乙醇，收集乙醇浓度范围为70-90％析出的沉淀，沉淀用丙酮和乙醚分别洗涤2次，干燥，即得固体菊花多糖。2.根据权利要求1所述的，其特征在于所述浸泡时间为2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种菊花多糖的提取方法，其特征在于它依次包括如下步骤：①．取一定量的菊花加３０倍水恒温浸泡，浸提时间为１－３小时，浸提恒温在８０－１００℃范围内，过滤，得提取液；②．将浸泡过的菊花残渣再加１５－２０倍水继续恒温浸泡３０分钟， 过滤得提取液；第三次将浸泡过的菊花残渣加１５－２０倍水继续恒温浸泡３０分钟，过滤得提取液；合并三次提取液；③．将提取液置于旋转蒸发器浓缩至定量的菊花３倍量液体，离心收集上清液，用ｓｅｖａｇ试剂法除蛋白２次，用氯仿或乙酸乙酯２倍量萃取 除去脂溶性杂质１－３次，取水层；④．在水层中加入乙醇，收集乙醇浓度范围为７０－９０％析出的沉淀，沉淀用丙酮和乙醚分别洗涤２次，干燥，即得固体菊花多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马力，张玉，陈东生，陈华庭，陈文，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]