The invention provides a lighting system for cells or tissues in different depth of super resolution imaging, which belongs to the technical field of optics, including laser beam, laser produced are used for the initial lens, then enter the initial mirror, the mirror will be transferred to the initial beam reflector group, the cylindrical lens is arranged between the initial the mirror and mirror group, beam to Z through the axial cylindrical mirror into the mirror group, X, Y axis in one direction through the zoom beam section of the cylindrical mirror, the beam into a thin beam, thin light beam through the mirror group into the lens sheet beam can form half of total internal reflection illumination by adjusting the mode. The invention solves half the total internal reflection or wide field illumination in fluorescence microscopic imaging of deep positioning samples caused by background intensity is too high so that the positioning process can not be carried out problems, imaging depth of several microns, simple and compact structure, is suitable for commercial super resolution fluorescence micro positioning system.
【技术实现步骤摘要】
针对细胞或组织不同深度超分辨率显微成像的照明系统
本专利技术涉及生物显微
,尤其涉及一种可对细胞或组织切片不同深度进行四色超分辨率荧光定位显微成像的照明系统。技术背景超分辨率荧光定位显微技术为2006年由庄小威,埃里克贝齐格(EricBetzig)先后提出的一种可以突破光学成像分辨率极限的一种方法。埃里克贝齐格通过这项技术在2014年被授予诺贝尔化学奖。超分辨率荧光定位显微技术由其使用的荧光标记分子的种类不同可分为两种,一种是庄小威专利技术的随机重构光学显微技术,这种技术利用荧光染料分子(Alexa系列和Atto系列等)特异性的标记所观察样品的结构,通过荧光染料分子在特殊的缓冲液中具有的“开”“关”效应来进行超分辨率成像;另一种为埃里克贝齐格专利技术的使用荧光蛋白分子标记样品结构。传统荧光显微镜的分辨率由显微镜系统的数值孔径及成像时所使用的荧光波长所限制(其中λ为荧光波长,NA为显微镜系统数值孔径),所以无法突破200nm的分辨率极限,而荧光定位显微技术的分辨率则由分辨率极限和在一次定位过程中系统所收集到的光子数量所决定,所以收集到的光子数量越多,荧光定位显微镜的分辨率也就越高,具体数值可以达到20nm甚至更小。为了尽可能的在一次定位过程中收集到更多的光子,人们使用了很多方法,其中比较有效也是普遍采用的方法是使用全内反射的照明方式,如附图1(c)所示,这种照明方式将照明光限制在细胞底层几百纳米的范围内,这样就可以避免细胞焦平面以外的其他荧光分子被照亮,尽可能的减小背景光,从而增加图片清晰度。这种方法在对细胞底层结构成像时可以获得很好的效果,但是在 ...
【技术保护点】
一种针对细胞或组织不同深度超分辨率显微成像的照明系统,它包括激光器,激光器产生的光束依次经过用于准直的初始透镜,再进入初始反射镜,由初始反射镜将光束传递到反射镜组,其特征在于,初始反射镜与反射镜组之间设有柱面镜,光束以Z轴向穿过柱面镜进入反射镜组中,穿过柱面镜后的光束截面的X、Y轴其中一个方向变焦,使光束变为薄片光束,薄片光束经反射镜组进入物镜,所述薄片光束能通过调节形成半全内反射照明模式。
【技术特征摘要】
1.一种针对细胞或组织不同深度超分辨率显微成像的照明系统,它包括激光器,激光器产生的光束依次经过用于准直的初始透镜,再进入初始反射镜,由初始反射镜将光束传递到反射镜组,其特征在于,初始反射镜与反射镜组之间设有柱面镜,光束以Z轴向穿过柱面镜进入反射镜组中,穿过柱面镜后的光束截面的X、Y轴其中一个方向变焦,使光束变为薄片光束,薄片光束经反射镜组进入物镜,所述薄片光束能通过调节形成半全内反射照明模式。2.根据权利要求1所述的针对细胞或组织不同深度超分辨率显微成像的照明系统,其特征在于,所述照明系统以激光器的初始透镜入射位置不同,来改变薄片光束的照明形式,通过准直的初始透镜和初始反射镜的入射角来调节。3.根据权利要求1或2所述的针对细胞或组织不同深度超分辨率显微成像的照明系统,其特征在于,所述的激光器包括三组波长的光纤,其中波长750nm光束耦合进第一光纤中,通过第一透镜进行准直,第一透镜对应的初始反射镜为全反射镜;波长647nm和561nm光束耦合进第二光纤中,通过第二透镜进行准直,第二透镜对应的初始反射镜为二向色镜;波长488nm和405nm光束耦合进第三光纤中,通过第三透镜进行准直,第三透镜对应的初始反射镜为二向色镜,所述的第一光纤、第二光纤、第三光纤由全反射镜和两块二向色镜引入光路中,第一光纤、第二光纤、第三光纤进入光路后共焦,并且光束具有相同光域直径。4.根据权利要求3所述的针对细胞或组织不同深度超分辨率显微成像的照明系统...
【专利技术属性】
技术研发人员:王莹,
申请(专利权)人:宁波纳美致生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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