十色抗体组合物及其在白血病淋巴瘤分型中的应用制造技术

本发明专利技术属于抗体技术领域，提供了一种抗体组合物，由十种抗体组成，包括抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA‑DR抗体和抗CD45抗体。本发明专利技术提供了包含以上抗体的白血病淋巴瘤初筛试剂盒及其应用等。

Application of ten antibody compositions and types of leukemia and lymphoma

The invention belongs to the technical field of antibody, an antibody composition is provided, which is composed of ten kinds of antibody, anti CD71 antibody and anti CD7 antibody, anti CD13 antibody and anti CD33 antibody, anti CD19 antibody and anti CD117 antibody, anti CD34 antibody and anti CD10 antibody, anti DR antibody and anti CD45 antibody HLA. The present invention provides a leukemia lymphoma preliminary screening reagent kit containing the same antibody and its application and the like.

【技术实现步骤摘要】
十色抗体组合物及其在白血病淋巴瘤分型中的应用
本专利技术属于抗体
，具体而言，本专利技术涉及一种十色的抗体组合物及其在白血病和淋巴瘤分型中的应用及分型试剂盒等。
技术介绍
白血病、淋巴瘤等血液肿瘤近年已经上升为最威胁人类健康的几大疾病之一。白血病的免疫分型在疾病的诊断中占有非常重要的地位。通过流式细胞术对白血病淋巴瘤等进行免疫分型，是血液肿瘤诊断的重要手段之一。我公司专利CN105606797B中公开了一种四色流式抗体组合物及其在白血病淋巴瘤分型中的应用，其包含了7种荧光标记的单克隆抗体，尽管利用较少的抗体对多方面的白血病进行了较全面的检测，但是需要使用两次上样。专利CN103675277A公开了一种流式细胞术鉴别诊断横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤骨髓转移及白血病的荧光探针及试剂盒，包含四种荧光抗体GD2-FITC、CD90-PE、CD45-PerCP、CD56-APC。我们检索到的最多种抗体组合物出现在专利CN103018463A中，其公开了一种检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒，包含七种单克隆抗体CD58、CD10、CD34、CD123、CD38、CD19、CD45。大量抗体的组合使用，除了需避免互相之间的干扰，还需要高效地进行白血病/淋巴瘤细胞检测。目前尚未发现有“单管十色”组合(十种抗体组合)的白血病/淋巴瘤检测及其试剂盒。然而，本专利技术人没有在前人无法突破的困难面前退缩，根据十余年临床实践和研究的经验，令人意外地筛选出10种抗体的组合，只需要一次上样，就可有效进行多种血液肿瘤的免疫分型(特别是初筛)，而且节约了成本、操作更趋简单、快速，尤其是能区分多种相近的肿瘤(或发展阶段)，并可实现MDS流式积分的计算。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供新的抗体组合物及包括它们的试剂盒，用于进行白血病和淋巴瘤分型。另外，本专利技术还提供了使用它们进行白血病和淋巴瘤分型的方法和应用等。具体而言，在第一方面，本专利技术提供了抗体组合物，其包括抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA-DR抗体和抗CD45抗体。优选本专利技术第一方面的抗体组合物由抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA-DR抗体、抗CD45抗体组成。抗体(优选是单克隆抗体)组合物，其包括抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA-DR抗体和抗CD45抗体，优选其由抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA-DR抗体和抗CD45抗体组成。在本文中，抗体本身是本领域技术人员所熟知的，其特异结合(抗)相应抗原。抗体可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体，在本专利技术的具体实施方式中，优选是单克隆抗体。抗体可以是鼠源的，也可以是人源的。在本文中，如没有相反的指示，各抗体的抗原，即各细胞表面抗原(CD71、CD7、CD13、CD33、CD19、CD117、CD34、CD10、HLA-DR和CD45)，均为人细胞表面抗原。更优选本专利技术第一方面的抗体组合物中的每种抗体被标记不同(即检测波长不同)的荧光标记，优选每种抗体分别被标记的荧光标记选自包括但不限于以下荧光标记：FITC、AlexaFluor488、PE、ECD、PerCP、PerCP-cy5.5、PerCP-cy7、APC、AlexaFluor647、AlexaFluor680or700、APC-AlexaFluor700、APC-AlexaFluor750、APC-cy7、APC-H7、PacificBlue、HorizonV450、AmCyan、PacificOrange、KromeOrange、BrilliantViolet421(BV421)、BrilliantViolet510(BV510)、BrilliantViolet570(BV570)、BrilliantViolet605(BV605)、BrilliantViolet650(BV650)、BrilliantViolet711(BV711)、BrilliantViolet785(BV785)等。这些荧光标记、甚至是连接了荧光标记的抗体通常是可通过商业渠道获得，例如，AlexaFluor系列可购自Invitrogen,Inc.，BrilliantViolet系列可购自SirigenGroupLtd.，ECD和KromeOrage可购自BeckmanCoulter，APC-H7和Horizon可购自BDBiosciences。通过十色流式细胞仪，本专利技术第一方面的抗体组合物单管单次上机即可检测出抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA-DR抗体、抗CD45抗体的结果。在第二方面，本专利技术提供了用于白血病和淋巴瘤分型的试剂盒，其包括第一容器，其中，第一容器包括本专利技术第一方面的抗体组合物。本专利技术第二方面的试剂盒采用包括抗CD71抗体在内的10种抗体，互相之间没有产生干扰，只需要一次上样，就可有效进行多种血液肿瘤的免疫分型(特别是初筛)，尤其是能区分多种相近的肿瘤(或发展阶段)，并可实现MDS流式积分的计算，在血液肿瘤免疫分型中应用前景广阔。本专利技术第二方面的试剂盒还可以包括其他参与进行白血病和淋巴瘤分型的试剂和设备。优选本专利技术第二方面的试剂盒还包括第二容器，其中，第二容器包括红细胞裂解液(如，10×红细胞裂解液)。本专利技术第二方面的试剂盒中还可以包括缓冲液(如，磷酸盐缓冲液)、与流式细胞仪配套使用的流式管、细胞计数板、涡旋振荡器、移液器、离心机等，尤其是流式管、细胞计数板等耗材。在本文中，第一容器和第二容器中的标号仅仅为表示不同容器，并不对容器本身的材质、形状构成限制，只要容器能容纳并保存本专利技术的抗体组合物即可。容器可以是管、瓶，其材质可以是塑料或玻璃。其中，装有本专利技术第一方面的抗体组合物的第一容器优选能避光。另外，本专利技术第三方面的试剂盒还可以包括知道进行白血病和淋巴瘤分型的说明书或手册。第三方面，本专利技术提供了本专利技术第一方面的抗体组合物在制备白血病和淋巴瘤分型的试剂盒中的应用。优选在本专利技术第三方面的应用中，试剂盒是本专利技术第二方面的试剂盒。还优选在本专利技术第三方面的应用中，白血病和淋巴瘤包括MDS转化的急性髓细胞白血病、急性髓细胞白血病M3、骨髓增生异常综合征(MDS)、正常骨髓伴反应性B细胞增生、急性髓细胞白血病M5型、边缘区淋巴瘤(MZL)和Castleman病。也优选在本专利技术第三方面的应用中，白血病和淋巴瘤分型的方法包括：(1)处理骨髓或外周血样品，使呈单个细胞悬液状态；(2)将步骤(1)处理的样品与本专利技术第一方面的抗体组合物混合加入流式管，混匀后孵育15分钟；(3)向步骤(2)孵育的流式管中加入红细胞裂解液，混匀后孵育10分钟，500×g离心5分钟，去上清并重悬；和(4)流式细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗体(优选是单克隆抗体)组合物，其包括抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA‑DR抗体和抗CD45抗体，优选其由抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA‑DR抗体和抗CD45抗体组成。

【技术特征摘要】
1.抗体(优选是单克隆抗体)组合物，其包括抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA-DR抗体和抗CD45抗体，优选其由抗CD71抗体、抗CD7抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体、抗CD19抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体、抗CD10抗体、抗HLA-DR抗体和抗CD45抗体组成。2.权利要求1所述的抗体组合物，其中每种抗体被标记不同的荧光标记，优选荧光标记选自FITC、AlexaFluor488、PE、ECD、PerCP、PerCP-cy5.5、PerCP-cy7、APC、AlexaFluor647、AlexaFluor680or700、APC-AlexaFluor700、APC-AlexaFluor750、APC-cy7、APC-H7、PacificBlue、HorizonV450、AmCyan、PacificOrange、KromeOrange、BrilliantViolet421(BV421)、BrilliantViolet510(BV510)、BrilliantViolet570(BV570)、BrilliantViolet605(BV605)、BrilliantViolet650(BV650)、BrilliantViolet711(BV711)和BrilliantViolet785(BV785)。3.用于白血病和淋巴瘤分型的试剂盒，其包括第一容器，其中，第一容器包括权利要求1或2所述的抗体组合物。4.权利要求3所述的试剂盒，其还包括第二容器，其中，第二容器包括红细胞裂解液(如，10×红细胞裂解液)。5.权利要求1或2所述的抗体组合物在制备白血病和淋巴瘤分型的试剂盒中的应用。6.权利要求5所述的应用，其中，试剂盒是权利要求3或4所述的试剂盒。7.权利要求5所述的应用，其中，白血病和淋巴瘤包括MDS转化的急性髓细胞白血病、急性髓细胞白血病M3、骨髓增生异常综合征(MDS)、正常骨髓伴反应性B细胞增生、急性髓细胞白血病M5型、边缘区淋巴瘤(MZL)和Castleman10病。8.权利要求5所述的应用，其中白血病和淋巴瘤分型的方法包括：(1)处理骨髓或外周血样品，使呈单个细胞悬液状态；(2)将步骤(1)处理的样品与权利要求1或2所述的抗体组合物混合加入流式管，混匀后孵育15...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪万茂，
申请(专利权)人：浙江博真生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33