应用浊点萃取‑液相色谱串联质谱法检测乳或乳制品中喹诺酮类药物的方法技术

本发明专利技术公开了一种应用浊点萃取‑液相色谱串联质谱法检测乳或乳制品中喹诺酮类药物的方法。所述方法包括如下步骤：(1)将所述乳或乳制品进行破乳，经离心后取上清液A；(2)将所述上清液A进行浊点萃取，所得富集相经离心后取上清液B；(3)采用液相色谱‑串联质谱法检测所述上清液B，即实现对所述乳或乳制品中喹诺酮类药物的检测。本发明专利技术采用浊点萃取方法，通过喹诺酮类药物的添加回收率实验，建立了目标化合物的浊点萃取‑LC‑MS/MS测定方法。该技术不仅大大简化了样品的前处理的步骤，节约了分析时间，而且由于有机溶剂用量少，减少了对环境的污染，是一种环境友好的样品前处理技术，并避免了样品转溶、乳化带来的损失。

The application of cloud point extraction liquid chromatography mass spectrometry method of quinolones in milk or milk products in series

The invention discloses an application of cloud point extraction liquid chromatography mass spectrometry method of quinolones in milk or milk products in series. The method comprises the following steps: (1) the milk or dairy products after demulsification, was centrifuged and the supernatant was A; (2) the supernatant A cloud point extraction, the enrichment phase after centrifugation the supernatant was B; (3) by liquid chromatography tandem mass spectrometry said the supernatant B, realize the detection of quinolones in milk or dairy products. The invention adopts the cloud point extraction method, the quinolones recovery rate experiment, to establish a method for the determination of target compounds LC MS/MS cloud point extraction. This technology not only simplifies the pre-processing step of the sample, saves time, and because of low solvent consumption, reduce the pollution of the environment, is a kind of environmental friendly sample pretreatment technology, and avoid the sample dissolved and emulsified losses.

【技术实现步骤摘要】
应用浊点萃取-液相色谱串联质谱法检测乳或乳制品中喹诺酮类药物的方法
本专利技术涉及一种应用浊点萃取-液相色谱串联质谱法检测乳或乳制品中喹诺酮类药物的方法，属于食品检测方法

技术介绍
兽药是指以治疗、预防或者诊断为目的，或者为改变神经功能或行为而用于食品动物的化学物质。兽药的广泛使用在保障畜牧业稳步发展、增加畜牧产品供应量、减少因动物疾病而带来的经济损失以及控制人畜共患疾病在动物和人类之间传播等方面发挥巨大作用。随着畜牧业生产向现代化、集约化和规模化的发展，兽药的使用量必然不断增加，但是肉、蛋、乳中却不可避免地出现各种药物的残留现象。在食品动物在应用农兽药后，农兽药的原形及其代谢产物、与农兽药有关的杂质等有可能蓄积或者残存在动物的细胞、组织或者器官内，或者计入泌乳动物的乳、或者产蛋家禽的蛋中，即残留，又称残毒。然而许多使用者却根本不知晓动物性食品中农兽药残留问题，更不清楚如何控制残留，仍然不正确的应用农兽药，如用药剂量、给药途径、用药部位和用药动物的种类等不符合用药指示，在休药期结束前屠宰动物及屠宰前逃避宰前检查等，这些错误用药方式极易引起农兽药的残留超标。由此在生产实践中违章残留事件屡见不鲜，如1987年，美国加利福尼亚查处了1166例药物残留超量事件。同年，美国农业部检查了117628只肉用犊牛，发现其中有2036只中药物残留超标。近年来，由于农兽药的大量使用引起的食品安全问题已被人们广泛的认识、关注和重视。为防止动物性食品中可能出现的药物残留损害人体健康，1984年在食品立法委员会(CAC)的倡导下由联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)联合发起组织了食品中农兽药残留立法委员会。CCRVDF的主要宗旨是：控制食品中的农兽药残留，筛选并建立适用于全球的农兽药及其他化学物残留的分析方法和取样方法，对农兽药进行毒理学评价，制定动物组织及产品中的兽药最高残留限量法规及休药期法规等。目前，一些主要的农产品进口国和组织均建立有庞杂的农产品进口管理技术性法律和法规体系。联合国粮农组织和世界卫生组织食品法典委员会(FAO/WHO/CAC)，制定了300多种食品中170种农、兽药最高残留限量。从2006年5月29日起，日本实施了“食品中农业化学品肯定列表制度”，只有符合“肯定列表制度”要求的食品才能进入日本市场。该制度对目前所有农业化学品在食品中的残留都作出了具体规定。其中，对797种农药、兽药及饲料添加剂制定了53862个残留限量标准，对没有设定限量标准的农业化学品，将执行0.01mg/kg的“一律标准”，只有65种天然和化学合成物质作为豁免物质不设限量。同样，加拿大、德国和东盟其它许多国家和区域性国际组织，也结合本国或本地区的实际情况制定了各种食品中农兽药最高残留限量。与此同时，美国、欧盟、日本等发达国家通过调整、修改政策法规和利用先进科学技术设置技术性贸易壁垒，使得农兽药残留问题不仅是影响人的身体健康，而且也严重影响到国家的对外贸易。牛奶的营养价值非常高，不但可以满足老年人和儿童的营养需求并且能够增强人们的体质。现在我国奶牛业的快速的发展，居民消费水平的不断的提高，人们对牛奶的消费量也随之大幅提高，与此同时人们对牛奶的安全性也提出了更高的要求。喹诺酮(Quinolones，QNs)是一类人工合成的含4-喹诺酮基本结构，对细菌DNA螺旋酶具有选择性抑制的抗菌剂。经过数十年的发展，新一代的喹诺酮类药物具有抗菌谱广、活性高、无交叉耐药性、耐药突变机率低、口服吸收好、半衰期长、价格便宜、不良反应少等优点，目前应用非常广泛。喹诺酮类药物除了被用于畜牧养殖业外，很多地方出现了滥用该类药物的情况，比如餐饮行业中的火锅和麻辣烫，在其中添加喹诺酮类药物已成为行业潜规则，由于此类食品主要以生鲜食材为主，极易造成微生物感染导致腹泻等中毒情况，大部分商家在火锅里添加喹诺酮类药物作为止泻药，使得该类药物在此类食品中残留的现象普遍存在，己经引起社会的广泛关注。目前，测定乳与乳制品中β-受体激动剂类药物的方法主要有GC、GC-MS、HPLC和LC-MS/MS法。由于大量使用有机溶剂，给环境造成污染，限制了其广泛应用。因此，需要提供一种操作简单、分析时间短、准确高效且前处理过程不使用有机溶剂的检测乳或乳制品中喹诺酮类药物的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种应用浊点萃取-液相色谱串联质谱法检测乳或乳制品中喹诺酮类药物的方法，本专利技术利用浊点萃取技术的原理，结合LC-MS/MS对乳或乳制品(牛奶)中喹诺酮类药物进行提取、富集和分析，建立了浊点萃取(CPE)-LC/MS/MS法分析检测牛奶中喹诺酮类药物的理想方法。本专利技术所提供的检测乳或乳制品中喹诺酮类药物的方法，包括如下步骤：(1)将所述乳或乳制品进行破乳，经离心后取上清液A；(2)将所述上清液A进行浊点萃取，所得富集相经离心后取上清液B；(3)采用液相色谱-串联质谱法检测所述上清液B，即实现对所述乳或乳制品中喹诺酮类药物的检测。上述的方法中，所述喹诺酮类药物可为诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸和氟甲喹中至少一种。上述的方法中，所述乳制品指的是以牛羊奶等为主要原料，经加工制成的各种食品，如牛奶等。上述的方法中，步骤(1)中，所述破乳的步骤如下：向所述乳或乳制品中依次加入无水硫酸钠和冰乙酸；所述无水硫酸钠的用量为：10ml所述乳或乳制品：0.8～1.0g所述无水硫酸钠；所述冰乙酸的用量为：10ml所述乳或乳制品：0.1～0.2ml所述冰乙酸。上述的方法中，步骤(1)中，所述离心的条件如下：温度为5～10℃；转速为8000～10000rpm；时间为5～10min。上述的方法中，步骤(2)中，所述浊点萃取的条件如下：表面活性剂为Tween20，其水溶液的质量体积浓度为50～100g/L；平衡温度为30～60℃；平衡时间为20～30min。上述的方法中，步骤(2)中，所述浊点萃取步骤中还加入添加剂；所述添加剂为正丁醇和浓氨水，所述正丁醇的用量为：9ml所述上清液A：0.1～0.2ml所述正丁醇，所述浓氨水的用量为：9ml所述上清液A：50～80μL所述浓氨水。上述的方法中，步骤(3)中，所述液相色谱-串联质谱法的色谱条件如下：流动相：A相为乙酸铵-甲酸水溶液，其中，乙酸铵的摩尔浓度为5～10mmol/L，甲酸的体积浓度为0.1％，B相为乙腈；洗脱梯度：0～1.0min，95％A相；1.0～6.0min，95％～80％A相；6.0～10.0min，80％～60％A相；10.0～15.0min，60％～2％A相；15.0～17.5min，2％，均指的是体积百分含量。上述的方法中，步骤(3)中，所述液相色谱-串联质谱法的色谱条件如下：柱温为40℃；进样体积为5μL；流速为0.4mL/min。上述的方法中，步骤(3)中，所述液相色谱-串联质谱法的质谱条件如下：电喷雾正离子模式，多反应监测扫描模式。上述的方法中，步骤(3)中，所述液相色谱-串联质谱法的质谱条件如下：离子源温度为120℃；毛细管电压为3.5kV；脱溶剂温度为350℃；脱溶剂气流速为16L/min；碰撞气为氩气；雾化气压力为35psi。本专利技术提供的乳或乳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测乳或乳制品中喹诺酮类药物的方法，包括如下步骤：(1)将所述乳或乳制品进行破乳，经离心后取上清液A；(2)将所述上清液A进行浊点萃取，所得富集相经离心后取上清液B；(3)采用液相色谱‑串联质谱法检测所述上清液B，即实现对所述乳或乳制品中喹诺酮类药物的检测。

【技术特征摘要】
1.一种检测乳或乳制品中喹诺酮类药物的方法，包括如下步骤：(1)将所述乳或乳制品进行破乳，经离心后取上清液A；(2)将所述上清液A进行浊点萃取，所得富集相经离心后取上清液B；(3)采用液相色谱-串联质谱法检测所述上清液B，即实现对所述乳或乳制品中喹诺酮类药物的检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述喹诺酮类药物为诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸和氟甲喹中至少一种。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述破乳的步骤如下：向所述乳或乳制品中依次加入无水硫酸钠和冰乙酸；所述无水硫酸钠的用量为：10ml所述乳或乳制品：0.8～1.0g所述无水硫酸钠；所述冰乙酸的用量为：10ml所述乳或乳制品：0.1～0.2ml所述冰乙酸。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述离心的条件如下：温度为5～10℃；转速为8000～10000rpm；时间为5～10min。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述浊点萃取的条件如下：表面活性剂为Tween20，其水溶液的质量体积浓度为50～100g/L；平衡温度为30～60℃；平衡时间为20～30min。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述浊...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹鹏，李晓玉，卢志晓，尹大路，梁君妮，鲁闽，贺丽娜，胡巧茹，
申请(专利权)人：烟台出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：山东,37