本发明专利技术涉及一种人血高密度脂蛋白及其产品，以及其制造方法和应用。所述的人血高密度脂蛋白中，ａｐｏＡＩ含量为７７－８８％。本发明专利技术以低温乙醇法生产人血浆白蛋白和丙种球蛋白以后废弃的ＦＩＶ－１沉淀为原料，通过分离纯化步骤，从ＦＩＶ－１中提取ＨＤＬ，提供了大规模制备人血浆ＨＤＬ的低温乙醇新工艺方法，并且制成可供静脉输注的人血ＨＤＬ制剂，是对宝贵人血资源的充分利用。本发明专利技术涉及的人血高密度脂蛋白及其产品在制备治疗多器官功能障碍综合症（ＭＯＤＳ）、心血管系统疾病，如动脉粥样硬化（ＡＳ）以及中和细菌毒素等急性症状药物方面有着很好的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种人血高密度脂蛋白产品、其制造方法及其在药剂学上的应用，属于生物化学领域。
技术介绍
AS是因动脉壁脂质沉积，纤维及结缔组织增生，而造成动脉管壁增厚变硬，弹性减退并形成糜粥样病灶的常见多发性疾病。AS引起的动脉管腔闭塞，可使心、脑、肾等重要器官供血不足，从而严重威胁人类健康和生命。目前临床上常用的治疗AS药物，一般有扩张血管药物、降血脂药物、抗血小板药物及溶栓药物等。这些药物虽然可通过解除血管运动障碍及调节血脂等作用对抗AS，但均不能安全、有效的预防和消除AS斑块。并且由于AS是一种慢性非炎症性、退行性和增生性的病变，长期使用某些药物治疗，会引起胆石症、肝功能损伤等副作用。大量流行病学研究表明，血脂升高、肥胖、高血压、糖尿病以及吸烟等是AS主要危险因素。但是，目前对AS的防治并无理想的方法和药物。现阶段防治AS除饮食控制外，在药物治疗上一般多选用降低血脂、扩张血管或针对易患因子的药物。因此发现和制备能够预防，特别是可以促使AS逆转或发生消退的新药就十分必要。七十年代以来大量流行病学调查已经发现，血浆高密度脂蛋白(HDL)水平与动脉粥样硬化(AS)发病率呈负相关。Framingham调查表明，血浆高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C，可以代表血浆HDL含量的指标)高的家庭或地区冠心病(CHD)发生率明显降低。Rifkind等在调查的人群中发现，血浆HDL-C含量每增加1mg/dL，CHD的危险性就减少2-3％。Helsinki Heart Study(赫尔辛基心脏研究)也证实，如用药物升高血浆HDL-C水平，男性CHD发生率可以下降34％。动物实验还证明，血浆HDL水平较低的动物如家免、猴、猪等均易诱发AS，相反血浆HDL含量较高的动物如貂、北京鸭和树鼩等则不易甚至不产生AS。另外，细胞培养证明，HDL可促进细胞(包括动脉平滑肌细胞)内胆固醇的移出，动物实验也证明HDL有抑制AS斑块形成及促进斑块消退的作用。这些都说明HDL具有对抗AS的作用。而且由于HDL是来源于人血浆的天然药物，在预防和治疗AS的长期过程中具有其它人工合成药物无法比拟的优势。HDL主要由载脂蛋白和脂质组成，是血浆中密度最高但组成极不均一的一类脂蛋白。HDL是由蛋白质和脂质组成的脂蛋白，它含蛋白质50％～55％，主要由载脂蛋白(apo)AI和AII构成，另含少量的apoAIV、CI、CII、CIII、D、E以及J，HDL含脂质约45％～50％，主要由磷脂(PL，40～60％)、胆固醇及胆固醇酯(总胆固醇TC，30％～40％)及少量甘油三酯(TG，10％左右)构成。在HDL中apoAI的含量最多而且又是HDL主要的功能蛋白质，因此可以用apoAI的含量反映HDL的含量。目前国内外大多数血液制品均采用Cohn氏低温乙醇法生产人血白蛋白和丙种球蛋白，该法在分离过程中可将血浆蛋白分成I、II、III、IV、V等五个组分，其中富含HDL的组分IV-1(FIV-1)目前均用作废物处理，未予利用，实际上是一种巨大的浪费。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种人血高密度脂蛋白及其产品。本专利技术的另一目的是提供人血高密度脂蛋白及其产品的制造方法。本专利技术的再一目的是提供上述人血高密度脂蛋白及其产品在制备治疗多器官功能障碍综合症(MODS)、心血管系统疾病，如AS以及中和细菌毒素等急性症状药物方面的应用。本专利技术所述的人血高密度脂蛋白中，apo AI含量为77-88％。上述的人血高密度脂蛋白中apoAI分子量为27.7KD。本专利技术所述的人血高密度脂蛋白产品中可含有0.1-99％的人血高密度脂蛋白。上述的人血高密度脂蛋白产品可以加入9～11％蔗糖和/或0.5％白蛋白和/或150mg±1mg/L维生素C，制成供静脉输注的人血HDL制剂，该制剂有着良好的稳定性。上述的HDL不限于本专利技术所述的HDL，现有技术中的HDL同样适用前述的组合互配。本专利技术所述方法包括以下步骤A.取原料血浆，加入1/5～1/4体积的50％乙醇，调节pH值为6.8-7.4，在-4～-2℃下搅拌1-3小时，静置6-8小时，离心，得上清；向上清滴加缓冲溶液至混合液pH为6.5-7.0，加入1/5～1/4混合液体积的95％乙醇，在-6～-4℃下搅拌1-3小时，静置6-8小时，离心，得上清；向上清液中补加45-50％体积的注射用水，滴加缓冲溶液使pH为4.5-5.5，在-6～-3℃下搅拌1-3小时，静置1-3小时，离心，弃上清，得沉淀；B.沉淀用2-3倍重量的0.02～0.1M NaCl溶液溶解，调pH至5.2±0.5后，在0～2℃下搅拌2-6小时，然后离心得沉淀；沉淀用50-150倍重量的0.1～0.2M NaCl溶液溶解，调节溶液pH为7.2±0.5，在2-8℃下搅拌6-20小时，过滤得滤液；C.上述滤液加入缓冲液，使pH为5.2±0.5，搅拌1-3小时，在2～4℃下，静置6-20小时，离心收集沉淀；沉淀用50～150倍量的0.1～0.2M NaCl溶液溶解，调pH至7.2±0.5，搅拌使沉淀完全溶解，过滤，得滤液；D.滤液用超滤膜超滤，脱盐并浓缩，得富含HDL的溶液，经后处理，得HDL及其产品。上述方法中调节pH使用1mol/L NaHCO3溶液。上述方法中的缓冲液为pH＝4的HAC/NaAC缓冲体系。步骤C结束后可根据需要重复一遍，以使达到更好的纯度。步骤D中的超滤膜为8-70KD超滤膜。优选使用30～50KD超滤膜，其具有进一步纯化的作用。步骤D所述的后处理可以是超滤浓缩液加9～11％注射用蔗糖或0.5％白蛋白，按每升加入150mg±1mg注射用维生素C，调pH至7.2±0.5，得HDL溶液；上述HDL溶液于微机自控的巴氏灭菌器内60±1℃、10小时灭活病毒；灭活病毒后的HDL溶液，除菌分装，并于2～8℃保存。采用本专利技术方法制备HDL，apoAI的回收率可达69％以上，具有显著的经济效益。本专利技术方法以低温乙醇法制备人血白蛋白及丙种球蛋白弃去的FIV-1沉淀为原料，在pH5.1±0.5、0～2℃以及0.03MNaCl的条件下，通过洗涤充分除去HDL以外的其它血浆蛋白。HDL粗品溶解后再于pH5.1±0.5(等电点)、2～4℃、0.15M NaCl的条件下重沉淀精制。最后纯化的HDL溶液经超滤、透析、浓缩、配制、60±1℃，10小时灭活病毒及除菌制成pH 6.4～7.4、载脂蛋白AI含量≥0.5％、纯度≥95％，含10％±1％蔗糖的人血HDL制品。在HDL制备过程中，在分离各步骤调节适当酒精浓度在6～30％、蛋白浓度在1～6％、pH值在4.5～7.5、离子强度在0.02～2.0kΩ·cm、温度在-6～10℃。HDL是由蛋白质和脂质组成的脂蛋白，它含蛋白质50％～55％，主要由载脂蛋白(apo)AI(65％～70％)和AII(20％～25％)构成，另含少量的apoAIV、CI、CII、CIII、D、E以及J。HDL含脂质约45％～50％，主要由磷脂(PL，40～60％)、胆固醇及胆固醇酯(总胆固醇TC，30％～40％)及少量甘油三酯(TG，10％左右)构成。在HDL中apoAI的含量最多而且又是HDL主要的功能蛋白质。因此可以用apoAI的含量反映HDL的含量。专利技术人采用华西本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人血高密度脂蛋白，其特征在于，该高密度脂蛋白中ａｐｏＡＩ的含量为７７－８８％和／或人血高密度脂蛋白中ａｐｏＡＩ分子量为２７．７ＫＤ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：江永忠，陈爱民，周潮，樊绍文，
申请(专利权)人：江永忠，陈爱民，周潮，樊绍文，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]
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