具有成骨分化促进能力及牙周韧带成纤维细胞活性促进能力的肽及其用途制造技术

本发明专利技术的由序列表中序列1或序列表中序列2形成的肽呈现造骨细胞的增殖、分化促进及牙周韧带成纤维细胞的增殖和活性促进功效。本发明专利技术的肽通过使如smad1/5/8磷酸化等骨形态发生蛋白(BMP)信号转导增加，来使造骨细胞的生长及如COL1A1、骨唾液酸蛋白、碱性磷酸酶等分化标记的表达增加，从而最终呈现造骨活性。本发明专利技术的肽通过磷脂酰肌醇3‑激酶及蛋白激酶B磷酸化，来促进牙周韧带成纤维细胞的生长，并且增加如COL1A1及牙本质涎磷蛋白等活性标记的表达，从而最终呈现牙周组织再生活性。本发明专利技术提供包含上述的肽的骨疾病的预防或治疗用组合物及牙周疾病的预防或治疗用组合物。

Peptides having osteogenic differentiation promoting ability and periodontal ligament fibroblast activity promoting ability and use thereof

The peptide formed by the sequence 1 in the order list or the sequence 2 in the sequence list shows the proliferation, differentiation promotion and proliferation and activity of the periodontal ligament fibroblast and the promoting effect of the osteoblast. The peptides of this invention by making such as phosphorylation of smad1/5/8 and bone morphogenetic protein (BMP) signal transduction, to increase the growth of osteoblasts and the expression of COL1A1, bone sialoprotein, alkaline phosphatase and other differentiation markers, and finally presents the osteoblast activity. The peptides of this invention by phosphatidylinositol 3 kinase and protein kinase B phosphorylation to promote periodontal ligament fibroblast cell growth, and increase the expression of COL1A1 and dentin sialophosphoprotein activity markers, thus showing periodontal tissue regeneration activity. The present invention provides a composition for the prevention or treatment of bone diseases comprising the aforementioned peptides and a composition for the prevention or treatment of periodontal diseases.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有成骨分化促进能力及牙周韧带成纤维细胞活性促进能力的肽及其用途
本申请对2014年7月28日提出于韩国专利局的韩国专利申请第10-2014-0095893号主张优先权，上述申请的公开内容作为参照插入于本说明书。本专利技术涉及具有成骨分化促进能力及牙周韧带成纤维细胞活性促进能力的肽及其用途。
技术介绍
骨头作为我们身体中石灰化的代表性的组织，通过再形成过程，来起到支撑我们的身体的作用。在骨头中产生的疾病的原因大致分为3种，第一、在生长发育过程中产生大小的异常的情况；第二、在骨头的重构过程中，在破坏基于造骨细胞的骨头的形成和基于破骨细胞的吸收的平衡的情况；第三、在骨头的石灰化或矿物化(mineralization)中产生异常的情况。转化生长因子-β(TGF-β，Transforminggrowthfactor-beta)超级家族由如转化生长因子-β、节部(Nodal)、活化素(Activin)、骨形成蛋白(BMPs，bonemorphogeneticproteins)等40个以上的种类构成。转化生长因子-β信号转导由特定的类型I和类型II丝氨酸/苏氨酸激酶受体形成复合体，来通过异型复合体(heteromericcomplex)的形态横穿原生质膜，从而第一次传递信号。众所周知，转化生长因子-β/骨形成蛋白在身体中参与多种功能和哺乳类发育过程的骨质形成。若转化生长因子-β/骨形态发生蛋白信号转导受到妨碍，则如肿瘤转移、短指症、关节炎等由与多发性与骨相关的疾病受到影响。人体的骨头每天被分解一点儿，并且以新的骨头填满与被分解的量相应的量，从而是保持平衡性的非常动态的器官。若用于分解骨头的破骨细胞和用于再生骨头的造骨细胞中的一种细胞的活性增加或减少，则可产生由平衡性破坏导致的多种疾病。若用于吸收骨头的破骨细胞的活性增加，则促进骨头的分解，并发生如骨头变薄且易破碎的骨质疏松症等疾病，若造骨细胞的活性增加，则由骨密度的增加发生骨头的畸形或骨钙化症。因此破骨细胞和造骨细胞的均衡重要。作为目前为止众所周知的药品，最近，作为生物仿制药医药品专门化企业的“韩国央行”从食品医药品安全厅针对于骨形成蛋白质“”“Rafugen”得到临床试验授权来进入的临床试验。除此之外，在大雄制药中上市将骨形态发生蛋白2“BMP2”和人工骨头接枝的作为新概念生物融合医疗器械的NOVOSIS，据报告预计上述NOVOSIS在包括种植牙的与骨移植相关的治疗中多样地利用，与自体移植相比骨头更容易结合，并且减少手术时间和出血，从而可期待快的恢复。除此之外同和药品公司的被称为“DW1350”的药品作为不仅抑制破骨细胞而且造骨细胞的促进能力优秀的药品上市，但是到目前为止一直进行临床试验，并处于在韩国内未上市的状况。本说明书全文中，参照多篇论文及专利文献，并标示了其引用。所引用的论文及专利文献的公开内容，作为参照全部插入到本说明书中，从而更加明确地说明本专利技术所属
的水平及本专利技术的内容。
技术实现思路
要解决的问题本专利技术人努力开发在生物学上具有有效的活性的优秀的肽，其结果，查明由序列1或序列号2的氨基酸序列形成的肽具有促进造骨细胞的生长及分化，促进牙周韧带成纤维细胞的活性等优秀的生理活性，从而完成了本专利技术。因此，本专利技术的目的在于，提供具有成骨分化促进活性及牙周韧带成纤维细胞活性促进能力的肽。本专利技术的再一目的在于，提供骨疾病的预防或治疗用组合物。本专利技术的另一目的在于，提供牙周疾病的预防或治疗用组合物。解决问题的方案根据本专利技术的一实施方式，提供由选自由序列表中序列1及序列表中序列2的氨基酸序列组成的组中的一种氨基酸序列形成的具有造成骨分化促进活性的肽。根据本专利技术的的再一实施方式，本专利技术提供由选自由序列表中序列1及序列表中序列2的氨基酸序列组成的组中的一种氨基酸序列形成的具有牙周韧带成纤维细胞分化促进活性的肽。本专利技术人努力开发在生物学上具有有效的活性的优秀的肽，其结果，查明了具有序列表中序列1或序列表中序列号2的氨基酸序列的肽具有促进造骨细胞的生长及分化，促进牙周韧带成纤维细胞的活性等优秀的生理活性。本专利技术的肽包含序列表中序列1或序列表中序列2的氨基酸序列。具体地，本专利技术的肽需要由序列表中序列1或序列表中序列2的氨基酸序列构成。根据本专利技术的一实例，本专利技术的肽促进造骨细胞的增殖，并且诱导Smad1、Smad5及Smad8的磷酸化，来对骨形态发生蛋白信号进行活性化，通过使作为骨质形成标记众所周知的碱性磷酸酶(ALP，Alkalinephosphatase)、COL1A1(I型胶原α1)及骨唾液酸蛋白(BSP，Bonesialoprotein)的表达增加，来最终促进成骨分化。根据本专利技术的再一实例，本专利技术的肽通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)及蛋白激酶B(Akt)磷酸化，来促进牙周韧带成纤维细胞的生长，并且通过使磷脂酰肌醇3-激酶及蛋白激酶B的磷酸化增加，如COL1A1(I型胶原α1)及牙本质涎磷蛋白(DSPP，Dentinsialophosphoprotein)等活性标记的表达增加来促进牙周韧带成纤维细胞的活性，最终呈现牙周组织再生活性。在本说明书中，术语“肽”是指通过肽键来由多个氨基酸残基互相结合而成的线性分子。本专利技术的肽可通过本领域中公知的化学合成方法，尤其，固相合成技术(solid-phasesynthesistechniques：Merrifield,J.Amer.Chem.Soc.85：2149-54(1963)；Stewart,etal.,So]idPhasePeptideSynthesis,2nd.ed.,PierceChem.Co.：Rockford,111(1984))或液相合成技术(美国授权专利第5516891号)来制备而成。根据本专利技术的一实例，上述肽的N-或C-末端可与选自由乙酰基、芴甲氧羰基、甲酰基、棕榈基、肉豆蔻基、十八烷基及聚乙二醇(PEG)组成的组中的保护基。上述的氨基酸的变形起到大大地改善本专利技术的肽的稳定性的作用。在本说明书中所提及的术语“稳定性”是不仅指“体内”稳定性，而且还指储存稳定性(例如，常温储存稳定性)。上述保护基起到从生物体内的蛋白质切割酶的攻击保护本专利技术的肽的作用。根据本专利技术的再一实施方式，本专利技术提供骨疾病的预防或治疗用组合物，上述骨疾病的预防或治疗用组合物包含选自由上述的序列表中序列1及序列表中序列2的氨基酸序列组成的组中的一种氨基酸序列形成的肽作为有效成分。由于本专利技术的组合物包含由本专利技术的上述的序列表中序列1或序列表中序列2的氨基酸序列组成的肽作为有效成分，因此为了避免本说明书过于复杂，省略共同的记载内容。如在以下实施例中得到证明，由本专利技术的序列表中序列1或序列表中序列2的氨基酸序列形成的肽促进造骨细胞的增殖及分化，因此在骨疾病的预防或治疗中非常有效。本专利技术的骨疾病的预防或治疗用组合物可适用于在因造骨功能不顺畅导致降低骨密度或因关节的炎症等导致破骨作用过渡的情况下发生的全部疾病，例如适用于骨质疏松症、青少年骨质疏松症、成骨不全症、骨软化症、骨坏死症、佝偻病、骨髓炎、牙槽骨质流失、佩吉特氏病(Paget’sdisease)、高钙血症、原发性甲状旁腺功能亢进症、转移性(metastatic)骨疾病、骨髓瘤、风湿性关节炎本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有成骨分化促进活性的肽，其特征在于，由选自由序列表中序列1及序列表中序列2的氨基酸序列组成的组中的一种氨基酸序列形成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.28 KR 10-2014-00958931.一种具有成骨分化促进活性的肽，其特征在于，由选自由序列表中序列1及序列表中序列2的氨基酸序列组成的组中的一种氨基酸序列形成。2.根据权利要求1所述的具有成骨分化促进活性的肽，其特征在于，上述肽促进造骨细胞的增殖。3.根据权利要求1所述的具有成骨分化促进活性的肽，其特征在于，上述肽使Smad1、Smad5及Smad8的磷酸化增加。4.根据权利要求1所述的具有成骨分化促进活性的肽，其特征在于，上述肽使碱性磷酸酶、I型胶原α1及骨唾液酸蛋白的表达增加。5.一种具有牙周韧带成纤维细胞活性促进能力的肽，其特征在于，由选自由序列表中序列1及序列表中序列2的氨基酸序列组成的组中的一种氨基酸序列形成。6.根据权利要求5所述的具有牙周韧带成纤维细胞活性促进能力的肽，其特征在于，上述肽促进牙周韧带成...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑镕池，金银美，李应智，A·R·韩，郑炫阿，
申请(专利权)人：凯尔格恩有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国,KR