一种HPV分型检测的核酸组合及其应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种HPV分型检测的核酸组合及其应用和试剂盒，属于基因检测技术领域。本发明专利技术提供的HPV分型检测的核酸组合用于检测HPV 16亚型的第一核酸组合和用于检测HPV 18亚型的第二核酸组合。第一核酸组合包括SEQ ID NO.1‑2所示的第一引物对和SEQ ID NO.3所示的第一捕获探针。第二核酸组合包括SEQ ID NO.4‑5所示的第二引物对和SEQ ID NO.6所示的第二捕获探针。该核酸组合以PCR和EFIRM技术为基础，能够高灵敏地、高特异性地检测出样本中的HPV亚型类别，其具有检测耗时短、检测成本低等特点，可适用于大量的临床检测和大规模的流行病学筛查。

【技术实现步骤摘要】
一种HPV分型检测的核酸组合及其应用和试剂盒
本专利技术涉及基因检测
，具体而言，涉及一种HPV分型检测的核酸组合及其应用和试剂盒。
技术介绍
宫颈癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一，已有研究表明，高危型人乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus，HPV)持续感染及多重感染是导致宫颈癌变的重要原因之一，全球范围的研究结果显示，在99.7％的宫颈癌患者体内检测到高危型HPVDNA的存在。已经发现的HPV有200多种型别，主要包括低危型和高危型两大类。其中，HPV16、HPV18两种亚型是临床最常见的该两类型病毒在宫颈癌患者出现的概率最大。不同型别与不同疾病的相关性也不一样，低危型HPV感染可能会引起生殖道湿疣病变，高危型HPV感染则与宫颈癌、阴道癌相关。目前，还缺乏针对HPV公认的有效治疗手段，因此宫颈HPV早发现、早预防是阻断癌变的关键，但是，现有的针对HPV分型检测的相关技术(包括传统的PCR检测技术、荧光定量检测技术、TCT技术、HC2检测技术等)存在操作方法繁琐，灵敏度或特异性低等缺点。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种HPV分型检测的核酸组合，该核酸组合能够常见的HPV16和HPV18两种亚型病毒进行检测，具有灵敏度高、特异性好、操作便捷、耗时短等特点。本专利技术的第二目的在于提供上述的HPV分型检测的核酸组合在制备用于HPV分型检测的试剂盒中的应用。本专利技术的第三目的在于提供一种试剂盒，该试剂盒含有上述的HPV分型检测的核酸组合，其能够对常见的HPV16和HPV18两种亚型病毒进行检测，具有灵敏度高、特异性好、操作便捷、耗时短等特点。本专利技术的第四目的在于提供上述的HPV分型检测的核酸组合在HPV分型检测中的应用。本专利技术是这样实现的：一种HPV分型检测的核酸组合，其包括用于检测HPV16亚型的第一核酸组合和/或用于检测HPV18亚型的第二核酸组合；第一核酸组合包括SEQIDNO.1-2所示的第一引物对和SEQIDNO.3所示的第一捕获探针，第一引物对的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于结合第一催化酶的第一亲和物；第二核酸组合包括SEQIDNO.4-5所示的第二引物对和SEQIDNO.6所示的第二捕获探针，第二引物对的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于结合第二催化酶的第二亲和物。上述的的HPV分型检测的核酸组合在制备用于HPV分型检测的试剂盒中的应用。一种试剂盒，其包括上述的HPV分型检测的核酸组合。上述的HPV分型检测的核酸组合在HPV分型检测中的应用。与现有技术相比，本专利技术提供的HPV分型检测的核酸组合及其应用和试剂盒的有益效果是：本专利技术的提供的HPV分型检测的核酸组合包括用于检测HPV16亚型的第一核酸组合和/或用于检测HPV18亚型的第二核酸组合。第一核酸组合包括SEQIDNO.1-2所示的第一引物对，用于进行PCR反应，将样本中的微量的靶核酸片段在数量上呈指数增加，从而在短时间内获得大量的靶核酸片段，大大地增加了在后续EFIRM技术平台上的待测模板的数量，进而大大地提高了检测灵敏度。再将PCR扩增得到的PCR产物(含靶核酸片段)用到EFIRM技术平台上，通过第一捕获探针与靶核酸片段的杂交、进行特异性结合，实现检测HPV16亚型目的。用于检测HPV18亚型的第二引物对和第二捕获探针的检测原理和效果同第一引物对和第一捕获探针。由于杂交效率受错配碱基的影响明显，只有靶核酸片段与两条引物、捕获探针同时准确配对后才能有检测信号，即需要两次特异性识别结合(而现有的检测技术通常只有一次特异性识别)，这大大提高了检测的特异性。所以，本专利技术的提供的HPV分型检测的核酸组合通过特异性的引物和捕获探针的设计，结合PCR技术的扩增优势和EFIRM技术的特异性捕获特点，提高了检测的灵敏度和特异性，且具有操作便捷、耗时短等特点，其为检测HPV基因分析检测和制备相关检测试剂盒提供了一种新的思路和策略，还具有广阔的应用前景。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例5中的16亚型质粒的结构图；图2为本专利技术实施例5中的18亚型质粒的结构图；图3为本专利技术实施例5中的检测三份样本的结果图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的HPV分型检测的核酸组合及其应用和试剂盒，进行具体说明。一方面，本专利技术提供的HPV分型检测的核酸组合，其包括：用于检测HPV16亚型的第一核酸组合和用于检测HPV18亚型的第二核酸组合。其中，第一核酸组合包括SEQIDNO.1-2所示的第一引物对(SEQIDNO.1为上游引物，SEQIDNO.2为下游引物)和SEQIDNO.3所示的第一捕获探针。第一引物对的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于结合第一催化酶的第一亲和物。需要说明的是，第一引物对和第一捕获探针均根据HPV16亚型基因的保守区域E7区(不同亚型的HPV的E7区差异较大)进行设计，第一捕获探针的碱基序列选自于第一引物对所扩增的区域，确保了第一捕获探针能够与第一引物对的扩增产物进行互补配对结合。第一引物对和第一捕获探针配套使用。进一步地，另外，第二核酸组合包括SEQIDNO.4-5所示的第二引物对(SEQIDNO.4为上游引物，SEQIDNO.5为下游引物)和SEQIDNO.6所示的第二捕获探针。第二引物对的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于结合第二催化酶的第二亲和物。需要说明的是，第二引物对和第二捕获探针均根据HPV18亚型基因的保守区域E7区进行设计，第二捕获探针的碱基序列选自于第二引物对所扩增的区域，确保了第二捕获探针能够与第二引物对的扩增产物进行互补配对结合。第二引物对和第二捕获探针配套使用。还需要说明的是，在其他的实施例中，本专利技术提供的HPV分型检测的核酸组合可以仅包括第一核酸组合或第二核酸组合，可实现对HPV16或HPV18的分型检测。进一步地，第一亲和物为地高辛、异硫氰酸荧光素和生物素中的一种；第二亲和物为地高辛、异硫氰酸荧光素和生物素中的一种。需要说明的是，第一亲和物和第二亲和物的类别可以相同，也可以不同。生物素的作用在于与链霉亲和素标记的催化酶结合，地高辛可与地高辛抗体标记的催化酶结合，异硫氰酸荧光素可与异硫氰酸荧光素抗体标记的催化酶结合。在EFIRM技术平台上，再通过催化酶催化底物产生的电流释放检测信号，实现检测目的。优选地，第一引物对的下游引物的5’端和第二引物对的下游引物的5’端均标记生物素。本专利技术提供的HPV分型检测的核酸组合检测HPV基因型的原理如下。使用EFRIM与PCR技术相结合的方法检测样本中的HPV16、HPV18亚型病毒。根据HPV16或HPV18亚型基因(E7区)各设计一对特异性引物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种HPV分型检测的核酸组合，其特征在于，其包括用于检测HPV 16亚型的第一核酸组合和/或用于检测HPV 18亚型的第二核酸组合；所述第一核酸组合包括SEQ ID NO.1‑2所示的第一引物对和SEQ ID NO.3所示的第一捕获探针，所述第一引物对的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于结合第一催化酶的第一亲和物；所述第二核酸组合包括SEQ ID NO.4‑5所示的第二引物对和SEQ ID NO.6所示的第二捕获探针，所述第二引物对的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于结合第二催化酶的第二亲和物。

【技术特征摘要】
1.一种HPV分型检测的核酸组合，其特征在于，其包括用于检测HPV16亚型的第一核酸组合和/或用于检测HPV18亚型的第二核酸组合；所述第一核酸组合包括SEQIDNO.1-2所示的第一引物对和SEQIDNO.3所示的第一捕获探针，所述第一引物对的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于结合第一催化酶的第一亲和物；所述第二核酸组合包括SEQIDNO.4-5所示的第二引物对和SEQIDNO.6所示的第二捕获探针，所述第二引物对的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于结合第二催化酶的第二亲和物。2.根据权利要求1所述的HPV分型检测的核酸组合，其特征在于，所述第一亲和物为地高辛、异硫氰酸荧光素和生物素中的一种；所述第二亲和物为地高辛、异硫氰酸荧光素和生物素中的一种。3.权利要求1或2所述的HPV分型检测的核酸组合在制备用于HPV分型检测的试剂盒中的应用。4.一种试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1或2所述的HPV分型检测的核酸组合。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于将所述第一捕获探针或所述第二捕获探针固定至检测孔板的固定物，所述固定物包括导电聚合物和离子化合物；所述导电聚合...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖玮，莫亚勤，吕佳韩，林晓燕，张晨光，
申请(专利权)人：北京易活生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11