一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法技术

一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法，将魔芋蛋白冻干粉溶解于纯净水中，配成质量分数1‑3％的蛋白溶液；将蛋白溶液加热至35‑55℃，调节pH值为4.0‑9.0，加入复合蛋白酶混合均匀后，酶解，得到酶解液；将酶解液灭酶后，调节pH值至魔芋蛋白等电点；离心，收集上清液，将上清液经过冷冻干燥成冻干粉，得到魔芋蛋白源ACE抑制肽粗品，经过分离后，得到ACE抑制肽。本发明专利技术提供的方法操作简单，产物得率高，ACE抑制效果好。

【技术实现步骤摘要】
一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法
本专利技术属于ACE抑制肽制备领域，具体涉及一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法。
技术介绍
魔芋含有十分丰富的营养，富含葡甘露聚糖、淀粉、蛋白质、多种维生素和矿物质元素。其中，蛋白质经酶解可得到具有抗衰老、抗癌、降血压、免疫等功能的生物活性多肽，是生产功能性保健食品的良好原料。魔芋中的蛋白主要来源于魔芋飞粉，检测结果发现，魔芋飞粉中蛋白质含量高达23.8％，降解后可产生支链氨基酸寡肽、ACE抑制肽、高F值寡肽、甘露聚糖肽等多种生物活性肽。天然的ACE抑制肽最早是Ferriera在1965年从美洲茅头蝮蛇毒中发现的。随后众多关于ACE抑制肽的研究迅速的开展起来，并从多种不同的天然食物蛋白中发现了短链的ACE抑制肽。随后人们又从豆粕、玉米、菜籽粕、花椒籽粕、鲢鱼、猪血红蛋白等原料中发现了ACE抑制肽。ACE抑制肽是血管紧张素转换酶抑制剂，能抑制血管紧张素转换酶的活性。ACE抑制肽能有效的调节血压，同时还可增强机体对各种疾病的防御能力，维持自身的生理平衡。它具有分子量小，免消化、直接吸收、生物利用度高、对人体无过敏性的特点。所以有必要提供一种从魔芋中制备ACE抑制肽的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法，该方法操作简单，产物得率高，ACE抑制效果好。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法，将魔芋蛋白冻干粉溶解于纯净水中，配成质量分数1-3％的蛋白溶液；将蛋白溶液加热至35-55℃，调节pH值为4.0-9.0，加入复合蛋白酶混合均匀后，酶解，得到酶解液；将酶解液灭酶后，调节pH值至魔芋蛋白等电点；离心，收集上清液，将上清液经过冷冻干燥成冻干粉，得到魔芋蛋白源ACE抑制肽粗品，经过分离后，得到ACE抑制肽。本专利技术进一步的改进在于，每克蛋白溶液中加入复合蛋白酶的量为3000-6000U。本专利技术进一步的改进在于，灭酶的温度是90-100℃，时间是10-15min。本专利技术进一步的改进在于，离心是在5000-10000r/min的转速下进行10-30min。本专利技术进一步的改进在于，分离采用阴离子交换树脂717进行。本专利技术进一步的改进在于，冷冻干燥的温度为-50～-110℃，冷冻干燥的时间为10-24h。本专利技术进一步的改进在于，酶解的温度为35-55℃，时间为3-6h。与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果：本专利技术以魔芋蛋白冻干粉为原料，用复合蛋白酶进行酶解，其酶解条件为：底物浓度为2-10％，加酶量1000-5000U/g，酶解温度40-60℃，pH值为5-7，经灭酶、离心、分离得到ACE抑制肽，经紫外分光光度法检测，魔芋ACE抑制肽的抑制活性是15％-50％。本专利技术提供的方法操作简单，产物得率高，ACE抑制效果好，为充分合理的开发利用魔芋蛋白冻干粉这种优质资源提供一定参考。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明。本专利技术包括以下步骤：酶解工艺：将魔芋蛋白冻干粉溶解于纯净水中，配成蛋白溶液；蛋白液置于恒温磁力搅拌器上加热；调节pH，加入复合蛋白酶混合均匀，酶解反应条件为：pH值为4.0-9.0，底物质量分数为1-3％，加酶量为3000-6000U/g，酶解时间为3-6h，酶解温度为35-55℃；将酶解液置于90-100℃恒温水浴锅中灭酶10-15min，待酶解液温度降至室温，调节其pH至魔芋蛋白等电点；5000-10000r/min离心10-30min，收集上清液，取一定量上清液测其ACE抑制率；测定ACE抑制率：利用Cushman检测法进行检测:取75uL、HHL(马尿酰-组氨酰-亮氨酸)与25uL、ACE抑制剂(多肽液)充分混匀。在37℃水浴锅中温育5min，加入25uL、25mu/mLACE硼酸盐溶液，在37℃水浴锅中反应40min。结束后加入200uL、1.0moL/L盐酸溶液破坏反应环境，终止反应进程。然后于各试管中加入乙酸乙酯1.7mL，混合均匀；吸取1.2mL乙酸乙酯层于另一试管中，放入100℃烘箱中，挥发溶剂40min。拿出冷却后加入去离子水3mL，混匀后在波长228nm下测定其吸光度。表1ACE抑制率检测方法计算公式为：式中：A1—ACE抑制肽和ACE都存在溶液的吸光度值A2—不加ACE抑制肽存在溶液的吸光度值A3—ACE与HHL存在空白溶液的吸光度值紫外分光光度法检测活性：配制反应液与空白液，两者其他条件均相同，给反应液中加入魔芋ACE抑制肽。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标绘制马尿酸标准品曲线方程。测空白液及反应液中马尿酸含量，计算ACE抑制肽的抑制活性。实施例1将魔芋蛋白冻干粉溶解于纯净水中，配制成质量浓度为1％蛋白溶液；将蛋白液置于恒温磁力搅拌器上加热至35℃，调节pH值为4.0，然后加入复合蛋白酶混合均匀，在恒温磁力搅拌器进行酶解反应，酶解时间为3h，酶解温度为35℃，得到酶解液；其中，每克蛋白溶液中加入复合蛋白酶的量为3000U。将酶解液置于90℃恒温水浴锅中灭酶15min，待酶解液温度降至室温，调节其pH值为魔芋蛋白等电点；8000r/min离心20min，收集上清液，取一定量上清液测其ACE抑制率>30％，将上清液经过-50℃冷冻干燥24h成冻干粉，得到魔芋蛋白源ACE抑制肽粗品，经过阴离子交换树脂717分离后，得到ACE抑制肽，测得魔芋蛋白源ACE抑制肽的抑制活性是18.6％。实施例2将魔芋蛋白冻干粉溶解于纯净水中，配制成质量浓度为1.5％蛋白溶液；将蛋白液置于恒温磁力搅拌器上加热至45℃；调节pH值为5.0，然后加入复合蛋白酶混合均匀，在恒温磁力搅拌器进行酶解反应，酶解时间为4h，酶解温度为40℃，得到酶解液；其中，每克蛋白溶液中加入复合蛋白酶的量为4000U。将酶解液置于95℃恒温水浴锅中灭酶15min，待酶解液温度降至室温，调节其pH值为魔芋蛋白等电点；9500r/min离心15min，收集上清液，取一定量上清液测其ACE抑制率>50％，将上清液经过-110℃冷冻干燥10h成冻干粉，得到魔芋蛋白源ACE抑制肽粗品，经过阴离子交换树脂717分离后，得到ACE抑制肽，测得魔芋蛋白源ACE抑制肽的抑制活性是31.2％。实施例3将魔芋蛋白冻干粉溶解于纯净水中，配制成质量浓度为2.0％蛋白溶液；将蛋白液置于恒温磁力搅拌器上加热至55℃，调节pH值为6.0，加入复合蛋白酶混合均匀，在恒温磁力搅拌器进行酶解反应，酶解时间为3h，酶解温度为45℃，得到酶解液；其中，每克蛋白溶液中加入复合蛋白酶的量为5000U。将酶解液置于97℃恒温水浴锅中灭酶10min，待酶解液温度降至室温，调节其pH值为魔芋蛋白等电点；10000r/min离心10min，收集上清液，取一定量上清液测其ACE抑制率>60％，将上清液经过-70℃冷冻干燥15h成冻干粉，得到魔芋蛋白源ACE抑制肽粗品，经过阴离子交换树脂717分离后，得到ACE抑制肽，测得魔芋蛋白源ACE抑制肽的抑制活性是37.0％。实施例4将魔芋蛋白冻干粉溶解于纯净水中，配制成质量浓度为2.5％蛋白溶液；将蛋白液置于恒温磁力搅拌器上加热至40℃，调节pH值为7.0，然后加入复合蛋白酶混合均匀，在恒温磁力搅拌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，将魔芋蛋白冻干粉溶解于纯净水中，配成质量分数1‑3％的蛋白溶液；将蛋白溶液加热至35‑55℃，调节pH值为4.0‑9.0，加入复合蛋白酶混合均匀后，酶解，得到酶解液；将酶解液灭酶后，调节pH值至魔芋蛋白等电点；离心，收集上清液，将上清液经过冷冻干燥成冻干粉，得到魔芋蛋白源ACE抑制肽粗品，经过分离后，得到ACE抑制肽。

【技术特征摘要】
1.一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，将魔芋蛋白冻干粉溶解于纯净水中，配成质量分数1-3％的蛋白溶液；将蛋白溶液加热至35-55℃，调节pH值为4.0-9.0，加入复合蛋白酶混合均匀后，酶解，得到酶解液；将酶解液灭酶后，调节pH值至魔芋蛋白等电点；离心，收集上清液，将上清液经过冷冻干燥成冻干粉，得到魔芋蛋白源ACE抑制肽粗品，经过分离后，得到ACE抑制肽。2.根据权利要求1所述的一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，每克蛋白溶液中加入复合蛋白酶的量为3000-6000U。3.根据权利要求1所述的一种魔芋蛋白源ACE抑制肽的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛跟年，周亚丽，贺磊，曹晴，许牡丹，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61