一种CAR新分子及其在肿瘤治疗中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种CAR新分子及其在肿瘤治疗中的应用。具体的，本发明专利技术公开了在T细胞或NK细胞中同时表达CAR和IL‑15、和/或IL‑15受体，能够显著提高修饰细胞的抗肿瘤活性。

【技术实现步骤摘要】
一种CAR新分子及其在肿瘤治疗中的应用
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种CAR新分子及其在肿瘤治疗中的应用。
技术介绍
细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，是一种自身免疫抗癌的新型治疗方法。它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养，导入特定的外源基因，并扩增后回输到病人体内的方法，来激发、增强机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。本领域技术人员一直致力于开发新的细胞免疫疗法，以提高细胞免疫疗法的效果，并降低其副作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种CAR新分子及其在肿瘤治疗中的应用。本专利技术的第一方面，提供了一种核酸构建物，所述核酸构建物具有下式所示的结构：car-(IRES)-f其中，car表示嵌合抗原受体编码多核苷酸序列；IRES表示内部核糖体进入位点序列(Internalribosomeentrysite,IRES)；f表示功能性融合蛋白编码序列，所述功能性融合蛋白包括细胞因子或其活性片段，和/或所述细胞因子的受体或其活性片段。在另一优选例中，所述细胞因子为IL15。在另一优选例中，所述功能性融合蛋白由IL15受体sushi片段和IL15融合形成。在另一优选例中，所述核酸构建物具有下式所示的结构：嵌合抗原受体编码多核苷酸序列-(IRES)-IL15受体sushi片段编码多核苷酸序列-L–IL15多核苷酸编码序列，其中“-”表示连接相邻核苷酸的磷酯键或任选地接头肽编码多核苷酸序列，“L”表示任选地接头肽编码序列。在另一优选例中，所述IRES序列为SEQIDNO.31中的第21位-605位。在另一优选例中，f为编码SEQIDNO.22、33、35所示多肽的多核苷酸序列。在另一优选例中，所述核酸构建物为DNA或RNA。在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域特异性靶向肿瘤细胞表明抗原，优选地包括各种实体瘤和固体肿瘤的细胞表面抗原，例如c-Met、HER2、CD19等。在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域特异性靶向c-Met抗原。在另一优选例中，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域、和细胞内结构域，其中所述抗原结合结构域为特异性靶向c-Met抗原的单链抗体(scFV)。在另一优选例中，所述抗原结合结构域为特异性靶向c-Met抗原的抗体,其亲和力为0.1-20nM，0.64-12.5nM,更加优选地1-2nM。在另一优选例中，所述单链抗体(scFV)的重链可变区如SEQIDNO.6所示。在另一优选例中，所述单链抗体(scFV)的轻链可变区如SEQIDNO.7所示。在另一优选例中，所述单链抗体(scFV)的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示。在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的结构如下式所示：scFV－H-TM－S－CD3ζ其中，scFV为特异性靶向c-Met抗原的单链抗体；H为绞链区；TM为跨膜结构域；S为共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区包括源自CD28的共刺激分子，和/或源自4-1BB的共刺激分子；CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列。在另一优选例中，H的序列如SEQIDNO.9所示。在另一优选例中，TM的序列如SEQIDNO.11所示。在另一优选例中，所述源自CD28的共刺激分子的序列如SEQIDNO.17所示。在另一优选例中，所述源自4-1BB的共刺激分子的序列如SEQIDNO.13所示。在另一优选例中，CD3ζ的序列如SEQIDNO.15所示。在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域如SEQIDNO.8所示。在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的序列如SEQIDNO.1、或3所示。在另一优选例中，car中包含选自下组的编码所述CD8α的铰链区核酸序列：(A)编码如SEQIDNO.9所示的多核苷酸；(C)核苷酸序列与SEQIDNO.10所示序列的同源性≥90％(较佳地≥95％)，并且编码SEQIDNO.9所示氨基酸序列的多核苷酸；(D)与(A)-(C)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。在另一优选例中，car中包含选自下组的编码所述CD8α的跨膜区的核酸序列：(A)编码如SEQIDNO.11所示多肽的多核苷酸；(B)序列如SEQIDNO.12所示的多核苷酸；(C)核苷酸序列与SEQIDNO.12所示序列的同源性≥90％(较佳地≥95％)，并且编码SEQIDNO.11所示氨基酸序列的多核苷酸；(D)与(A)-(C)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。在另一优选例中，car中包含选自下组的编码所述4-1BB(CD137)共刺激分子的核酸序列：(A)编码如SEQIDNO.13所示多肽的多核苷酸；(B)序列如SEQIDNO.14所示的多核苷酸；(C)核苷酸序列与SEQIDNO.14所示序列的同源性≥90％(较佳地≥95％)，并且编码SEQIDNO.13所示氨基酸序列的多核苷酸；(D)与(A)-(C)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。在另一优选例中，car中包含选自下组的编码所述CD28共刺激分子的核酸序列：(A)编码如SEQIDNO.17所示多肽的多核苷酸；(B)序列如SEQIDNO.18所示的多核苷酸；(C)核苷酸序列与SEQIDNO.18所示序列的同源性≥90％(较佳地≥95％)，并且编码SEQIDNO.17所示氨基酸序列的多核苷酸；(D)与(A)-(C)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。在另一优选例中，car中包含选自下组的编码所述CD3ζ的胞内信号结构域的核酸序列：(A)编码如SEQIDNO.15所示多肽的多核苷酸；(B)序列如SEQIDNO.16所示的多核苷酸；(C)核苷酸序列与SEQIDNO.16所示序列的同源性≥90％(较佳地≥95％)，并且编码SEQIDNO.15所示氨基酸序列的多核苷酸；(D)与(A)-(C)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。在另一优选例中，car中包含选自下组的核酸序列：(A)编码如SEQIDNO.1、或3所示多肽的多核苷酸；(B)序列如SEQIDNO.2、或4所示的多核苷酸；(C)核苷酸序列与SEQIDNO.2、或4所示序列的同源性≥90％(较佳地≥95％，更佳地≥98％)，并且编码SEQIDNO.1、或3任一所示氨基酸序列的多核苷酸；(D)与(A)-(C)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。在另一优选例中，car中包含选自下组的核酸序列：(A)编码如SEQIDNO.1、或3所示多肽的多核苷酸；(B)序列如SEQIDNO.29、或30所示的多核苷酸；(C)核苷酸序列与SEQIDNO.29、或30所示序列的同源性≥90％(较佳地≥95％，更佳地≥98％)，并且编码SEQIDNO.1、或3任一所示氨基酸序列的多核苷酸；(D)与(A)-(C)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。在另一优选例中，所述核酸构建物为分离的。在另一优选例中，car中还包括编码前导序列(引导序列，信号肽)的多核苷酸。在另一优选例中，car的序列如SEQIDNO.2、或4所示。在另一优选例中，所述IL15包括野生型的IL15和突变型的IL15，或其活性片段。在另一优选例中，所述IL15受体包括野生型的IL15受体和突变型的IL15受体，或其活性片段(如野生型或突变型的IL15受体α亚基)。在另一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物具有下式所示的结构：car‑(IRES)‑f其中，car表示嵌合抗原受体编码多核苷酸序列；IRES表示内部核糖体进入位点序列(Internal ribosome entry site,IRES)；f表示功能性融合蛋白编码序列，所述功能性融合蛋白包括细胞因子或其活性片段，和/或所述细胞因子的受体或其活性片段。

【技术特征摘要】
1.一种核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物具有下式所示的结构：car-(IRES)-f其中，car表示嵌合抗原受体编码多核苷酸序列；IRES表示内部核糖体进入位点序列(Internalribosomeentrysite,IRES)；f表示功能性融合蛋白编码序列，所述功能性融合蛋白包括细胞因子或其活性片段，和/或所述细胞因子的受体或其活性片段。2.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述细胞因子为IL15。3.如权利要求2所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物具有下式所示的结构：嵌合抗原受体编码多核苷酸序列-(IRES)-IL15受体sushi片段编码多核苷酸序列-L–IL15多核苷酸编码序列，其中“-”表示连接相邻核苷酸的磷酯键或任选地接头肽编码多核苷酸序列，“L”表示任选地接头肽编码序列。4.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域特异性靶向...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳建，
申请(专利权)人：上海健信生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31