一种利用植物源烟水促进茶藨子叶状层菌中多糖类有效成分积累的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用植物源烟水促进茶藨子叶状层菌中多糖类有效成分积累的方法，将斜面培养后生长的较好的茶藨子叶状层菌菌丝团接种到液体培养基中，每1L液体培养基接种7‑8个菌丝团，在液体培养第3天向液体培养体系中加入植物源烟水，每1L液体体系中加入0.5‑1.5mL植物源烟水，在液体培养第7天再次向液体培养体系中加入植物源烟水，每1L液体体系中加入0.15‑0.25mL植物源烟水，液体培养共9‑10天。本发明专利技术在茶藨子叶状层菌发酵培养过程中加入植物源烟水，低浓度的植物源烟水对茶藨子叶状层菌的生长是个“微逆境”，促使多糖类物质的合成，从而提高了作为药用的茶藨子叶状层菌的质量。

【技术实现步骤摘要】
一种利用植物源烟水促进茶藨子叶状层菌中多糖类有效成分积累的方法
本专利技术涉及一种促进茶藨子叶状层菌中活性物质积累的方法，具体涉及一种利用植物源烟水促进茶藨子叶状层菌中活性物质——多糖类积累的方法。
技术介绍
茶藨子叶状层菌（Phylloporiaribis（Schumach:Fr.）Ryvarden）为锈革孔菌科叶状层菌属真菌，该菌主产于山东平邑，寄生于忍冬植株老干或裸露的根部，当地人称之为“银花蛾子”，用药历史悠久，可用于消炎、解毒、止痛，当地居民用其治疗咽炎、喉炎、肝炎及癌症。茶藨子叶状层菌中含有多糖类、甾醇类、和三萜类等有效成分，具有清热解毒、消肿利咽、降血糖和抗肿瘤等作用。真菌多糖类物质具有抗癌、抗氧化、增强免疫活性，在抗肿瘤方面具有重要作用。有研究人员发现茶藨子叶状层菌中含有能明显抑制人卵巢癌细胞（SKOV-3）、人乳腺癌细胞（MDA231）、HepG2细胞增值的多糖类化合物，而且茶藨子叶状层菌多糖具有显著的免疫增强作用，对小鼠肿瘤具有一定的抑制作用，可改善环磷酰胺对荷瘤小鼠造成的免疫损伤。随着茶藨子叶状层菌的开发利用，市场需求量非常大，野生资源远远满足不了工业化生产，人工发酵培养技术已取得突破，在人工发酵培养过程中采取有效措施提高茶藨子叶状层菌中多糖类成分的含量，将有利于该类菌的开发利用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用植物源烟水促进茶藨子叶状层菌中多糖类有效成分积累的方法，该方法在茶藨子叶状层菌发酵培养过程中加入适量的植物源烟水，提高了茶藨子叶状层菌中多糖类物质的含量，该方法对提高茶藨子叶状层菌的品质具有重要意义。植物源烟水是指植物材料焖烧产生的烟溶于水中形成的水溶液，植物源烟水的生理生态作用已成为国际生态学界研究的热点，它能有效提高作物种子萌发率，提高幼苗活力，以及提高药用植物体内药物活性物质的积累，在提高作物和中药材品质方面表现出巨大的潜力，然而其对真菌体内活性物质的积累尚未有研究报道。专利技术人经过研究发现，在人工培养茶藨子叶状层菌的特定发酵时期加入适量的植物源烟水进行培养，该种培养方式大幅度的提高了茶藨子叶状层菌中多糖类活性物质的含量，发现了烟水的又一新用途，同时为高品质茶藨子叶状层菌的培养提供了新的思路。本专利技术具体技术方案如下：一种利用植物源烟水促进茶藨子叶状层菌中多糖类有效成分积累的方法，该方法是将茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden进行斜面培养，斜面培养后，将所得菌丝体接种到液体培养基中进行液体培养，液体培养过程如下：将斜面培养后生长的较好的茶藨子叶状层菌菌丝团接种到液体培养基中，每1L液体培养基接种7-8个菌丝团，在液体培养第3天向液体培养体系中加入植物源烟水，每1L液体体系中加入0.5-1.5mL植物源烟水，在液体培养第7天再次向液体培养体系中加入植物源烟水，每1L液体体系中加入0.15-0.25mL植物源烟水，液体培养共9-10天。本专利技术方法中，所述茶藨子叶状层菌以野生状态下忍冬植株上生长的茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden子实体为菌种，或者以保藏号为CGMCCNO1195的茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden为菌种。本专利技术方法中，所述植物源烟水是将6-7kg的植物源焖烧50-60min所产生的烟通入500ml冷水中得到的水溶液，所述植物源是质量比为3:2:2的山楂核、国槐枝干和楝树枝干。进一步的，植物源烟水的制备方法还包括以下具体步骤：将山楂核、国槐枝干和楝树枝干晾干，堆放在黑屋中，用紫外光照射24h，然后用80-90℃的热气流处理7-8h；处理后，将山楂核、国槐枝干和楝树枝干按照3:2:2的质量比混合，取6-7kg的混合物作为植物源，将6-7kg的植物源焖烧50-60min所产生的烟通入500mL冷水中，所得的水溶液即为植物源烟水。其中，热气流为热空气或热富氧空气。一般的，制得的植物源烟水在4℃避光保存备用。本专利技术方法中，在液体培养时共加入2次植物源烟水，第一次是第3天的时候，第二次是第7天的时候，植物源烟水均一次性加入。本专利技术方法中，液体培养时所用的液体培养基由以下重量百分含量的组分组成：麦芽糖1.5-2.5%，味精0.8-1.2%，KH2PO40.03-0.06%，MgSO4•7H2O0.02-0.04%，葡萄糖0.8-1.2%，酵母膏0.2-0.4%，玉米浆0.05-0.15%，甘露醇1.8-2.5%，CaCO31.8-2.5%，水余量；PH为6.5-7.0。本专利技术方法中，液体培养时，在第1次加入植物源烟水前（即第3天的时候），在光照强度300-350Lux、27-29℃、140-160rpm的条件下进行培养，在第1次加入植物源烟水后，在黑暗、24-25℃、140-160rpm的条件下培养12-14h，然后转至光照强度300-350Lux、27-28℃、140-160rpm的条件下培养，直至第2次加入植物源烟水。在第2次加入植物源烟水后，在黑暗、24-25℃、140-160rpm的条件下培养12-14h，然后转至光照强度300-350Lux、27-28℃、140-160rpm的条件下培养，直至液体培养结束。本专利技术方法中，整个液体培养过程中，保持液体培养体系的pH为6.5-7.0。尤其是加入植物源烟水后，因为烟水本身PH值低，为了防止加入之后整个培养基的PH过低影响菌的生长，需要同时调整pH。本专利技术方法中，为了避免植物源烟水中带入不利于菌种生长的成分，先对植物源烟水进行以下处理后，再加入液体培养基中：先将植物源烟水在121℃下进行高压灭菌20min，然后将植物源烟水煮沸30min，放凉后再加入液体培养基中。本专利技术方法中，斜面培养时，将茶藨子叶状层菌菌种加入斜面培养基中，在29℃培养7天。所用的斜面培养基由以下重量百分含量的组分组成：土豆20%、琼脂1.5%、葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.05%、维生素1×10-3%，水余量，PH为6.5。本专利技术在茶藨子叶状层菌发酵培养过程中加入植物源烟水，本专利技术植物源烟水由山楂核、国槐枝干和楝树枝干制成，该植物源烟水中含有多种微量的有机酸等活性物质。当植物源烟水浓度低时，其中的部分成分对茶藨子叶状层菌的生长形成“微逆境”，成为“启动”茶藨子叶状层菌中活性物质—多糖类物质生物合成程序的“诱导子”。多糖类物质在茶藨子叶状层菌体内担任“抗逆分子”，植物源烟水的存在促使茶藨子叶状层菌提高体内多糖类物质的合成来抵御“微逆境”，因此我们的目标药物活性物质多糖类物质的含量会增加，从而提高了作为药用的茶藨子叶状层菌的质量。本专利技术首次提出植物源烟水对茶藨子叶状层菌活性物质积累的作用，该方法原料来源广泛、操作方便，易于实施，对提高茶藨子叶状层菌质量具有重要意义。附图说明图1本专利技术烟水制取装置的结构示意图。图中，1、桶状铁质容器，2、盖子，3、横向隔板，4、点火口，5、遮烟盖，6、缓冲瓶，7、接收瓶，8、真空抽滤装置。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术进行进一步说明，下述说明仅是为了解释本专利技术，并不对其内容进行限制。实施例1本专利技术植物源烟水可以采用专利本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用植物源烟水促进茶藨子叶状层菌中多糖类有效成分积累的方法，将茶藨子叶状层菌

【技术特征摘要】
1.一种利用植物源烟水促进茶藨子叶状层菌中多糖类有效成分积累的方法，将茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden进行斜面培养，其特征是：斜面培养后，将所得菌丝体接种到液体培养基中进行液体培养，液体培养过程如下：将斜面培养后生长的较好的茶藨子叶状层菌菌丝团接种到液体培养基中，每1L液体培养基接种7-8个菌丝团，在液体培养第3天向液体培养体系中加入植物源烟水，每1L液体体系中加入0.5-1.5mL植物源烟水，在液体培养第7天再次向液体培养体系中加入植物源烟水，每1L液体体系中加入0.15-0.25mL植物源烟水，液体培养共9-10天；所述植物源烟水是将6-7kg的植物源焖烧50-60min所产生的烟通入500mL冷水中得到的水溶液，所述植物源是质量比为3:2:2的山楂核、国槐枝干和楝树枝干。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：液体培养时，在第一次加入植物源烟水前，在光照强度300-350Lux、27-29℃、140-160rpm的条件下进行培养，在第1次加入植物源烟水后，在黑暗、24-25℃、140-160rpm的条件下培养12-14h，然后转至光照强度300-350Lux、27-29℃、140-160rpm的条件下培养，直至第2次加入植物源烟水；在第2次加入植物源烟水后，在黑暗、24-25℃、140-160rpm的条件下培养12-14h，然后转至光照强度300-350Lux、27-29℃、140-160rpm的条件下培养，直至液体培养结束。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是：所述液体培养基由以下重量百分含量的组分组成：麦芽糖1.5-2.5%，味精0.8-1.2%，KH2PO40.03-0.06%，MgSO4·7H2O0.02-0.04%，葡萄糖0.8-...

【专利技术属性】
技术研发人员：方磊，周洁，张华，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37