稻瘟病菌的突变体菌株K2e12及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种稻瘟病菌的突变体菌株K2e12，为Magnaporthe oryzae K2e12；其保藏号为：CCTCC NO:M 2016107。该稻瘟病菌的突变体菌株K2e12是MGG_07012基因缺失菌株。其用途是：使植物不致病；或者利用K2e12蛋白的表达或修饰作为靶标，筛选抗真菌的药物。

【技术实现步骤摘要】
稻瘟病菌的突变体菌株K2e12及其用途
本专利技术涉及一种稻瘟病菌的突变体K2e12，以及其在使植物不致病上的用途，属于微生物及微生物应用领域。
技术介绍
药物靶标是药物作用的对象，通常是具有重要生理或者病理功能，能够与药物相结合并产生药理作用的生物大分子。药物靶标的筛选和功能研究是发现特异、高效、低毒性药物的前提。在病害真菌中，药物靶标应该该具备以下特征：首先它们应该是菌体生长所必需的基因或基因产物并且具有高度保守和特异的序列，这样才能筛选出对菌体高度特异而对人体或其他宿主无害的药物；其次，药物靶标应该是病原真菌生长和生存必不可少的，至少在侵染宿主的过程中至关重要；最后药物靶标的生化功能要确认，必须有结合小分子化合物的化学特性。目前应用的抗真菌药物按其靶点大致可分为三类：作用于真菌细胞膜的抗真菌药物、作用于核酸合成的抗真菌药物和作用于细胞壁合成的抗真菌药物。第一类药物靶标的代表是真菌细胞膜合成中的关键酶羊毛甾醇14α-去甲基化酶，使用氮唑类抗真菌药物可以抑制该酶的活性，从而阻断真菌细胞膜合成，导致真菌破裂死亡。第二类药物的代表5-氟胞嘧啶(5-FC)进入真菌细胞后可以被转化5-氟脱氧鸟嘧啶单磷酸从而抑制胸苷酸合成酶活性进而影响DNA的合成。第三类靶标的代表为β-1,3-葡聚糖合成酶，作为真菌细胞壁特有多糖的合成酶是一类比较理想的靶点。近年来，随着基因组学、蛋白质组学、生物信息学的快速发展，新的药物靶标筛选技术不断出现，如DNA芯片技术、蛋白质芯片技术、计算机辅助药物设计技术、组合化学技术、化学遗传学技术。这些技术大大提高了药物靶标筛选的效率，加快了新药研发的速度。从筛选出的潜在药物靶标到最终成为药物靶标还需要进一步的确认。目前药物靶标的确认主要采用基因敲除、RNAi和抗体捕获技术等技术，其中基因敲除具有其它方法难以比拟的直接性和有效性，仍是目前确认药物靶标最有力的手段。高通量基因敲除技术在植物病原真菌中的使用使得通过直接敲除基因筛选药物靶标成为可能。蛋白激酶是一类催化蛋白质磷酸化反应的酶，它通过把ATP或GTP的γ-磷酸基团转移到底物蛋白的氨基酸残基上来活化底物。在真核细胞中，大约有30％蛋白质都有共价连接的磷酸基团，由此可见蛋白激酶在生命活动中扮演的重要角色。事实上蛋白激酶参与几乎所有的细胞过程，如细胞代谢、转录、细胞循环、细胞的骨架构建、凋亡、分化、信号传导、细胞间互作、细胞与细胞外基质相互作用等。蛋白激酶广泛存在于真核生物中，从低等的原生动物到高等的哺乳动物，从低等藻类到高等植物以及真菌中都有蛋白激酶。由于蛋白激酶的成员众多，Hanks和Hunter把它们归类为蛋白激酶超家族。真核生物蛋白激酶的催化结构域由250-300个氨基酸残基组成，其氨基酸序列保守，又可分为12个功能亚域。Hanks和Hunter对人类370种蛋白激酶的氨基酸序列进行比对，以依赖cAMP蛋白激酶α催化亚基(PKA-Cα)作对照，发现亚域Ⅰ的Gly50和Gly52，亚域Ⅱ的Lys72，亚域Ⅲ的Glu91，亚域ⅥB的Asp171，亚域Ⅶ的Asp184和Gly186，亚域Ⅷ的Clu208，亚域Ⅸ的Asp220和Gly225，亚域Ⅺ的Ary280在95％的序列中保守。其中VIB、VIII和IX在整个蛋白激酶超家族中非常保守，而不同类型蛋白激酶的区别主要集中在Ⅵ、Ⅷ和Ⅸ亚域。蛋白激酶催化核心的功能包括：结合和定向ATP或GTP，该过程有二价阳离子(Mg2+或Mn2+)参与；结合和定向蛋白质或多肽；催化ATP或GTPγ-磷酸基团转移到受体蛋白氨基酸残基上。蛋白激酶可以磷酸化底物蛋白的9种氨基酸残基，分别是丝氨酸(serine)、苏氨酸(threonine)、酪氨酸(tyrosine)、半胱氨酸(cysteine)、精氨酸(arginine)、赖氨酸(lysine)、天冬氨酸(aspartate)、谷氨酸(glutamate)和组氨酸(histidine)。根据其催化底物残基的不同可以将其分成5类，其中丝氨酸和苏氨酸蛋白激酶与酪氨酸蛋白激酶是最主要的两类。在人类激酶组学研究中，对2244个蛋白质上6600个磷酸化位点进行分析，发现磷酸化的丝氨酸(pSer)、苏氨酸(pThr)和酪氨酸(pTyr)位点分别占86.4％，11.8％,和1.8％也表明了这一点。Hanks和Hunter在蛋白激酶的研究中做出了突出贡献，他们第一次在分子系统发生层面描述了人类蛋白激酶超家族，奠定了后人研究蛋白激酶分类的基础。Manning在Hanks和Hunter研究的基础上，将所有的激酶按组，家族，亚家族三种层次分类并将人类的蛋白激酶分类扩展到9个组，134个家族，201个亚家族，这为研究人类与模式生物相关激酶的功能和进化关系提供了便利。蛋白激酶的分类主要依据是催化结构域的序列相似程度，催化结构域以外的序列和结构的相似度以及生化功能也是分类的重要依据。按照Manning的分类，人类的518种蛋白激酶分成“传统”的蛋白激酶(ePK)和“非典型”的蛋白激酶(aPK)两大类。ePK含478种蛋白激酶，又被分成9个组：AGC，CAMK，CK1，CMGC，RGC，STE，TK，TKL，Other；aPK含40种蛋白激酶，被分为8个组：Alpha，PIKK，PDHK，RIO，A6，ABC1，BRD，Other。由于aPK在序列上与ePK并没有明确的相似性，但aPK具有蛋白激酶的功能，因此单独分为一类。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种稻瘟病菌的突变体菌株K2e12及其用途。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种稻瘟病菌的突变体菌株K2e12，为MagnaportheoryzaeK2e12(稻瘟病菌MagnaportheoryzaeK2e12)；其保藏号为：CCTCCNO:M2016107。作为本专利技术的稻瘟病菌的突变体菌株K2e12的改进：该稻瘟病菌的突变体菌株K2e12是MGG_07012基因缺失菌株。本专利技术还同时提供了上述稻瘟病菌的突变体菌株K2e12的用途：用于侵染植物，使植物不致病；所述病为稻瘟病。作为本专利技术的稻瘟病菌的突变体菌株K2e12的用途的改进：所述植物为水稻或大麦；水稻例如为Oryzaesativacv.CO-39；大麦例如为Hordeumvulgarecv.Goldenpromise。本专利技术还同时提供了上述稻瘟病菌的突变体菌株K2e12的另一种用途：利用K2e12蛋白的表达或修饰作为靶标，筛选抗真菌的药物。本专利技术的菌株MagnaportheoryzaeK2e12，其保藏信息具体如下：保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2016年3月14日，保藏名称：MagnaportheoryzaeK2e12；保藏号：CCTCCNO:M2016107。本专利技术所涉及的稻瘟病菌突变体菌株K2e12，确切的说是MGG_07012基因缺失突变体，更确切的说与稻瘟病菌野生型菌株Guy11相比，K2e12在基因组DNA水平上的差异在于K2e12不含MGG_07012基因，即稻瘟病菌突变体菌株K2e12是MGG_07012基因缺失菌株。在蛋白水平上的差异在于K2e12不含MGG_07012蛋白，在表达水平上的差异在于MGG_070本文档来自技高网...

【技术保护点】
稻瘟病菌的突变体菌株K2e12，其特征在于：为Magnaporthe oryzae K2e12；其保藏号为：CCTCC NO:M 2016107。

【技术特征摘要】
1.稻瘟病菌的突变体菌株K2e12，其特征在于：为MagnaportheoryzaeK2e12；其保藏号为：CCTCCNO:M2016107。2.根据权利要求1所述的稻瘟病菌的突变体菌株K2e12，其特征在于：该稻瘟病菌的突变体菌株K2e12是MGG_07012基因缺失菌株。3.如权利要求1或2所述的稻瘟...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小红，宁国傲，林福呈，冯晓晓，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33