The invention relates to the technical field of antibody engineering, and specifically discloses a monoclonal antibody against PCSK9. The present invention comprises an amino acid sequence encoding the antibody variable region and a CDR region, and the use of the acquisition method and monoclonal antibodies. The present invention screened anti PCSK9 monoclonal antibody from a phage antibody library, method for constructing phage library by chain replacement in the affinity maturation, first on the light chain CDR1, screening the monoclonal antibody was 2 and 3 mutation database screening, selection of high affinity monoclonal antibody, then the heavy chain CDR1, 2 3, the mutation database screening, finally screened anti PCSK9 monoclonal antibody with high affinity. The PCSK9 antibody obtained by the invention has good affinity for PCSK9 and can inhibit the combination of PCSK9 and its ligands, and can be used for the treatment of dyslipidemia, cardiovascular and cerebrovascular diseases and thrombotic obliterans diseases.
【技术实现步骤摘要】
抗PCSK9单克隆抗体
本专利技术涉及抗体工程
,具体涉及本专利技术涉及全人源的抗PCSK9的单克隆抗体、及其获得方法与应用。
技术介绍
PCSK9(前蛋白转化酶枯草溶菌素9,Proproteinconvertasesubtilisin/kexintype9)属于前蛋白转化酶家族蛋白酶K亚家族。人PCSK9基因定位于染色体1p32.3,长约22kb,共有12个外显子,编码含692个氨基酸残基的蛋白质。PCSK9蛋白由信号肽、前结构域、催化结构域和羧基末端结构域(V结构域)组成,它作为可溶性的74kDa的前体合成,在内质网中经过自身催化裂解产生14kDa的前肽和60kDa的成熟的蛋白酶。PCSK9主要在肝脏、肠道和肾脏表达,皮肤和神经系统也有少量表达,但是只有肝脏中的PCSK9可以分泌到血液循环系统中。研究表明,PCSK9能介导低密度脂蛋白受体(LDLR)降解从而调节血浆中LDL胆固醇(LDL-C)水平,而LDLR介导肝内的LDL胞吞过程是从循环系统中清除LDL的主要途径。LDLR是1个多结构域的蛋白,胞外域与表皮生长因子前体同源结构域EGF-A、EGF-B、EGF-C紧连。PCSK9介导LDLR降解首先需要与LDLR结合,LDLR上结合位点主要是EGF-A,形成PCSK9与EGF-A复合物。有研究表明,PCSK9也可通过极低密度脂蛋白受体、载脂蛋白B受体、载脂蛋白E受体2调节胆固醇代谢,但其中的分子机制并不明确。基础研究和临床试验表明,通过外源性的干预措施抑制PCSK9活性,可以加速血浆中LDL的清除,从而达到降血脂的作用。目前PCSK9的抑制剂主要 ...
【技术保护点】
一种抗PCSK9的单克隆抗体,其特征在于,包括:轻链和重链;所述轻链的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3分别用LCDR1、LCDR2和LCDR3表示;并且所述重链的互补决定区CDR1,CDR2和CDR3分别用HCDR1、HCDR2和HCDR3表示;LCDR1包含RASQSIDNRLT、RASQSVRNWLD、RASQGINSWLN、RASQNVNNWLN、RASQNINSWLN、RASQNINNWLN、RASQGIHNWLN、RASQDVDSWLT、RASQSVRNWLN、RASQDVRNWLT或RASQSIRSYLN中的任一种;LCDR2包含DASSRQS、GASTLES、AASTRET、GASSRQS、GASTRPT、DASNRQS、GASNLAS、DASNLQS或DASSRPT中的任一种;LCDR3包含QQPENDPTT、QQDNDIPLT、QQWNNTPNT、QQDNDMPLT、QQWFDVPTT、QQWDDTPNT、QQNSNIPLT、QQDSKIPLT、QQWTDTPLT、QQDDSTPPT或QQGDSMPMT中的任一种;HCDR1包含GGTFTNNA、GYTVTSYG ...
【技术特征摘要】
1.一种抗PCSK9的单克隆抗体,其特征在于,包括:轻链和重链;所述轻链的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3分别用LCDR1、LCDR2和LCDR3表示;并且所述重链的互补决定区CDR1,CDR2和CDR3分别用HCDR1、HCDR2和HCDR3表示;LCDR1包含RASQSIDNRLT、RASQSVRNWLD、RASQGINSWLN、RASQNVNNWLN、RASQNINSWLN、RASQNINNWLN、RASQGIHNWLN、RASQDVDSWLT、RASQSVRNWLN、RASQDVRNWLT或RASQSIRSYLN中的任一种;LCDR2包含DASSRQS、GASTLES、AASTRET、GASSRQS、GASTRPT、DASNRQS、GASNLAS、DASNLQS或DASSRPT中的任一种;LCDR3包含QQPENDPTT、QQDNDIPLT、QQWNNTPNT、QQDNDMPLT、QQWFDVPTT、QQWDDTPNT、QQNSNIPLT、QQDSKIPLT、QQWTDTPLT、QQDDSTPPT或QQGDSMPMT中的任一种;HCDR1包含GGTFTNNA、GYTVTSYG或GYSLTSYG中的任一种;HCDR2包含RIIPMFGMA、LSFYNGNT、VTFYNGNT、VSFYQGNT、VSFYNGQT或VSFYNGNS中的任一种;HCDR3包含AREGIPMI、ARGYSLDV、ARGYGMSI、ARGFGMDR、ARGYGMTV或ARGFGLSV中的任一种。2.根据权利要求1所述的抗PCSK9的单克隆抗体,其特征在于,所述轻链可变区氨基酸序列优选SEQNO.11、SEQNO.12、SEQNO.13、SEQNO.14、SEQNO.15、SEQNO.16、SEQNO.17、SEQNO.18、SEQNO.19、SEQNO.20或SEQNO.21中的任一种。3.根据权利要求1所述的抗PCSK9的单克隆抗体,其特征在于,所述重链可变区氨基酸序列优选SEQNO.1、SEQNO.2、SEQNO.3、SEQNO.4、SEQNO.5、SEQNO.6、SEQNO.7、SEQNO.8、SEQNO.9或SEQNO.10中的任一种。4.根据权利要求1所述的抗PCSK9的单克隆抗体,其特征在于,所述重链可变区HCDR1序列选自GYTVTSYG或GYSLTSYG的氨基酸序列;所述轻链可变区LCDR1序列选自RASQSVRNWLD、RASQNVNNWLN、RASQNINSWLN、RASQNINNWLN或R...
【专利技术属性】
技术研发人员:周海平,李晓敏,张稳,文圣梅,白义,
申请(专利权)人:北京东方百泰生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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