一种抗体信号肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新型的抗体信号肽及其应用。本发明专利技术所述的抗体信号肽是从一株鼠抗猪B7‑H3的抗体轻链中鉴定出的一段包含18‑21个氨基酸的短肽信号肽序列，该序列能指导缺乏信号肽的蛋白获得分泌功能。所述的抗体信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2‑5所示。本发明专利技术的提出为缺乏信号肽的蛋白的分泌表达提供了一种新的技术手段。

Antibody signal peptide and application thereof

The present invention discloses a new antibody signal peptide and its application. The signal peptide antibody of the invention is the short peptide signal peptide sequences identified from a mouse anti porcine B7 H3 antibody light chain in a period of 18 contains 21 amino acids, the sequence can guide the lack of signal peptide protein secreting function. The amino acid sequence of the signal peptide antibodies such as SEQ ID NO.2 5 shows. The present invention provides a new technical means for the secretion and expression of proteins lacking signal peptide.

【技术实现步骤摘要】
一种抗体信号肽及其应用
本专利技术涉及一种新型的抗体信号肽及其在缺少信号肽蛋白在真核细胞内进行分泌表达中的应用。本专利技术属于生物

技术介绍
信号肽是一类具有介导蛋白穿越细胞脂质膜的蛋白短肽序列，它一般存在于分泌型蛋白或膜蛋白的末端，可以将目的蛋白定位于细胞外或者细胞膜上。信号肽的长度一般在30个氨基酸左右，位于蛋白序列的末端。如果将分泌型蛋白或膜蛋白的信号肽进行缺失，该蛋白将会滞留于细胞内，不能穿越细胞膜到达细胞外或者细胞膜上。因此，蛋白质穿越细胞膜需要一个完整的信号肽序列才能完成。信号肽的这一功能在真核表达中具有广泛的应用前景，如将细胞内表达的蛋白加入信号肽后，该蛋白就可以进行分泌表达，这样有利于该蛋白的纯化。抗体是哺乳动物的一类分泌型蛋白，由免疫系统中的B细胞分泌，由于抗体具有高度的多态性，每一个抗体分子的序列均不一样，因此，每种抗体的信号肽序列也不同。我们在一株鼠抗猪B3-H7的抗体轻链中鉴定了一段包含18-21个氨基酸的短肽信号肽序列，该序列能指导缺乏信号肽的蛋白获得分泌功能。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种新型的抗体信号肽，该信号肽可以实现缺少信号肽的蛋白在真核细胞内的分泌表达。为了达到上述目的，本专利技术采用了以下技术手段：1.克隆小鼠重链的恒定区编码基因(mFc)，并且使该克隆基因5’加上ATG起始密码子，3’端带上TAA终止密码子，然后将该基因插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)BamHI和XhoI之间，构成真核重组表达载体pcDNA-mFc。2.克隆小鼠mFc(不带起始密码子，只带终止密码子)，并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)BamHI和XhoI之间，合成抗猪B7-H3抗体轻链5’端17-21位氨基酸的编码基因片段，将这些基因片段分别连接于mFc前的HindIII与BamHI之间，分别构成真核重组表达载体pcDNA-S21-mFc(包含21个氨基酸的短肽)、pcDNA-S20-mFc(包含20个氨基酸的短肽)、pcDNA-S19-mFc(包含19个氨基酸的短肽)、pcDNA-S18-mFc(包含18个氨基酸的短肽)和pcDNA-S17-mFc(包含17个氨基酸的短肽)。3.将构建的各种真核重组载体(包括pcDNA-mFc、pcDNA-S21-mFc、pcDNA-S20-mFc、pcDNA-S19-mFc、pcDNA-S18-mFc和pcDNA-S17-mFc)转染293T细胞，48h后收集上清或细胞，收集的转染细胞进一步进行裂解，上清或裂解的细胞用proteinG进行纯化，纯化的产物进行westernBlot分析。结果表明，本专利技术人在一株鼠抗猪B7-H3的抗体轻链中鉴定的一段包含18-21个氨基酸的短肽信号肽序列，该序列能指导缺乏信号肽的蛋白获得分泌功能。因此，在上述研究的基础上，本专利技术提出了一种新型的抗体信号肽，其是从一株鼠抗猪B7-H3的抗体轻链中鉴定出的一段包含18-21个氨基酸的短肽信号肽序列，其氨基酸序列如SEQIDNO.2-5所示。编码所述的抗体信号肽的核苷酸序列也在本专利技术的保护范围之内。优选的，所述的核苷酸序列分别如SEQIDNO.7-10所示。进一步的，本专利技术还提出了所述的抗体信号肽在缺少信号肽的蛋白在真核细胞内进行分泌表达中的应用。其中，优选的，所述的蛋白为单链抗体。附图说明图1为mFc蛋白的Westernblot检测结果；A)不带信号肽的mFc转染293T细胞，48h后收集细胞进行裂解，其中的mFc用proteinG纯化后进行westernBlot分析:1.蛋白质marker；2.转染细胞的裂解产物经proteinG纯化后进行westernBlot分析；3.转染细胞上清经proteinG纯化后进行westernBlot分析；B)带不同长度信号肽的mFc基因转染293T细胞，48h后取上清，上清中的mFc用proteinG纯化后进行westernBlot分析：1.蛋白质marker；2.N端带21个氨基酸的信号肽的mFc基因转染293T细胞的分析结果；3.N端带20个氨基酸的信号肽的mFc基因转染293T细胞的分析结果；4.N端带19个氨基酸的信号肽的mFc基因转染293T细胞的分析结果；5.N端带18个氨基酸的信号肽的mFc基因转染293T细胞的分析结果；6.N端带17个氨基酸的信号肽的mFc基因转染293T细胞的分析结果；7.培养基上清对照。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。实施例1本专利技术的抗体信号肽及其在蛋白分泌表达中的应用1、小鼠重链的恒定区编码基因(mFc)的扩增及其表达载体的构建根据小鼠重链的恒定区编码基因(mFc)设计克隆引物对如下：mFc-F1:5’GAGAGGATCCATGGAGCCCAGCGGGCCCATTTC3’和mFc-R:5’GAGACTCGAGCCGGGTAAAGGTAAATGA3’其中在上游引物(mFc-F1)的5’端加入BamHI酶切位点(GGATCC)和起始密码子(ATG)，下游引物(mFc-R)的5’端加入XhoI酶切位点(CTCGAG)。用该引物对从抗猪B7-H3杂交瘤细胞制备的cDNA中扩增mFc片段(SEQIDNO.11所示)，纯化PCR产物后用BamHI和XhoI进行酶切，酶切产物进一步进行琼脂糖凝胶电泳纯化回收，将回收的mFc产物连接到用BamHI和XhoI酶切和纯化的真核表达载体pcDNA3.1(+)上，获得真核重组表达载体pcDNA-mFc，该重组载体中不带任何信号肽序列。2、含有信号肽的小鼠mFc表达载体的构建根据克隆小鼠mFc设计克隆引物对如下：mFc-F2:5’GAGAGGATCCGAGCCCAGCGGGCCCATTTC3’(不带起始密码子)，用该引物与mFc-R一起配对扩增mFc片段，该片段纯化后用BamHI和XhoI进行酶切，酶切产物进一步进行琼脂糖凝胶电泳纯化回收，将回收的mFc产物连接到用BamHI和XhoI酶切和纯化的真核表达载体pcDNA3.1(+)上，获得真核重组表达载体pcDNA-mFc2(该重组载体中的mFc不含起始密码子)。合成含有抗猪B7-H3抗体轻链5’端17-21个氨基酸的编码基因片段，如下表1所示，将这些基因片段分别连接与mFc前的HindIII与BamHI之间，分别构成真核重组表达载体pcDNA-S21-mFc(包含21个氨基酸的短肽)、pcDNA-S20-mFc(包含20个氨基酸的短肽)、pcDNA-S19-mFc(包含19个氨基酸的短肽)、pcDNA-S18-mFc(包含18个氨基酸的短肽)和pcDNA-S17-mFc(包含17个氨基酸的短肽)。表13、westernBlot分析将构建的各种真核重组载体(包括pcDNA-mFc、pcDNA-S21-mFc、pcDNA-S20-mFc、pcDNA-S19-mFc、pcDNA-S18-mFc和pcDNA-S17-mFc)转染293本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型的抗体信号肽，其特征在于，所述的抗体信号肽是从一株鼠抗猪B7‑H3的抗体轻链中鉴定出的一段包含18‑21个氨基酸的短肽信号肽序列，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2‑5所示。

【技术特征摘要】
1.一种新型的抗体信号肽，其特征在于，所述的抗体信号肽是从一株鼠抗猪B7-H3的抗体轻链中鉴定出的一段包含18-21个氨基酸的短肽信号肽序列，其氨基酸序列分别如SEQIDNO.2-5所示。2.编码权利要求1所述的抗体信号肽的核苷酸序列。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘恒贵，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23