一种亨利兜兰的组织培养快速繁殖方法技术

本发明专利技术提供了一种亨利兜兰组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：(1)自交授粉；(2)果荚采摘；(3)无菌播种；(4)增殖继代培养；(5)生根壮苗培养；(6)生根苗移栽。本发明专利技术还提供了一种适于亨利兜兰组织培养快速繁殖的培养基体系，包括萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，其可用于上述亨利兜兰组培快繁方法中。本发明专利技术另外还提供了亨利兜兰果荚的最佳采摘期，即在亨利兜兰自交后270‑390左右采摘果荚。通过本发明专利技术的方法培养的种苗萌发率高、健壮、根系发达、生长周期短，同时，本发明专利技术的方法简单易操作，生产成本低，为亨利兜兰商业化生产提供了很好的基础。

Tissue culture rapid propagation method for Henry's pocket orchid

The invention provides a Henry orchid tissue culture and rapid propagation, which comprises the following steps: (1) self pollination; fruit picking; (2) (3) (4) the proliferation of aseptic seeding; subculture; rooting; (5) (6) rooting plantlets. The invention also provides a method for Henry orchid tissue culture and rapid propagation medium system, including germination medium, proliferation culture medium and rooting medium, which can be used for the Henry Paphiopedilum micropropagation method. The invention also provides Henry Paphiopedilum pod picking the best period, namely Henry in Paphiopedilum self after 270 390 picking pods. By the method of seedling cultivation of high germination rate, robust, developed root system, short growth cycle, at the same time, the method of the invention is simple and easy to operate, low production cost, provide a good foundation for the commercial production of Paphiopedilum Henry.

【技术实现步骤摘要】
一种亨利兜兰的组织培养快速繁殖方法
本专利技术涉及植物组织培养
，具体而言，本专利技术涉及一种亨利兜兰组织培养快速繁殖的方法、一种适于亨利兜兰组织培养快速繁殖的培养基体系以及一种确定亨利兜兰果荚最佳采集期的方法。
技术介绍
兜兰属(Paphiopedilum)是兰科观赏价值最高的属之一，是继蝴蝶兰、大花蕙兰、文心兰之后的一个新兴兰花。近年来在各类花展中，兜兰属花卉频繁出现并多次获得大奖。兜兰在花卉市场上作为高档盆花也为越来越多的人所喜爱。兜兰原生种主要分布于西南和南部的热带与亚热带地区，以云南、广西和贵州分布最多。亨利兜兰(Paphiopedilumhenryanum)原产我国广西、贵州等地，叶片翠绿，花可爱秀美，观赏价值高。由于近年来日益恶劣的生态环境、自身特殊的生物学特性以及人们的过度性采挖，野生亨利兜兰已经难觅踪迹。据专利技术人2012年-2016年间多次进行的野外考察，仅在云南文山和越南交界的地方见到原始居群。因此应加强亨利兜兰的保护工作，尤其要开展亨利兜兰的繁殖技术研究，以利益促保护，减少野外采挖破坏。由于传统的分株等方法繁殖系数低，费时费力，种子发育不全且没有胚乳，兰花多采用组培快繁的方法进行繁殖。兜兰的组织培养技术难度极大(王代谷等，“贵州兜兰属植物的现状及展望”,《安徽农业科学》,2009,37(6):2469-2470)，是兰科中最难的属之一。杨燕萍等以亨利兜兰的侧芽为材料进行诱导和离体快繁实验，茎尖诱导培养基以Heller+2mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.5g/L活性炭，在继代培养中，试管苗在培养基1/2MS+0.2mg/L6-BA+2mg/LNAA+10％椰子汁+2g/L活性炭中丛生芽增殖为佳，增殖倍数为3.50，增殖系数有待提高(杨燕萍等，“亨利兜兰茎尖诱导与离体快繁试验”，《农业科技通讯》，2011，53-55)。曾宋君等(曾宋君等，“兜兰无菌播种和组织培养研究进展”,《园艺学报》,2007,34(3):793-796)以人工授粉后300天的兜兰种子进行无菌播种实验，发现播种于VW+1mg/LNAA+100ml/L椰子汁+1g/L活性炭培养基，萌发快，萌发率最高约50％。但是随后停止生长并有大量原球茎死亡，需转至另一种培养基继代培养，文中未提到增殖倍数。Lee等从亨利兜兰授粉后60天开始取果荚，每隔30天取一次，一直到270天，发现授粉150天的果荚种子萌发率最高，达40％左右(YILee,“AsymbioticSeedGerminationofSixPaphiopedilumSpeciesinRelationtotheTimeofSeedCollectionandSeedPretreatment”,ActaHorticulturae,2007,755(755):381-386)。可见，目前亨利兜兰的组培快繁殖技术还不是很成熟。因此，为了保护亨利兜兰的野生资源同时满足消费者的需求，有必要提供一种亨利兜兰的快速繁殖体系，以缩短其培养周期、提高种苗成活率和幼苗质量、降低成本，从而满足市场对这一观赏花卉不断增长的需求。
技术实现思路
为了解决上述问题和克服现有技术中的缺陷，本专利技术提供了一种亨利兜兰组织培养快速繁殖的方法、一种适于亨利兜兰组织培养快速繁殖的培养基体系以及提供了亨利兜兰果荚的最佳采集期。本专利技术的第一方面提供了一种亨利兜兰组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：(1)自交授粉：选择花大色艳的亨利兜兰进行异花授粉；(2)果荚采摘：在亨利兜兰自交后270-390天左右采集果荚；(3)无菌播种：以采集的果荚为外植体进行消毒，切开果荚将种子接种在萌发培养基中，暗培养大约4周开始有原球茎萌发，大约8周有芽长出，然后转为光照周期为12h培养；(4)增殖继代培养：将步骤(3)中产生的幼苗接种到增殖培养基中，每4周继代一次，增值率达3倍；(5)生根壮苗培养：将步骤(4)中增殖培养大约8周的、生长健壮的2cm左右的幼苗转接到生根壮苗培养基中进行培养；(6)生根苗移栽：在步骤(5)中的幼苗培养大约4周后，将根系生长良好的植株转移到自然光下炼苗，然后将其移栽至基质中进行培养。在一个实施方式中，在本专利技术的方法中使用的所述萌发培养基为1/2MS+100ml/L椰汁+1.0mg/LNAA+1.0g/L活性炭+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶；或者所述萌发培养基为1/2MS+100ml/L椰汁+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。在一个实施方式中，在本专利技术的方法中使用的所述增殖培养基为1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+100ml/L椰乳+1.5g/L活性炭20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。在一个实施方式中，在本专利技术的方法中使用的所述生根壮苗培养基为1/2MS+0.3mg/LNAA+100ml/L椰汁+1.5g/L活性炭+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。在一个优选的实施方式中，在亨利兜兰自交后第260天左右、第270天左右、第300天左右、第330天左右、第360天左右、第390天左右或上述任意时间点之间的任意时间点采集果荚。例如，可以在亨利兜兰自交后第260天左右、第270天左右、第280天左右、第290天左右、第300天左右、第310天左右、第320天左右、第330天左右、第340天左右、第350天左右、第360天左右、第370天左右、第380天左右、第390天左右或上述任意时间点之间的任意时间点采集果荚。优选地，在亨利兜兰自交后第270-330天左右、第330-360天左右或第360-390天左右采摘果荚，更优选地在亨利兜兰自交后第270-300天左右、第300-330天左右或第330-360天左右采摘果荚，甚至更优选地在亨利兜兰自交后第330-330天左右采摘果荚。优选地，在亨利兜兰自交后第270天左右、第300天左右或第330天左右采摘果荚。在一个实施方式中，在本专利技术的方法中，培养室培养的温度为24±2℃，光照强度为1000-15001x，光照周期为12h；黑暗培养温度为24±2℃。本专利技术的第二方面提供了一种用于亨利兜兰组织培养快速繁殖的萌发培养基，所述萌发培养基为1/2MS+100ml/L椰汁+1.0mg/LNAA+1.0g/L活性炭+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。本专利技术的第三方面提供了一种用于亨利兜兰组织培养快速繁殖的培养基体系，其包含萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，其中所述萌发培养基为1/2MS+100ml/L椰汁+1.0mg/LNAA+1.0g/L活性炭+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶或者所述萌发培养基为1/2MS+100ml/L椰汁+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。在一个实施方式中，本专利技术的培养基体系中的所述增殖培养基为1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+100ml/L椰乳+1.5g/L活性炭20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。在一个优选的实施方式中，本专利技术的培养基体系中的所述生根壮苗培养基为1/2MS+0.3mg/LNAA+100ml/L椰汁+1.5g/L活性炭+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。在一个优选的实施方式中，本专利技术的培养基体系是下面表1所示的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于亨利兜兰组织培养快速繁殖的培养基体系，其包含萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，其中所述萌发培养基为1/2MS+100ml/L椰汁+1.0mg/L NAA+1.0g/L活性炭+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶或所述萌发培养基为1/2MS+100ml/L椰汁+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。

【技术特征摘要】
1.一种用于亨利兜兰组织培养快速繁殖的培养基体系，其包含萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，其中所述萌发培养基为1/2MS+100ml/L椰汁+1.0mg/LNAA+1.0g/L活性炭+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶或所述萌发培养基为1/2MS+100ml/L椰汁+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。2.如权利要求1所述的培养基体系，其中所述增殖培养基为1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+100ml/L椰乳+1.5g/L活性炭20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。3.如权利要求1-2任一项所述的培养基体系，其中所述生根壮苗培养基为1/2MS+0.3mg/LNAA+100ml/L椰汁+1.5g/L活性炭+20.0g/L蔗糖+4.6g/L卡拉胶。4.一种亨利兜兰组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：(1)自交授粉：选择花大色艳的亨利兜兰进行异花授粉；(2)果荚采摘：在亨利兜兰自交后270-390天采集果荚；(3)无菌播种：以采集的果荚为外植体进行消毒，切开果荚将种子接种在萌发培养基中，暗培养大约8周后转为光照周期为12h培养；(4)增殖继代培养：将步骤(3)中产生的幼苗接种到增殖培养基中，每4周继代一次；(5)生根壮苗培养：将步骤(4)中增殖...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾瑞冬，葛红，李秋香，张晓，周妍慧，徐玉凤，王洪云，刘娜，
申请(专利权)人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11