一种淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制备方法技术

技术编号:15449744 阅读:293 留言:0更新日期:2017-05-31 11:24
本发明专利技术公开了一种淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制备方法。以天然淀粉为原料,用磷酸盐缓冲溶液配置成质量百分比浓度浓度为5%~15%的淀粉溶液,在一定温度和pH条件下,先使用α‑淀粉酶对其进行酶解,再采用脱支酶对糊化后的淀粉进行脱支,将酶解液经醇沉、超滤、凝胶色谱柱分离提纯后,使重均、数均分子量与α‑1,6糖苷键同时满足要求。艾考糊精具有α‑1,6糖苷键低于10%,重量平均分子量为13000~19000Da,数量平均分子量为5000~6500Da等性质。本发明专利技术提供一种产率高,品质好,成本相对低的淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制备方法,弥补了目前关于艾考糊精制备工艺的不足。

Preparation method of sodium dextrin used for starch based Liquor Dialysisintraperitoneus

The invention discloses a method for preparing sodium dextrin used in starch based Liquor Dialysisintraperitoneus. With natural starch as raw material, using phosphate buffer configured to mass percentage concentration of 5% to 15% of the starch solution, at a certain temperature and under the condition of pH, the first use of alpha amylase on the enzyme, then the debranching enzyme of gelatinized starch debranching enzyme, the solution was precipitated by ethanol purification, ultrafiltration, gel column chromatography, the weight average and number average molecular weight of 1,6 and alpha glycosidic bond and to meet the requirement. Icodextrin with alpha 1,6 glycosidic bond is lower than 10%, average molecular weight is 13000 ~ 19000Da, the number average molecular weight is 5000 ~ 6500Da properties. The present invention provides a preparation method of moxa base dextrin used in starch based Liquor Dialysisintraperitoneus for high yield, good quality and relatively low cost, and makes up the deficiency of the preparation process of the moxa dextrin at present.

【技术实现步骤摘要】
一种淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制备方法
本专利技术涉及淀粉糊精制备的方法,具体是指利用生物技术、膜过滤及柱层析相结合制备淀粉基腹膜透析液的方法。
技术介绍
淀粉基腹膜透析液艾考糊精是艾考糊精腹膜透析液中的主要活性成分。肾透析是一种简单、有效、价廉的方法,适合几乎所有ESRD病人,在我国香港及欧洲等国,80%以上的透析患者选择腹透治疗。艾考糊精(Icodextrin)是由谷物淀粉通过α-1,4和少于10%α-1,6糖苷键连接的水溶性葡萄糖聚合物,重量平均分子量为13000~19000Da,数量平均分子量为5000~6500Da。艾考糊精作为一个胶体渗透剂在长期腹膜透析留置期间完成超滤。在现有的关于艾考糊精腹膜透析液的文献中,只有关于艾考糊精在腹膜透析液中的应用,以及相对于其他渗透剂,这种大分子多糖渗透剂在药物临床上具有的一些优势和目前面临的困难,但是并没有对艾考糊精的制备提供具体的方法。中国专利技术专利2013104530981中有介绍艾考糊精的酸水解制备方法,但是该方法使用的是乌氏粘度计对重均分子量进行测定,测定方法存在的误差较大,并且没有对数均分子量进行测定,重点在于也没有对α-1,6糖苷键的比例进行调控。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种产率高,品质好,成本相对低的淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制备方法,弥补了目前关于艾考糊精制备工艺的不足。本专利技术联合膜过滤与葡聚糖凝胶色谱柱进行分离、提纯,并且采用GPC对重均和数均分子量进行监测,利用1H-NMR对酶解产物的α-1,6糖苷键含量进行了测定。经过本专利技术制备方法所得到的艾考糊精分子量分布范围更窄,更集中,且糖苷键的比例也严格符合产品要求,纯度更高。本专利技术的目的通过如下技术方案实现:一种淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制备方法,包括如下步骤:1)将淀粉用磷酸盐缓冲溶液配置成淀粉溶液,并调节pH值至5.8~7.8,置于密闭容器中,在95~99℃下搅拌糊化60~100min后,冷却至70~95℃,加入α-淀粉酶,用量为每克干淀粉加入α-淀粉酶1~8U,酶解1~8min,调节pH值至2.5~3.0,并保持10~15min灭酶活,得到淀粉酶解液;2)将步骤1)所得的淀粉酶解液在pH值为5.5~6.5,40~60℃条件下加入脱支酶,用量为每克干淀粉加入脱支酶2~10U,搅拌反应30~60min后,加热至90~100℃并保持10~15min;灭酶活,得到腹膜透析液粗酶解液;3)将步骤2)中腹膜透析液粗酶解液先用乙醇溶液醇沉,静置,离心分离后取其沉淀物,再用蒸馏水洗涤后离心分离,将分离所得的沉淀物干燥;4)将步骤3)得到的沉淀物用蒸馏水配成溶液,采用孔径10k-20kD超滤膜超滤后,将分子量在10000~20000Da之间的样品经葡聚糖凝胶色谱柱分离提纯,得到不同组分的酶解液,测其重均和数均分子量,测定α-1,6糖苷键的含量;筛选得到重均分子量为13000~19000Da,数量平均分子量为5000~6500Da,淀粉中α-1,6糖苷键的摩尔比例低于10%的组分;5)将步骤4)中的最终酶解组分进行干燥,得到腹膜透析液用艾考糊精。为了更好地实现本专利技术目的,优选地,步骤1)所述淀粉为玉米淀粉、蜡质玉米淀粉、小麦淀粉、木薯淀粉和马铃薯淀粉中的一种。优选地,所述脱支酶为普鲁兰酶或异淀粉酶。优选地,所述α-淀粉酶是耐高温α-淀粉酶。优选地,步骤1)淀粉溶液的质量百分比浓度为5%~15%。优选地,步骤3)所述乙醇溶液的体积分数为40~50%。优选地,步骤3)所述静置是在0-4℃冰箱中静置12~24h。优选地,步骤4)所述溶液中沉淀物的质量百分比浓度为10~30%。优选地,步骤5)中的干燥方法为常压干燥、减压干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。优选地,利用凝胶渗透色谱(GPC)测定其重均和数均分子量,用1H-NMR测定其α-1,6糖苷键的含量。本专利技术先使用醇沉和超滤对样品进行粗分离,再使用葡聚糖凝胶色谱柱对样品进行精提纯,这样得到的样品纯度更高。本专利技术与现有技术相比,具有如下优点和有益效果:1)利用淀粉酶和脱支酶对淀粉进行酶解,现有技术已有一定的介绍;如中国专利技术专利2014102015745公开了淀粉基补铁营养强化剂的制备方法。该方法先将淀粉原料配成淀粉乳,并调节pH,置于密闭容器中在95~99℃下搅拌糊化30~60min;糊化完成后,将糊化液冷却,加入脱支酶,在45~65℃下搅拌反应;调节pH至5.5~7.0,加入α-淀粉酶,在45~110℃下搅拌反应,得直链淀粉溶液。但是现有技术基本是先用脱支酶酶解再用α-淀粉酶酶解,顺序与本专利技术相反,目的也完全不同。现有技术大多是为了得到直链淀粉;而本专利技术为了得到艾考糊精,是有一定的支链的淀粉。而且由于数均分子量的范围难以控制,分支度不容易通过酶解得以控制,很难在数均、重均分子量以及α-1,6糖苷键三方面同时满足艾考糊精要求;现有技术尚未发现用酶解的方式制备艾考糊精;中国专利技术专利2013104530981就是用酸解的方式制备艾考糊精。2)本专利技术发现:先使用淀粉酶酶解α-1,4糖苷键,将原淀粉的主链分解成片段,再在脱支酶作用下,通过部分酶解淀粉溶液中的α-1,6糖苷键,将酶解产物中的α-1,6糖苷键比例协同控制在10%以下,关键是要合理控制酶解时间与加酶量以及温度等工艺条件,通过脱支酶酶解α-1,6糖苷键,耐高温α-淀粉酶酶解α-1,4糖苷键,将酶解产物的分支度进行控制,继而控制重均与数均分子量的范围,最后通过筛选两种酶的酶解条件使得重均分子量与数均分子量同时达到标准。淀粉酶与脱支酶共同作用控制糖苷键比例和分散度的艾考糊精的现有技术还未见报道。3)本专利技术所得艾考糊精具有特点范围的重均分子量、数均分子量以及α-1,6糖苷键,但本专利技术联合淀粉酶与脱支酶,且在特定反应条件下控制酶解时间与加酶量分别控制α-1,4糖苷键与α-1,6糖苷键的酶解程度可获得目标产物,尤其是本专利技术方法得到的符合艾考糊精条件的酶解液产率高,艾考糊精粒度均匀,分子量分布集中。4)本专利技术采用生物酶解技术对淀粉原料进行降解,整合醇沉技术、膜过滤技术以及色谱分离技术获得高纯度的淀粉基腹膜透析液艾考糊精,该产品具有低于10%的α-1,6糖苷键,重量平均分子量为13000~19000Da,数量平均分子量为5000~6500Da的性质,完全符合该类产品的国际质量标准。与传统的酸水解法相比,生物酶解的技术使得生产效率大大提高,且具有保护环境的优点。5)本专利技术制备的艾考糊精可以用于胶体渗透剂,以艾考糊精为主要活性成分的腹膜透析液可成为终末期肾衰竭患者有效的肾替代治疗方法之一。附图说明图1为实施例1中淀粉最终酶解产物的分子量分布图谱。具体实施方式为更好理解本专利技术,下面结合附图及实施例对本专利技术做进一步地说明。本专利技术有许多成功的实施例,下面列举五个具体的实施例,但本专利技术要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。凝胶渗透色谱是测定重均分子量和数均分子量的常用方法,具体测定方法为:称取样品1.5mg,用流动相溶解并稀释制成浓度为3mg/mL的溶液,使用漩涡振荡仪振荡5s,用0.45μm的水相过滤膜过滤后,于常温下静置2-3h,作为样品溶液待测。测定的具体色谱条件为:TSK5000色谱柱;流动相为超纯水(超声20m本文档来自技高网...
一种淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制备方法

【技术保护点】
一种淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制备方法,其特征在于包括如下步骤:1)将淀粉用磷酸盐缓冲溶液配置成淀粉溶液,并调节pH值至5.8~7.8,置于密闭容器中,在95~99℃下搅拌糊化60~100min后,冷却至70~95℃,加入α‑淀粉酶,用量为每克干淀粉加入α‑淀粉酶1~8U,酶解1~8min,调节pH值至2.5~3.0,并保持10~15min灭酶活,得到淀粉酶解液;2)将步骤1)所得的淀粉酶解液在pH值为5.5~6.5,40~60℃条件下加入脱支酶,用量为每克干淀粉加入脱支酶2~10U,搅拌反应30~60min后,加热至90~100℃并保持10~15min;灭酶活,得到腹膜透析液粗酶解液;3)将步骤2)中腹膜透析液粗酶解液先用乙醇溶液醇沉,静置,离心分离后取其沉淀物,再用蒸馏水洗涤后离心分离,将分离所得的沉淀物干燥;4)将步骤3)得到的沉淀物用蒸馏水配成溶液,采用孔径10k‑20kD超滤膜超滤后,将分子量在10000~20000Da之间的样品经葡聚糖凝胶色谱柱分离提纯,得到不同组分的酶解液,测其重均和数均分子量,测定α‑1,6糖苷键的含量;筛选得到重均分子量为13000~19000Da,数量平均分子量为5000~6500Da,淀粉中α‑1,6糖苷键的摩尔比例低于10%的组分;5)将步骤4)中的最终酶解组分进行干燥,得到腹膜透析液用艾考糊精。...

【技术特征摘要】
1.一种淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制备方法,其特征在于包括如下步骤:1)将淀粉用磷酸盐缓冲溶液配置成淀粉溶液,并调节pH值至5.8~7.8,置于密闭容器中,在95~99℃下搅拌糊化60~100min后,冷却至70~95℃,加入α-淀粉酶,用量为每克干淀粉加入α-淀粉酶1~8U,酶解1~8min,调节pH值至2.5~3.0,并保持10~15min灭酶活,得到淀粉酶解液;2)将步骤1)所得的淀粉酶解液在pH值为5.5~6.5,40~60℃条件下加入脱支酶,用量为每克干淀粉加入脱支酶2~10U,搅拌反应30~60min后,加热至90~100℃并保持10~15min;灭酶活,得到腹膜透析液粗酶解液;3)将步骤2)中腹膜透析液粗酶解液先用乙醇溶液醇沉,静置,离心分离后取其沉淀物,再用蒸馏水洗涤后离心分离,将分离所得的沉淀物干燥;4)将步骤3)得到的沉淀物用蒸馏水配成溶液,采用孔径10k-20kD超滤膜超滤后,将分子量在10000~20000Da之间的样品经葡聚糖凝胶色谱柱分离提纯,得到不同组分的酶解液,测其重均和数均分子量,测定α-1,6糖苷键的含量;筛选得到重均分子量为13000~19000Da,数量平均分子量为5000~6500Da,淀粉中α-1,6糖苷键的摩尔比例低于10%的组分;5)将步骤4)中的最终酶解组分进行干燥,得到腹膜透析液用艾...

【专利技术属性】
技术研发人员:罗志刚王萍萍杨庆余
申请(专利权)人:华南理工大学
类型:发明
国别省市:广东,44

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