一种细胞制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及细胞制剂技术领域，特别涉及一种细胞制剂及其制备方法和应用。该细胞制剂包括间充质干细胞、骨形态发生蛋白‑2和生理盐水。本发明专利技术研究发现，将间充质干细胞和骨形态发生蛋白‑2联合使用后，可显著提高LVEF水平，并可显著降低BNP水平，效果好于单独使用间充质干细胞或骨形态发生蛋白‑2，有效率可达80％～90％。可见，本发明专利技术细胞制剂可有效治疗心衰。

Cell preparation, preparation method and application thereof

The invention relates to the technical field of cell preparation, in particular to a cell preparation, a preparation method and an application thereof. The cell preparations including mesenchymal stem cells, bone morphogenetic protein 2 and saline. The present study found that the mesenchymal stem cells and bone morphogenetic protein 2 combined use, can significantly improve the level of LVEF, and can decrease the levels of BNP, better than the separate use of mesenchymal stem cells and bone morphogenetic protein 2, efficiency up to 80% ~ 90%. It can be seen that the cell preparation of the invention can effectively treat heart failure.

【技术实现步骤摘要】
一种细胞制剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及细胞制剂
，特别涉及一种细胞制剂及其制备方法和应用。
技术介绍
心力衰竭(heartfailure)简称心衰，是指由于心脏的收缩功能和(或)舒张功能发生障碍，不能将静脉回心血量充分排出心脏，导致静脉系统血液淤积，动脉系统血液灌注不足，从而引起心脏循环障碍症候群，此种障碍症候群集中表现为肺淤血、腔静脉淤血。根据心力衰竭发生的缓急，临床可分为急性心力衰竭和慢性心力衰竭。急性心衰会引发急性肺水肿，起病急，病情可迅速发展至危重状态。突发的严重呼吸困难、端坐呼吸、喘息不止、烦躁不安并有恐惧感，呼吸频率可达30～50次/分；频繁咳嗽并咯出大量粉红色泡沫样痰；心率快，心尖部常可闻及奔马律；两肺满布湿啰音和哮鸣音。还会引发心源性休克，表现为低血压、组织低灌注状态、血流动力学障碍、代谢性酸中毒和低氧血症。急性心衰常危及生命，必须紧急抢救。目前的临床治疗主要采用药物治疗、介入治疗和外科治疗等手段：(1)初始治疗为经面罩或鼻导管吸氧；吗啡、袢利尿剂、强心剂等经静脉给予。使患者取坐位或半卧位，两腿下垂，减少下肢静脉回流。(2)病情仍不缓解者应根据收缩压和肺淤血状况选择应用血管活性药物，如正性肌力药、血管扩张药和血管收缩药等。(3)病情严重、血压持续降低(<90mmHg)甚至心源性休克者，应监测血流动力学，并采用主动脉内球囊反搏、机械通气支持、血液净化、心室机械辅助装置以及外科手术等各种非药物治疗方法。(4)动态测定BNP/NT-proBNP有助于指导急性心衰的治疗，治疗后其水平仍高居不下者，提示预后差，应加强治疗；治疗后其水平降低且降幅>30％，提示治疗有效，预后好。但这些治疗方法只能在一定程度上缓解心力衰竭的发生。干细胞是一类具有自我复制能力和分化能力的多潜能细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界将其称之为“万用细胞”。经过前人的研究发现，骨髓间充质干细胞在适宜的细胞因子作用下可以作为一种药物直接或者间接对受损的心肌细胞进行修复或者补充，目前已经成为心衰治疗的研究热点之一。因此，研发一种可有效治疗心衰的干细胞制剂成为必然趋势。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种细胞制剂及其制备方法和应用。该细胞制剂可有效治疗心衰。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种细胞制剂，包括间充质干细胞、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和生理盐水。骨形态发生蛋白-2(bonemorphogeneticprotein，BMP-2)作为BMP家族的一员，对心脏发育的诱导活性最高。研究表明，BMP可以调节多种细胞的生长、增殖和分化，并可以通过调节某些心肌转录因子的表达来参与心脏发育和形态形成的调节。本专利技术将BMP-2与间充质干细胞联合使用后，能够更好地发挥间充质干细胞的修复作用，从而可显著提高左心室射血分数(LVEF)水平，并可显著降低利钠肽(BNP)水平，效果好于单独使用间充质干细胞或BMP-2，有效率可达80％～90％。可见，本专利技术细胞制剂可有效治疗心衰。作为优选，细胞制剂中各组分用量为：间充质干细胞：(1～10)×106个/mL；骨形态发生蛋白-2：0.05～0.1μg/mL；生理盐水：补足。在本专利技术提供的实施例中，细胞制剂中各组分用量为：间充质干细胞：1×106个/mL；骨形态发生蛋白-2：0.05μg/mL；生理盐水：补足。在本专利技术提供的实施例中，细胞制剂中各组分用量为：间充质干细胞：5×106个/mL；骨形态发生蛋白-2：0.1μg/mL；生理盐水：补足。在本专利技术提供的实施例中，细胞制剂中各组分用量为：间充质干细胞：1×107个/mL；骨形态发生蛋白-2：0.1μg/mL；生理盐水：补足。在本专利技术提供的实施例中，间充质干细胞为骨髓间充质干细胞。作为优选，骨髓间充质干细胞为P3代骨髓间充质干细胞。本专利技术还提供了该细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：采用骨形态发生蛋白-2和间充质干细胞混合，采用生理盐水重悬，得到细胞制剂。在本专利技术中，间充质干细胞的制备方法为：取包含间充质干细胞的培养基，去除培养基，采用消化液进行消化，得到单细胞悬液；将单细胞悬液进行离心，洗涤，得到间充质干细胞。本专利技术还提供了该细胞制剂在制备提高LVEF水平或降低BNP水平药物中的应用。本专利技术还提供了该细胞制剂在制备治疗心衰药物中的应用。本专利技术还提供了一种药物，包括本专利技术提供的细胞制剂。该细胞制剂包括间充质干细胞、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和生理盐水。在本专利技术提供的实施例中，药物还包括药学上可接受的辅料。本专利技术提供了一种细胞制剂及其制备方法和应用。该细胞制剂包括间充质干细胞、骨形态发生蛋白-2和生理盐水。本专利技术具有如下有益效果：本专利技术研究发现，将间充质干细胞和骨形态发生蛋白-2联合使用后，可显著提高LVEF水平，并可显著降低BNP水平，效果好于单独使用间充质干细胞或骨形态发生蛋白-2，有效率可达80％～90％。可见，本专利技术细胞制剂可有效治疗心衰。具体实施方式本专利技术公开了一种细胞制剂及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术提供的细胞制剂及其制备方法和应用中所用生物材料均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1：人骨髓间充质干细胞的制备从正规购买渠道获得骨髓10mL，肝素抗凝后Percoll(1.073×10-3g/L)密度梯度离心，取中间单核细胞层以低糖DMEM洗涤2次，接种入75cm2培养瓶，以含10％FBS的低糖DMEM培养。24h后换液，弃未贴壁的细胞，剩余的贴壁细胞是MSCs。每2～3天换液，待细胞生长至90％汇合后0.25％胰蛋白酶消化传代。实施例2：细胞制剂的制备取实施例1获得的P3代骨髓间充质干细胞，吸去培养基，加入消化液进行消化，之后用适量血清终止消化，轻轻吹打成单细胞悬液。1500rpm，离心5min，弃上清，用4℃PBS洗涤细胞3次后重悬混匀，调整细胞浓度约为107个/mL。将配方量P3代骨髓间充质干细胞和BMP-2混合，用生理盐水重悬细胞。表1实施例2细胞制剂组成组分含量P3代骨髓间充质干细胞1×106个/mLBMP-20.05μg/mL生理盐水补足实施例3：细胞制剂的制备取实施例1获得的P3代骨髓间充质干细胞，吸去培养基，加入消化液进行消化，之后用适量血清终止消化，轻轻吹打成单细胞悬液。1500rpm，离心5min，弃上清，用4℃PBS洗涤细胞3次后重悬混匀，调整细胞浓度约为107个/mL。将配方量P3代骨髓间充质干细胞和BMP-2混合，用生理盐水重悬细胞。表2实施例3细胞制剂组成组分含量P3代骨髓间充质干细胞5×106个/mLBMP-20.1μg/mL生理盐水补足实施例4：细胞制剂的制备取实施例1获得的P3代骨髓间充质干细胞，吸去培养基，加入消化液进行消化，之后用适量血清终止消化，轻轻吹打成单细胞悬液。1500rpm，离心5mi本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞制剂，其特征在于，包括间充质干细胞、骨形态发生蛋白‑2和生理盐水。

【技术特征摘要】
1.一种细胞制剂，其特征在于，包括间充质干细胞、骨形态发生蛋白-2和生理盐水。2.根据权利要求1所述的细胞制剂，其特征在于，所述细胞制剂中各组分用量为：间充质干细胞：(1～10)×106个/mL；骨形态发生蛋白-2：0.05～0.1μg/mL；生理盐水：补足。3.根据权利要求1或2所述的细胞制剂，其特征在于，所述间充质干细胞为骨髓间充质干细胞。4.根据权利要求1至3中任一项所述的细胞制剂，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞为P3代骨髓间充质干细胞。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：葛啸虎，陈海佳，王一飞，赵萌萌，王小燕，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44