新生化颗粒定量指纹图谱检测方法及其指纹图谱技术

本发明专利技术公开了一种新生化颗粒定量指纹图谱检测方法及其指纹图谱，所述新生化颗粒定量指纹图谱检测方法，具体为，吸取新生化颗粒供试品溶液10µl，注入液相色谱仪，测定，记录50 min图谱，即得新生化颗粒指纹图谱；所述高效液相检测的条件为：采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.3%磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为：0～5min，流动相A为5%；5～45min，流动相A从5%升至45%；45～50min，流动相A从45%升至70%。根据上述HPLC检测结果，确定新生化颗粒成分和含量。本发明专利技术检测方法测得的图谱能较全面的反映新生化颗粒中的化学成分，且各色谱峰分离较好，基线平稳，峰型好，重复性较好，该方法具有良好的线性关系、精密度、稳定性、回收率，能够准确检测新生化颗粒的成分含量，获得的对照指纹图谱能够客观评新生化颗粒估样品的质量。

Quantitative fingerprint of biochemical granules and its fingerprint

The invention discloses a Xinshenghua granule quantitative fingerprint detection method and fingerprint, the Xinshenghua granule quantitative fingerprint detection methods, specifically, from Xinshenghua granule testsolution 10 L injection, HPLC, determination, record 50 min map, the fingerprint of Xinshenghua granule the high performance liquid chromatography; testing conditions: C18 column using acetonitrile as mobile phase A, with 0.3% phosphoric acid as mobile phase B, gradient elution procedure: 0 ~ 5min, the mobile phase A was 5% ~ 45min; 5, A from 5% to 45% mobile phase; 45 ~ 50min, the mobile phase A from 45% to 70%. According to the above HPLC test results, the composition and content of the new biochemical granules were determined. The detection method of measured map can reflect the chemical composition in Xinshenghua granules, and the separation of each chromatographic peak is better, the smooth baseline peak, good repeatability, the method has good linearity, precision, stability and recovery rate, can accurately detect new biochemical component content of particles quality control, fingerprint acquisition can objectively estimate Xinshenghua granule samples.

【技术实现步骤摘要】
新生化颗粒定量指纹图谱检测方法及其指纹图谱
本专利技术涉及分析化学领域，特别涉及一种新生化颗粒定量指纹图谱检测方法及其指纹图谱。
技术介绍
生化汤首见于《傅青主女科》产后篇，是傅氏治疗产后诸证之主方。傅氏认为“产后危急诸证，当频服生化汤，随证加减”；傅氏又曰：“此方治产后危急诸证可通用，一昼一夜必须服三四剂，若照常症服，岂能接将绝之气血，扶危急之变症耶；“凡儿生下，或停血不下，半月外尚痛，或外加肿毒高寸许，或身热、减饮食，倦甚必用生化汤加三棱、莪术、肉桂等攻补兼治，其块自消”；“惟生化汤系血块圣药也”。以上指出生化汤可治产后诸证。凡病起于气血之衰，脾胃之虚。在分娩时造成的产伤及出血引起亡血伤津，同时产后恶露未尽易出现淤血内阻，或户后胞室正开外冷易乘之，则血道涩滞，故产后易出现虚中挟淤的一些疾病，如产后少腹痛、恶露不绝、恶露不下等。另外根据妇女以血为用的特点，只有血液充盈、血流通畅，其月经、胎孕、哺乳等生理功能始能正常，一旦由于各种因素造成血流滞涩，则可成为淤血，而发生诸病，如癓瘕、崩漏等。而生化汤为行中有补，化中有生，破而不伤正，补而不滞邪，是活血化瘀、养血益气之方剂，故而除可治疗产后诸证外，还可用于妇科一些淤血证。新生化颗粒组方来源于生化汤，是国家药品监督管理局批准的中药制剂，执行标准为国家食品药品监督管理局标准YBZ15532006，处方标准为中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第五册及国家食品药品监督管理局标准YBZ15532006。此外，中药制剂的质量管理问题也受到了人们的广泛关注，其质量的优劣会直接影响到医疗质量和患者生命安危。因此，为了更好地对药品质量进行控制，保证其临床疗效，需建立全面评价该制剂质量的方法。目前关于新生化颗粒的质量控制方法尚无明确报道，因此提供一种新生化颗粒的质量控制方法具有重要的现实意义，以指纹图谱作为中药(天然药物)提取物及其制剂的质量控制方法，已成为目前国际共识。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新生化颗粒定量指纹图谱检测方法，本专利技术的另一目的在于提供一种新生化颗粒定量指纹图谱。本专利技术提供的方案能够准确检测新生化颗粒的成分含量，本专利技术获得的指纹图谱能够客观评估中药制剂的质量。本专利技术是通过以下技术方案实现的：新生化颗粒定量指纹图谱检测方法，包括如下步骤：对照品溶液的制备：称取绿原酸对照品、丁香酸对照品、阿魏酸对照品、甘草苷对照品、甘草酸铵对照品、羟基红花黄色素A对照品，用70％甲醇提取，制成每1ml含绿原酸8μg、丁香酸14μg、阿魏酸16μg、甘草苷14μg、甘草酸36μg、羟基红花黄色素A18μg的混合对照品溶液，所述甘草酸重量以甘草酸铵重量/1.0207计；供试品溶液的制备：取新生化颗粒，混匀，研细，用70％甲醇提取，制成每1ml溶液含新生化颗粒0.1g的供试品溶液；色谱条件：采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.3％磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为：0～5min，流动相A为5％；5～45min，流动相A从5％升至45％；45～50min，流动相A从45％升至70％；检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录50min图谱，即得对照品与供试品的指纹图谱；经中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算得出新生化颗粒定量指纹图谱。本专利技术的进一步改进方案为：所述对照品与供试品提取方法为超声提取，超声条件设定为250W，40KHz，超声时间为30min。所述高效液相检测波长为270nm，检测波长为270nm能较全面的反映新生化颗粒中化学成分，且各色谱峰分离较好；结合绿原酸、丁香酸、阿魏酸、甘草苷、甘草酸和羟基红花黄色素A的紫外吸收曲线，含量测定波长选择为甘草苷、甘草酸铵327nm，丁香酸270nm，绿原酸、阿魏酸和羟基红花黄色素A321nm，波长选择图谱见附图1。所述高效液相检测柱温为30℃。所述高效液相检测流速为1ml/min。所述C18色谱柱为KromasilC18色谱柱，柱长为250mm,内径为4.6mm，粒径为3.5μm。本专利技术的更进一步改进方案为：新生化颗粒的定量指纹图谱，所述指纹图谱共有峰包括和绿原酸对应的7号峰、和丁香酸对应的S号峰、和甘草苷对应的19号峰、和阿魏酸对应的20号峰、和甘草酸对应的26号峰，其相对保留时间分别为0.83、1.00、1.24、1.28、2.15。所述所述指纹图谱共有峰还包括相对保留时间为0.32的1号峰、相对保留时间为0.36的2号峰、相对保留时间为0.53的3号峰、相对保留时间为0.63的4号峰、相对保留时间为0.68的5号峰、相对保留时间为0.78的6号峰、相对保留时间为0.91的8号峰、相对保留时间为0.96的9号峰、相对保留时间为1.02的11号峰、相对保留时间为1.04的12号峰、相对保留时间为1.10的13号峰、相对保留时间为1.14的14号峰、相对保留时间为1.15的15号峰、相对保留时间为1.17的16号峰、相对保留时间为1.18的17号峰、相对保留时间为1.21的18号峰、相对保留时间为1.49的21号峰、相对保留时间为1.51的22号峰、相对保留时间为1.56的23号峰、相对保留时间为1.63的24号峰、相对保留时间为1.70的25号峰。采用上述指纹图谱对样品检测，合格产品的标准为：新生化颗粒指纹图谱与对照指纹图谱经相似度软件计算，相似度不得低于0.90。根据新生化颗粒含量测定结果，规定本品每克含绿原酸不得少于0.060mg，含丁香酸不得少于0.12mg，含阿魏酸不得少于0.22mg，含甘草苷不得少于0.12mg，含甘草酸不得少于0.30mg，含羟基红花黄色素A不得少0.15mg。本专利技术的有益效果为：本专利技术检测方法测得的图谱能较全面的反映新生化颗粒中的化学成分，且各色谱峰分离较好，基线平稳，峰型好，重复性较好，该方法具有良好的线性关系、精密度、稳定性、回收率，能够准确检测新生化颗粒的成分含量，获得的对照指纹图谱能够客观评新生化颗粒估样品的质量。附图说明图1为不同检测波长下新生化颗粒指纹图谱；图2为新生化颗粒对照指纹图谱，其中7-绿原酸，S-丁香酸，19-甘草苷，20-阿魏酸，26-甘草酸。具体实施方式1、仪器与试药Agilent1200液相色谱仪，DAD紫外检测器，MWD紫外检测器；KQ5200DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；MettlerAE240电子分析天平、MettlerXP-6电子分析天平(梅特勒公司)；H1650-W台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)；Milli-QAcademic纯水机(密理博公司)。绿原酸对照品(批号：110753-201314)、羟基红花黄色素A对照品(批号111637-201308)、甘草苷对照品(批号111610-201106)、甘草酸铵对照品(批号110731-2014718)和阿魏酸对照品(批号：110773-201313)，均购自中国食品药品检定研究院；丁香酸对照品(批号：MUST-15052013)，均购自成都曼斯特生物技术有限公司；乙腈为色谱纯，美国天地公司；甲醇、乙醇和磷酸均为分析纯，南京化学试剂公司；超纯水。2、药品来源本专利技术研究用新生化颗粒由江苏仁寿药业有限公司生产。所述的新生化颗粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
新生化颗粒剂定量指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：对照品溶液的制备：称取绿原酸对照品、丁香酸对照品、阿魏酸对照品、甘草苷对照品、甘草酸铵对照品、羟基红花黄色素A对照品，用70%甲醇提取，制成每1 ml含绿原酸8 μg、丁香酸14 μg、阿魏酸 16 μg、甘草苷14 μg、甘草酸36 μg、羟基红花黄色素A18 μg的混合对照品溶液，所述甘草酸重量以甘草酸铵重量/1.0207计；供试品溶液的制备：取新生化颗粒，研细，用70%甲醇提取，制成每1ml溶液含新生化颗粒0.1g的供试品溶液；色谱条件：采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.3%磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为：0～5min，流动相A为5%；5～45min，流动相A从5%升至45%；45～50min，流动相A从45%升至70%；检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，记录50 min图谱，即得对照品与供试品的指纹图谱；经中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算得出新生化颗粒定量指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.新生化颗粒剂定量指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：对照品溶液的制备：称取绿原酸对照品、丁香酸对照品、阿魏酸对照品、甘草苷对照品、甘草酸铵对照品、羟基红花黄色素A对照品，用70%甲醇提取，制成每1ml含绿原酸8μg、丁香酸14μg、阿魏酸16μg、甘草苷14μg、甘草酸36μg、羟基红花黄色素A18μg的混合对照品溶液，所述甘草酸重量以甘草酸铵重量/1.0207计；供试品溶液的制备：取新生化颗粒，研细，用70%甲醇提取，制成每1ml溶液含新生化颗粒0.1g的供试品溶液；色谱条件：采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.3%磷酸为流动相B，梯度洗脱程序为：0～5min，流动相A为5%；5～45min，流动相A从5%升至45%；45～50min，流动相A从45%升至70%；检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，记录50min图谱，即得对照品与供试品的指纹图谱；经中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算得出新生化颗粒定量指纹图谱。2.根据权利要求1所述的新生化颗粒成分定量检测方法，其特征在于，所述对照品与供试品提取方法为超声提取，超声条件设定为250W，40KHz，超声时间为30min。3.根据权利要求1所述的新生化颗粒成分定量检测方法，其特征在于，检测波长为270nm。4.根据权利要求1所述的新生化颗粒成分定量检测方法，其特征在于，检测柱温为30℃。5.根据权利要求1所述的新生化颗粒成分定...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴建雄，孙大正，展金祥，刘盼盼，刘莉玲，
申请(专利权)人：江苏仁寿药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32