临床治疗用间充质干细胞及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了临床治疗用间充质干细胞及其制备方法和用途，其中该方法包括：(1)将多个含有间充质干细胞的组织块在第一培养皿中进行培养，以便获得从所述多个组织块中爬出的间充质干细胞，并且从所述多个含有间充质干细胞的组织块中选择优化组织块；(2)将步骤(1)中所获得的优化组织块在第二培养皿中进行培养，以便获得从所述优化组织块爬出的间充质干细胞，其中，在步骤(1)中选择优化组织块的条件包括下列至少之一：(a)无内皮细胞爬出；(b)有间充质干细胞爬出；(c)间充质干细胞最快爬出。该方法对脐带组织的利用率高，细胞的产率大大提高，并且得到的间充质干细胞纯度高，活性好，能够满足临床应用的要求。

【技术实现步骤摘要】
临床治疗用间充质干细胞及其制备方法和用途
本专利技术涉及生物工程领域，具体地，涉及细胞的制备方法，更具体地，涉及临床治疗用间充质干细胞及其制备方法和用途。
技术介绍
间充质干细胞(Mesenchymalstemcells,MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层，属于多能干细胞，广泛分布于动物体内骨髓、肝脏、脂肪等多种组织中。MSCs具有强大的自我更新能力和多向分化潜能，在连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，是移植领域应用前景广阔的再生来源细胞。同时，MSCs易于纯化分离，无免疫原性，且没有伦理问题，使得关于它的基础研究及其临床应用蓬勃发展。人脐带间充质干细胞(HUMSCs)，是在脐带中在动静脉之间的特殊胚胎粘液样结缔组织华尔通氏胶(WhartonpsJelly)分离得到的基质细胞。人脐带间充质干细胞在细胞含量、增殖能力方面要优于骨髓MSCs，且免疫原性比骨髓MSCs低，并且具有取材方便，对产妇及新生儿没有任何的损害，不会有肿瘤细胞，病毒和病原微生物的感染及传播几率也相对较低，无伦理学争议等优点，因此，越来越受到研究工作者们的关注。然而，脐带间充质干细胞的临床应用还有待进一步开发。目前，通常采用酶消化法或者是植块法从脐带组织中获取MSCs，酶消化法在酶的选择和消化时间上没有统一的标准，多使用胶原酶，使动物组织细胞间的胶原纤维和胞外蛋白酶解，从而获得单个细胞。但胶原酶消化过度会导致细胞表面一些生活物质的改变进而影响细胞活力，对细胞具有损伤作用。对酶消化脐带组织的时间有一定的要求，且待消化的脐带组织又不是一个完全均一的体系，很难保证所有细胞消化程度的统一性，因此很难把握最佳的消化时间，会影响所得细胞的数量和质量，进而影响以后的研究及使用。另由于现有胶原酶来源于动物内脏，应用酶消化法在分离培养时，存在动物源蛋白和动物源病原物的污染，增加了临床应用干细胞的风险。与胶原酶法相比，植块法可避免上述问题,组织损伤小，脐带组织利用率高，易获得存活较好的细胞。由于迁出细胞未受到损害，且在早期有组织块分泌的营养物质支持，因此较易存活。而现有的植块法虽然操作简单，但是通过机械操作形成的组织块质量参差不齐，贴壁能力也不尽相同，这样会大大影响培养周期；且经常会有内皮细胞的残留，影响原代细胞的质量和纯度；同时对P0代细胞进行传代后，原代组织块完全丢弃，细胞的得率受到很大的制约。更重要的是，以上操作对脐带组织的利用率非常低，且是一个极大的浪费。因此，间充质干细胞的制备方法有待进一步改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种脐带组织利用率高、细胞得率高、且活性好、纯度高的临床治疗用间充质干细胞，同时提出了该间充质干细胞在制备药物中的用途。因而，根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种制备临床治疗用间充质干细胞的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括：(1)将多个含有间充质干细胞的组织块在第一培养皿中进行培养，以便获得从所述多个组织块中爬出的间充质干细胞，并且从所述多个含有间充质干细胞的组织块中选择优化组织块；以及(2)将步骤(1)中所获得的优化组织块在第二培养皿中进行培养，以便获得从所述优化组织块爬出的间充质干细胞，其中，在步骤(1)中选择优化组织块的条件包括下列至少之一：(a)无内皮细胞爬出；(b)有间充质干细胞爬出；(c)间充质干细胞最快爬出。专利技术人惊奇的发现，与已经报道的间充质干细胞制备方法相比，本专利技术的临床级脐带间充质干细胞制备方法：对脐带组织的利用率高，尤其，细胞的产率大大提高，能够进一步满足临床应用量大的需求；并且制备得到的临床治疗用间充质干细胞纯度高，细胞状态好，活性高，分化能力强，能够满足临床应用的功能性质量要求。另外，根据本专利技术上述实施例的制备临床治疗用间充质干细胞的方法，还可以具有如下附加的技术特征：根据本专利技术的实施例，所述含有间充质干细胞的组织块来源于脐带组织。根据本专利技术的另一些实施例，所述含有间充质干细胞的组织块是通过下列步骤获得的：剔除脐带组织的脐动脉和脐静脉；以及从所述脐带组织中分离华尔通氏胶，其中，所述华尔通氏胶构成所述含有间充质干细胞的组织块。由此，得到的脐带组织的间充质干细胞组织的纯度高，内皮细胞含量少。根据本专利技术的实施例，在步骤(2)之后，进一步包括：(3)将所述优化组织块在第三培养皿中进行培养，5-7天后可获得从所述优化组织块爬出的P0代间充质干细胞。由此，该可以获得较多P0代间充质干细胞，对脐带组织的利用率高。根据本专利技术的实施例，重复步骤(3)至少一次，优选2～5次。由此，通过重复培养，实现了优化组织块的多次利用，可以获得大量的原代(即P0代)间充质干细胞，对脐带组织的利用率显著提高。根据本专利技术的实施例，收集步骤(1)～(3)中所获得的P0代间充质干细胞进行传代培养。由此可以获得大量的P3-P5代的间充质干细胞，从而能够同时满足临床治疗用间充质干细胞对细胞代数和数量的要求。根据本专利技术的实施例，所述传代培养采用无血清培养基。根据本专利技术的一些具体示例，所述传代培养采用无血清培养基(Sciencell)，无任何动物源蛋白和动物源病原物的污染。由此，细胞增殖速度快，活性高。根据本专利技术的实施例，将所述P0代间充质干细胞进行传代培养，所述传代的时间间隔为2-4天，并且将所得到的P3～P5代间充质干细胞作为临床治疗用间充质干细胞。由此，通过细胞的传代可快速获得临床级别数量的低代数间充质干细胞。根据本专利技术的实施例，在步骤(1)～(3)中采用无血清培养基对所述组织块进行培养。根据本专利技术的一些具体示例，所述培养基为无血清培养基(Sciencell)，无任何动物源蛋白和动物源病原物的污染。由此，从组织块爬出的间充质干细胞状态好，增殖能力强，活力高。根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供了一种间充质干细胞。所述间充质干细胞是通过前面所述的制备临床治疗用间充质干细胞的方法获得的。专利技术人惊奇的发现，与已经报道的临床级脐带间充质干细胞制备方法相比：利用本专利技术的方法制备获得的临床治疗用间充质干细胞纯度高，细胞状态好，活性高，分化能力强，干细胞指标好，具有很高的临床应用价值。根据本专利技术的第三方面，本专利技术提供了前面所述的间充质干细胞在制备药物中的用途，所述药物用于治疗组织损伤。专利技术人惊奇的发现，利用前面所述的本专利技术的方法制备的临床治疗用间充质干细胞，细胞纯度高，活性好，分化能力强，干细胞指标好，能够有效用于制备用于治疗组织损伤的药物，且对组织损伤治疗效果突出。根据本专利技术的第四方面，本专利技术提供了前面所述的间充质干细胞在制备药物中的用途，所述药物用于治疗阿尔茨海默病。专利技术人惊奇的发现，利用前面所述的本专利技术的方法制备的临床治疗用间充质干细胞，细胞纯度高，活性好，分化能力强，干细胞指标好，能够有效用于制备治疗阿尔茨海默病的药物，该药物对于阿尔茨海默病病理的各指标均有很大程度的改善。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备临床治疗用间充质干细胞的方法，其特征在于，包括：(1)将多个含有间充质干细胞的组织块在第一培养皿中进行培养，以便获得从所述多个组织块中爬出的间充质干细胞，并且从所述多个含有间充质干细胞的组织块中选择优化组织块；以及(2)将步骤(1)中所获得的优化组织块在第二培养皿中进行培养，以便获得从所述优化组织块爬出的间充质干细胞，其中，在步骤(1)中选择优化组织块的条件包括下列至少之一：(a)无内皮细胞爬出；(b)有间充质干细胞爬出；(c)间充质干细胞最快爬出。

【技术特征摘要】
1.一种制备临床治疗用间充质干细胞的方法，其特征在于，包括：(1)将多个含有间充质干细胞的组织块在第一培养皿中进行培养，以便获得从所述多个组织块中爬出的间充质干细胞，并且从所述多个含有间充质干细胞的组织块中选择优化组织块；以及(2)将步骤(1)中所获得的优化组织块在第二培养皿中进行培养，以便获得从所述优化组织块爬出的间充质干细胞，其中，在步骤(1)中选择优化组织块的条件包括下列至少之一：(a)无内皮细胞爬出；(b)有间充质干细胞爬出；(c)间充质干细胞最快爬出。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有间充质干细胞的组织块来源于脐带组织。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述含有间充质干细胞的组织块是通过下列步骤获得的：剔除脐带组织的脐动脉和脐静脉；以及从所述脐带组织中分离华尔通氏胶，其中，所述华尔通氏胶构成所述含有间充质干细胞的组织块。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)之后，进一步包括：(3)将所述优化组织块在第三培养皿中进行培养，5-7天后可获得从所述优化组织块爬出的P...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴雪涛，岳文，贾雅丽，
申请(专利权)人：华南生物医药研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44