植物组织培养时的新类型外植体及其灭菌方法技术

本发明专利技术公开了一种植物组织培养时的新类型外植体，以植物生长季的嫩梢为外植体。所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条。本发明专利技术还公开了一种嫩梢外植体的灭菌方法，先利用大蒜配置的灭菌水溶液；再将嫩梢浸入溶液中灭菌。本发明专利技术以生长季的嫩梢作为外植体进行组织培养，拓展了植物组织培养外植体的使用范围；拓展了自然条件下外植体的接种时间；与传统的叶芽和茎段组织培养相比，生长季的嫩梢结合大蒜水溶液灭菌，缩短了组织培养的时间，降低了组织培养的成本，操作更加简单。

A new type of explant in plant tissue culture and its sterilization method

The present invention discloses a new type explant for plant tissue culture, taking the tender tip of plant growing season as explant. The tender shoot is a new shoot or branch of the plant growing season, which is 5 to 10cm long from the top of the plant stem. The invention also discloses a sterilization method for the tender tip explant, which uses the sterilized water solution configured by garlic first, and then shoots the tender tip into the solution to sterilize. The growing season shoots as explants for tissue culture, expand the scope of the use of plant tissue culture of explants; expand the natural conditions under the inoculation time of explants; compared with the traditional leaf and stem tissue culture, shoot growth season with garlic aqueous solution sterilization, shorten the tissue culture the time, reduce the cost of tissue culture, the operation is more simple.

【技术实现步骤摘要】
植物组织培养时的新类型外植体及其灭菌方法
本专利技术涉及植物组织培养
，更具体地说，涉及植物组织培养过程中外植体的选择。
技术介绍
能被诱发产生无性增殖系的器官或组织切段称作外植体。目前科学研究和生产实践中所使用的外植体有叶芽、着生叶芽的茎段、根段、叶片、原生质体、胚、胚乳、花药、子房等。植物外植体的选择，需要根据生长季、植物恰当局部位置的选择进行。现有技术中，本领域技术人员大多选用休眠期的枝条作为外植体，而不选用生长季的新梢。因为现有技术的灭菌溶剂对植物嫩梢损害较大，嫩梢无法存活。因此本领域技术人员不会选用嫩梢做外植体。此处，所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条，因此作为新梢前端的部分的嫩梢，如果需要用作外植体，需要选择温和的灭菌溶剂。
技术实现思路
本专利技术以生长季的嫩梢为外植体，经过适宜的灭菌剂处理，用于植物的组织培养。为此本专利技术提供了一种适合本专利技术的外植体——植物嫩梢灭菌的溶液，植物嫩梢经过适宜的灭菌剂的处理后，可以正常地生长发育，实现持续繁殖，能够满足植物组织培养的需要，实现植物组织培养的目的。本专利技术扩大外植体的使用范围，增加外植体的种类；延长自然条件下外植体的接种时间，提高植物组织培养的效率和成功率；降低植物组织培养的成本；使植物组织培养的操作进一步简化。为了达到上述目的，本专利技术提供一种植物组织培养时的新类型外植体，以植物生长季的嫩梢为外植体。此处，所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条；优选为2～3cm长的一段新梢或枝条。植物嫩梢，由于抗外界环境干扰的能力较差，现有技术的灭菌溶液对其伤害较大，因此限制了嫩梢作为外植体使用的可能。为此，本专利技术提供了一种新型的灭菌溶液，并提供了一种灭菌方法，包括如下步骤：1、利用大蒜配置的灭菌水溶液；2、将嫩梢浸入溶液中灭菌。步骤1中的溶液配置方法多样，如大蒜烘干、粉碎、添水配置的方法，再比如大蒜切碎、水中浸泡的方法。本专利技术提供的一种优选方式：以去皮大蒜捣成泥，与无菌单蒸水按重量体积比配置成1～9:1的溶液。本专利技术经过研究发现，处于生长期的植物嫩梢经过适宜的灭菌剂的处理，也可以作为植物组织培养的外植体。生长季的嫩梢正处于旺盛的生长发育阶段，如果能克服此期取材容易污染的问题，就可以作为外植体进行组织培养。本专利技术拓展了植物组织培养外植体的使用范围；拓展了自然条件下外植体的接种时间；与传统的叶芽和茎段组织培养相比，生长季的嫩梢结合大蒜水溶液灭菌，缩短了组织培养的时间，降低了组织培养的成本，操作更加简单。具体优点如下：1.采用生长季茎上最前端2～3cm长的嫩梢作为外植体，用1：1（W/V）大蒜水溶液（大蒜：无菌单蒸水为1：1，去皮大蒜捣成浆加无菌单蒸水搅拌2min，然后室温下放置30min后，备用）浸泡30min进行灭菌处理。2.拓展了植物组织培养外植体的使用范围，将生长季的嫩梢作为一种外植体，付诸使用，并获得成功。3.拓展了自然条件下外植体的接种时间，使以往生长季，尤其是夏季难以灭菌的困难得到克服。4.与传统的叶芽和茎段组织培养相比，生长季的嫩梢结合大蒜水溶液灭菌，缩短了组织培养的时间（因为所取得嫩梢在田间已经进行了一段时间的生长），组织培养的成本降低（缩短了培养时间、灭菌成本降低），操作更加简单（可以将准备灭菌的外植体直接浸泡在大蒜水溶液中，而不需要其它前处理，如用水冲洗、去鳞片等）。具体实施方式本专利技术在生长季取植物的嫩梢，将其浸入到大蒜水溶液中灭菌，接种到适宜的培养基上进行培养，一段时间以后观察、统计和分析嫩梢的无菌情况、生长发育情况等。植物嫩梢，由于抗外界环境干扰的能力较差，现有技术的灭菌溶液对其伤害较大，因此限制了嫩梢作为外植体使用的可能。为此，本专利技术提供了一种新型的灭菌溶液——利用大蒜配置的水溶液。具体以去皮大蒜捣成泥，与无菌单蒸水按重量体积比配置成1～9:1的溶液。该灭菌溶液温和，适用于植物嫩梢作为外植体的灭菌。此处，所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条。具体工艺过程如下：1.在生长季取甜樱桃、桃、月季的新梢。2.将新梢浸入到1：1（W/V）大蒜水溶液（大蒜：无菌单蒸水为1：1，去皮大蒜捣成浆加无菌单蒸水搅拌2min，然后室温下放置30min后，备用）浸泡30min，取出后用无菌单蒸水冲洗3次，最后用无菌滤纸吸干水分。3.接种到适宜的初代培养基（培养基配方为：MS+6-BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH5.8）上进行培养。4.观察并统计叶芽的萌芽率、嫩梢的平均无菌率（灭菌率可达100%）。5.在初代培养的基础上，继续进行继代培养、生根培养以及驯化移栽等。嫩梢作为外植体，由于抗外界环境干扰的能力较差，因此，现有技术的灭菌溶液对其伤害较大，因此限制了嫩梢作为外植体使用的可能。为此，本专利技术提供了一种新型的灭菌溶液——利用大蒜配置的水溶液，不伤害外植体。具体以去皮大蒜捣成泥，与无菌单蒸水按重量体积比配置成1～9:1的溶液。该灭菌溶液温和，适用于植物嫩梢作为外植体的灭菌。此处，所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条。以上所述，仅为本专利技术较佳的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术披露的技术范围内，根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物组织培养时外植体的灭菌方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、利用大蒜配置的灭菌水溶液；S2、将嫩梢浸入溶液中灭菌；步骤S1的具体方法为：去皮大蒜捣成泥，与无菌单蒸水按重量体积比配制成1～9:1的溶液；步骤S2所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条。

【技术特征摘要】
1.一种植物组织培养时外植体的灭菌方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、利用大蒜配置的灭菌水溶液；S2、将嫩梢浸入溶液中灭菌；步骤S1的具体方...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯义龙，于亚军，张立娟，倪天泽，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21