The invention relates to the immunoassay field, particularly relates to a method for detection of interleukin 6 kit and non diagnostic detection of interleukin 6. The kit comprises a biotinylated antibody, enzyme labeled antibody, chemiluminescence substrate and avidin conjugated superparamagnetic particles; biotinylated antibody product of biotin N hydroxy two imide ester and anti interleukin 6 monoclonal antibody A coupling products; enzyme labeled antibody enzyme and anti white interleukin 6 monoclonal antibody coupled B. The kit provided by the invention has the advantages of high sensitivity, good specificity, short detection time, simple detection process, and convenient for automatic detection instruments.
【技术实现步骤摘要】
一种检测白细胞介素-6的试剂盒以及非诊断目的检测白细胞介素-6的方法
本专利技术涉及免疫分析领域,特别涉及一种检测白细胞介素-6的试剂盒以及非诊断目的检测白细胞介素-6的方法。
技术介绍
白细胞介素-6(IL-6)是细胞因子的核心成员,1980被发现,1986年被统一命名为IL-6,相对分子量为Mr26000,它是由212个氨基酸组成的多功能糖蛋白,主要由单核-巨噬细胞、T淋巴细胞和纤维母细胞合成,可以促进肝脏合成急性期蛋白,激活T淋巴细胞,并诱导B淋巴细胞的终末期分化,使之成为具有分泌免疫球蛋白的免疫活性细胞。IL-6所具有的多种生物学功能,在抗感染、肿瘤、免疫性疾病及免疫调节等诸多方面发挥重要作用。在异常情况下,IL-6的升高可能对机体产生不利影响,造成组织损害和加重病情发展。随着医学研究的不断深入,IL-6在临床诊断上的重要性日益增加。目前IL-6在临床诊断上的应用主要有以下方面:1、炎症反应感染、创伤、大手术等因素可诱发全身炎症反应综合征(SIRS),严重时可发展为多器官功能障碍综合征(MODS),甚至死亡。IL-6是一种重要的促炎细胞因子,异常释放会导致机体多器官细胞代谢障碍和功能损害。国内有学者报道,重度多发性创伤患者从受伤当日至出院前血中IL-6明显升高。Miyaoka等发现,在正颌外科手术后继发SIRS患者的IL-6浓度明显高于未继发SIRS的患者,IL-6是SIRS患者预后的一个预测因素。也有研究发现,SIRS患者第1天血清IL-6浓度明显升高,并且在发生MODS患者中明显高于未发生MODS患者,在死亡患者中明显高于存活者,说明IL-6浓 ...
【技术保护点】
一种检测IL‑6的试剂盒,其特征在于,包括生物素化抗体工作液、酶标记抗体工作液、化学发光底物液和亲和素偶联的超顺磁微粒工作液;所述生物素化抗体为生物素N羟基丁二酰亚胺酯与抗IL‑6单克隆抗体A偶联的产物;所述酶标记抗体为酶与抗IL‑6单克隆抗体B偶联的产物;所述亲和素偶联的超顺磁微粒工作液由含0.2%酪蛋白和0.02%TW‑20的50mM PBS的溶液将亲和素偶联的超顺磁微粒稀释至0.25mg/mL获得;所述生物素化抗体工作液由含1%BSA的50mM PBS溶液将所述生物素化抗体稀释至2μg/mL获得;所述酶标记抗体工作液由含1%BSA和0.05%TW‑20的50mM PBS溶液将所述酶标记抗体稀释至0.5μg/mL获得;所述化学发光底物液、所述亲和素偶联的超顺磁微粒工作液、所述生物素化抗体工作液以及所述酶标记抗体工作液的体积用量比为100μL:50μL:50μL:50μL;所述亲和素偶联的超顺磁微粒由如下方法制备得到:取表面活性基团为羧基基团的直径为500nm~5μm的超顺磁微粒10mg,置于磁分离器上2min,弃去上清液;加入0.05mol/mL PBS缓冲液4mL,吹打均匀,置于 ...
【技术特征摘要】
1.一种检测IL-6的试剂盒,其特征在于,包括生物素化抗体工作液、酶标记抗体工作液、化学发光底物液和亲和素偶联的超顺磁微粒工作液;所述生物素化抗体为生物素N羟基丁二酰亚胺酯与抗IL-6单克隆抗体A偶联的产物;所述酶标记抗体为酶与抗IL-6单克隆抗体B偶联的产物;所述亲和素偶联的超顺磁微粒工作液由含0.2%酪蛋白和0.02%TW-20的50mMPBS的溶液将亲和素偶联的超顺磁微粒稀释至0.25mg/mL获得;所述生物素化抗体工作液由含1%BSA的50mMPBS溶液将所述生物素化抗体稀释至2μg/mL获得;所述酶标记抗体工作液由含1%BSA和0.05%TW-20的50mMPBS溶液将所述酶标记抗体稀释至0.5μg/mL获得;所述化学发光底物液、所述亲和素偶联的超顺磁微粒工作液、所述生物素化抗体工作液以及所述酶标记抗体工作液的体积用量比为100μL:50μL:50μL:50μL;所述亲和素偶联的超顺磁微粒由如下方法制备得到:取表面活性基团为羧基基团的直径为500nm~5μm的超顺磁微粒10mg,置于磁分离器上2min,弃去上清液;加入0.05mol/mLPBS缓冲液4mL,吹打均匀,置于磁分离器上分离2min,弃去上清液,重复洗涤2次;清洗完毕后,加入50mg/mLpH7.0的EDC溶液1200μL活化超顺磁微粒,吹打均匀后,置于振荡器上,反应1h,获得活化后的超顺磁性微粒;然后加入亲和素为链霉亲和素蛋白进行偶联,具体操作为:链霉亲和素用10mmolPBS缓冲液溶解,向活化后的超顺磁性微粒中加入5mg/mL链霉亲和素溶液1500μL,置于振荡器上反应3~6h;偶联完成后,加入1%BSA3mL封闭磁微粒表面的剩余的羧基基团,混匀后,置于振荡器上反应30min;加入0.1mol/mLPBST缓冲液5mL,混合均匀,置于磁分离器上分离,弃去上清液,重复洗涤3次;最后加入含有0.5%BSA的0.1mol/mLPBS的保存液复溶,获得亲和素偶联的超顺磁微粒,亲和素偶联的超顺磁微粒的浓度为0.5~2mg/mL;所述生物素化抗体由如下制备方法得到:取生物素、N-羟基丁二酰亚胺和二环己基碳二亚胺各1mmol,一并加入二甲...
【专利技术属性】
技术研发人员:陆春,陈明峰,郑筱雯,
申请(专利权)人:深圳市国赛生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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