A method of making a bacterial imprinted polymer film for bacterial screening is disclosed. First, the initiator is grafted on the surface of the base material to form a self-assembled monolayer, and then the template bacteria are immobilized on the surface of the substrate. Then, different polymer monomers are added into the system, and the monomer forms an assembly layer on the outer surface of the bacteria by electrostatic force. Subsequently, the catalysts and ligands were added to initiate atom transfer radical polymerization to achieve covalent binding between the polymer monolayer assembly on the bacterial surface and the surface initiated polymer layer. Finally, removal of template bacteria, formation of imprinted bacteria, physical morphology, and chemical information of bacterial recognition polymer films. The bacterial identification process of the polymer film can effectively control the growth thickness of the film and mark the chemical information of the surface of the bacteria. The bacterial identification polymer film prepared by the method has good compatibility with other detection platform technology, and has better selectivity than the traditional bacterial imprint film.
【技术实现步骤摘要】
一种用于细菌筛分的细菌印迹聚合物薄膜的制作方法
本专利技术涉及医学检测领域,特别涉及致病微生物快速诊断的全人工识别材料的制备方法。
技术介绍
全世界每年都有数百万人死于细菌感染或由细菌感染引发的并发症。在临床诊断上,致病细菌的快速诊断与分离仍然面临着巨大挑战。传统细菌识别方法基于细菌培养、分离及生化测试需要较长实验周期且操作繁琐。因此,开发一种新的快速细菌识别技术具有十分重要的现实意义。现有细菌识别材料大多采用天然生物识别单元,例如抗体、核酸适配体和噬菌体。通过结合表面等离子体共振技术、酶联免疫技术及荧光标记手段等,已开发出用于细菌快速识别的生物传感器。但是,基于天然生物识别单元的传感器在实际应用中有着诸多限制条件,其中最主要的就是天然生物识别单元的脆弱性。比如,抗体、噬菌体等生物大分子需要特定操作条件,而且运输储存都需要冷链支持,储藏期限较短,较易失活等。因此,开发全人工合成的细菌识别单元可以有效克服上述缺点,大大拓展细菌识别材料的应用范围。作为分子印迹技术的衍生,细菌印迹技术正发展成为制作人工合成识别材料的新方法。细菌的表面形貌和细菌外膜的化学特征是开发细菌表面印迹聚合物所利用的重要特性。对细菌形态、大小相似的细菌种类来说,细菌外表面的化学信息就显得尤为重要。现有的细菌印迹聚合物膜方法多是基于表面印迹技术,例如微接触印迹、溶胶凝胶法、光刻法及皮克林乳液聚合法等。通过以细菌细胞为模板进行官能团的自组装,细胞外膜的化学信息可印迹在聚合物界面。然而细菌与聚合物界面的作用机制仍然难以探明,限制了细菌印迹聚合物性能的进一步提升。因此,需要开发一种可以分子级别可控 ...
【技术保护点】
一种用于细菌筛分的细菌印迹聚合物薄膜的制作方法,其特征在于它的步骤如下:1)将金基底依次在丙酮、乙醇、去离子水中超声处理,并在氮气气流中干燥,将处理过的金基底放入1mM ATRP引发剂的乙醇溶液中放置过夜,所述的ATRP引发剂为含巯基的ATRP引发剂,引发剂的巯基与金构成稳定的Au‑S键,形成单分子自组装层;将组装好的金基底依次用四氢呋喃和乙醇冲洗,在氮气在吹干备用,2)选取处于指数生长期的纯种菌,用pH=7.2的PBS缓冲液离心、重悬操作三次,洗净细菌表面胞外聚合物,用pH=7.2的PBS缓冲液将菌液浓度调节为10
【技术特征摘要】
1.一种用于细菌筛分的细菌印迹聚合物薄膜的制作方法,其特征在于它的步骤如下:1)将金基底依次在丙酮、乙醇、去离子水中超声处理,并在氮气气流中干燥,将处理过的金基底放入1mMATRP引发剂的乙醇溶液中放置过夜,所述的ATRP引发剂为含巯基的ATRP引发剂,引发剂的巯基与金构成稳定的Au-S键,形成单分子自组装层;将组装好的金基底依次用四氢呋喃和乙醇冲洗,在氮气在吹干备用,2)选取处于指数生长期的纯种菌,用pH=7.2的PBS缓冲液离心、重悬操作三次,洗净细菌表面胞外聚合物,用pH=7.2的PBS缓冲液将菌液浓度调节为108cfu/ml,将10μl细菌菌液滴加并平铺在步骤1)得到的金基底上,放入4℃环境中1小时,让细菌充分附着固定在表面;3)称取甲基丙烯酸盐类阳离子单体、甲基丙烯酸盐类两性离子单体和交联剂溶解在DMSO/H2O溶剂中;再在溶液中溶解催化剂前驱体和配体,将溶液经过冷冻解冻泵循环法操作三次,除尽溶解氧;4)将步骤2)得到的带有模板细菌的金基底放入圆底烧瓶,用乳胶塞密封,并不断曝入氮气,维持无氧气氛,将步骤3)得到的溶液用注射器打入烧瓶,淹没金基底,再...
【专利技术属性】
技术研发人员:李中坚,包晗,雷乐成,杨彬,张兴旺,郑展望,
申请(专利权)人:浙江大学,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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