(E)-2,4-二羟基-6-丙烯基苯甲醛及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种(E)-2,4-二羟基-6-丙烯基苯甲醛及其制备方法和用途。该化合物的制备方法包括以下步骤：发酵培养土曲霉(Aspergillus terreus)PF26得到含该化合物的发酵液，即可。该化合物对丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶有一定的抑制作用；且该化合物的制备方法具有材料来源方便、制备周期短、绿色环保和工艺简单的优势。

(E) -2,4- two hydroxy -6- allyl benzaldehyde and preparation method and application thereof

The invention discloses a (E) -2,4- two hydroxy -6- allyl benzaldehyde and a preparation method and an application thereof. The preparation method of the compound comprises the following steps: fermentation of Aspergillus terreus (Aspergillus terreus) PF26 fermentation liquid containing the compound, can. The compound has certain inhibitory effect on hepatitis C virus NS3/4A protease, and the preparation method of the compound has the advantages of convenient material source, short preparation cycle, green environment protection and simple process.

【技术实现步骤摘要】
(E)-2,4-二羟基-6-丙烯基苯甲醛及其制备方法和用途
本专利技术涉及一种(E)-2,4-二羟基-6-丙烯基苯甲醛及其制备方法和用途。
技术介绍
全世界约有1.5亿人感染丙型肝炎病毒(HepatitisCVirus，HCV)，每年新增病例为300～400万。感染HCV后，部分患者最终发展成为肝硬化甚至肝癌。据估计，每年约有50万人死于HCV感染及其相关疾病，因此开发抗HCV药物迫在眉睫。HCV的NS3/4A蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可以水解HCV前体蛋白NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B间的连接，决定病毒各功能蛋白的成熟，此外该蛋白酶还可通过切割相应的宿主因子如β干扰素Toll样受体结构域衔接蛋白(Toll/IL-1receptordomaincontainingadaptorinducingIFN-β，TRIF)和线粒体抗病毒信号蛋白(Mitochondriaantiviralsignalingprotein，MAVS)对抗宿主的天然免疫。因此，抑制NS3/4A蛋白酶可有效地抑制病毒前体蛋白成熟和病毒复制，具体参见文献MoradpourD,PeninF.HepatitisCvirusproteins:fromstructuretofunction[J].CurrTopMicrobiolImmunol,2013,369:113-142。目前已成功的开发了多种NS3/4A蛋白酶抑制剂，已上市的有特拉匹韦、波普瑞韦和司美匹韦，具体参见文献DeLucaA,BiancoC,RossettiB.TreatmentofHCVinfectionwiththenovelNS3/4Aproteaseinhibitors[J].CurrOpinPharmacol,2014,18:9-17。然而，由于NS3/4A蛋白酶抑制剂耐药屏障低，易交叉耐药，所以开发新的NS3/4A蛋白酶抑制剂十分必要。微生物的代谢产物具有数目众多、化合物的结构多样和成药性好等优点，是良好的先导化合物库。迄今为止，已从微生物代谢产物中分离出许多抗菌、抗病毒、抗免疫排斥及抗癌的活性化合物，如埃博霉素，阿霉素等。此外，微生物药物具有生产成本低、条件温和、环境友好、可大规模生产等优点。2,4-二羟基-6-[(1'E,3'E)-1',3'-戊二烯基]苯甲醛报道有促进CHO和HeLa细胞增殖的作用，但未见有抑制NS3/4A蛋白酶的活性，甚至未见抑制病毒的作用。
技术实现思路
本专利技术提供了一种(E)-2,4-二羟基-6-丙烯基苯甲醛及其制备方法和用途。该化合物对丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶有一定的抑制作用；且该化合物的制备方法具有材料来源方便、制备周期短、绿色环保和工艺简单的优势。本专利技术提供了一种如式I所示的化合物(E)-2,4-二羟基-6-丙烯基苯甲醛，本专利技术还提供了一种式I化合物的制备方法，包括以下步骤：发酵培养土曲霉(Aspergillusterreus)PF26得到含式I化合物的发酵液，即可。本专利技术所述的土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株已于2011年8月31日递交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.5208，该菌株已在CN102827777A中公布。本专利技术所述的发酵培养土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株的发酵条件可采用本领域中土曲霉发酵培养的常规发酵培养条件，其中，发酵培养基较佳地为：葡萄糖30g/L，(NH4)2SO420g/L，酵母提取物10g/L，MgSO4·7H2O1g/L，FeSO4·7H2O0.05g/L，水，pH5.5，其中g/L是指各组分与发酵培养基的质量体积比。所述的发酵培养土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株的发酵培养条件中：培养温度较佳地为25～35℃，更佳地为30℃；震荡速度较佳地为150～250r/min，更佳地为220r/min；培养时间较佳地为120～180h，更佳地为168h。其中，在所述的发酵培养土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株之前还可包括土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株种子液的制备过程，其制备的步骤和条件可以参照本领域常规选择，本专利技术较佳地包括以下步骤：将保藏在甘油管的土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株孢子接种至种子培养基中培养，温度30℃、转速220r/min，振荡培养12-36h，即可；其中，所述的种子培养基较佳地为：酵母提取物5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，水，pH5.5；其中，g/L是指各组分与种子培养基的质量体积比；所述的甘油管中为甘油水溶液，所述的甘油水溶液的浓度可为本领域常规的浓度，较佳地为40％的甘油水溶液，所述的百分比为体积百分比。在所述的种子液制备好之后，还可包括将所述的种子液接种至所述的发酵培养基中的过程，其中，所述的接种的方法和条件可以参照本领域的常规进行选择，所述的种子液与所述的发酵培养基的体积比可为本领域常规的体积比，本专利技术较佳地1:200。本专利技术中在得到含式I化合物的发酵液后还可包括后处理过程，所述的后处理步骤可以参照本领域的常规进行选择，较佳地为：采用固液分离方法得到所述的发酵液的上清液。其中，所述的固液分离方法较佳地为离心方法；所述的离心方法的条件可参照本领域常规进行选择，转速较佳地3000～5000rpm，更佳地为4000rpm；时间为0.5～1h。在得到所述的发酵液的上清液后，还可进一步包括以下步骤：利用有机溶剂萃取所述的上清液，萃取液浓缩，得到所述的式I化合物粗品，即可；其中，所述的用有机溶剂为乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，丙酮，甲醇和乙醇中的一种或几种；所述的萃取中，所述的有机溶剂与所述的上清液的体积比可参照本领域的常规选择，本专利技术较佳地1:1；所述的萃取的次数可参照本领域常规进行选择，本专利技术较佳地3次。所述的浓缩可采用本领域常规浓缩条件，较佳地为减压浓缩；所述的减压浓缩条件可参照本领域的常规进行选择，本专利技术较佳地：温度40～45℃，真空度758mmHg。本专利技术还提供了一种式I化合物的分离纯化方法，包括以下步骤：(1)、将上述式I化合物粗品采用反相硅胶层析柱进行分离纯化，依次以水、20％、40％、50％、60％、80％、100％的甲醇-水的混合液进行梯度洗脱，收集60％的甲醇-水混合液的洗脱液并浓缩；其中，所述的百分比为甲醇占甲醇-水混合液的体积比；(2)、将步骤(1)所得产物采用正相硅胶色谱进行分离纯化，流动相为氯仿，收集含式I化合物的洗脱液并浓缩。(3)、将步骤(2)所得产物采用凝胶层析柱分离，流动相为50～100％的甲醇-水混合液，其中，所述的百分比为甲醇占甲醇-水混合液的体积比；收集含的式I化合物的洗脱液，浓缩。步骤(1)中，在所述的分离纯化前还可包括所述的式I化合物粗品溶解的过程，溶剂的选择可参照本领域的常规选择，较佳地为甲醇；其中，所述的溶剂的用量可将所述的式I化合物粗品溶解即可，本专利技术中所述的溶剂与所述的步骤(1)所得产物的体积质量比较佳地1.5。步骤(1)中，所述的反相硅胶层析柱可参照本领域常规进行选择，一般以十八烷基硅烷键合硅胶(ODS-C18本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种如式I所示的化合物(E)‑2,4‑二羟基‑6‑丙烯基苯甲醛，

【技术特征摘要】
1.一种如式I所示的化合物(E)-2,4-二羟基-6-丙烯基苯甲醛，2.一种如权利要求1所述的式I化合物的制备方法，包括以下步骤：发酵培养土曲霉(Aspergillusterreus)PF26得到含式I化合物的发酵液，即可。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的发酵培养土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株的发酵培养基为：葡萄糖30g/L，(NH4)2SO420g/L，酵母提取物10g/L，MgSO4·7H2O1g/L，FeSO4·7H2O0.05g/L，水，pH5.5，其中g/L是指各组分与发酵培养基的质量体积比；所述的发酵培养土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株的发酵培养条件为：培养温度为25～35℃，较佳地为30℃；震荡速度为150～250r/min，较佳地为220r/min；培养时间为120～180h，较佳地为168h。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：在所述的发酵培养土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株之前还包括土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株种子液的制备过程，包括以下步骤：将保藏在甘油管的土曲霉(Aspergillusterreus)PF26菌株孢子接种至种子培养基中，温度30℃、转速220r/min，振荡培养12-36h，即可；其中，所述的种子培养基为：酵母提取物5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，水，pH5.5；其中，g/L是指各组分与种子培养基的质量体积比。5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：在得到含式I化合物的发酵液后还包括采用离心方法得到所述的发酵液的上清液的过程；其中，所述的离心方法的条件为：转速为3000～5000rpm，较佳地为4000rpm；时间为0.5～1h；在得到所述的发酵液的上清液后，还包括以下步骤：利用有机溶剂萃取所述的上清液，萃取液浓缩，得到式I化合物粗品，即可；所述的用有机溶剂为乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，丙酮，甲醇和乙醇中的一种或几种。6.一种式I化合物(E)-2,4-二羟基-6-丙烯基苯甲醛的分离纯化方法，其包括以下步骤：(1)、将权利要求5中所述的式I化合物粗品采用反相硅胶层析柱进行分离纯化，依次以水、20％、40％、50％、60％、80％、100％的甲醇-水的混合液进行梯度洗脱，收集60％的甲醇-水混合液的洗脱液并浓缩；其中，所述的百...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱宝泉，潘芝弟，林军，胡海峰，周斌，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，中国医药工业研究总院，
类型：发明
国别省市：上海,31