【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】BAX靶向二聚化以调节BAX活性相关申请的交叉引用本申请要求2014年5月30日提交的美国临时专利申请号62/005,013的权益,所述美国临时专利申请的内容以全文引用方式并入本文。政府利益声明本专利技术是在由国家心肺和血液研究所(NationalHeart,Lung,andBloodInstitute)颁发的基金号5R00HL095929下由政府支持进行的。政府在本专利技术中具有某些权利。
技术介绍
专利技术背景贯穿本申请,各种出版物由括号中的数字指代。这些参考文献的完整引用可在说明书的结尾处找到。本文提到的这些出版物以及所有专利、专利申请公布和书籍的公开特此以全文引用方式并入本申请,以更充分描述本专利技术从属的领域。程序性细胞死亡或细胞凋亡是调控细胞生存和死亡之间关键平衡的基本过程(1)。细胞凋亡失调导致正常内稳态失衡,促成诸如癌症和神经变性的疾病(2,3)。细胞凋亡失调是包括癌症、心血管疾病和神经变性疾病的若干高死亡率人类疾病的关键。蛋白质的BCL-2家族包括调控细胞在线粒体途径处定型向凋亡的复杂相互作用网络(4,5)。BCL-2家族包括促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白二者。促凋亡BCL-2蛋白—BCL-2相关X蛋白(BAX)和BCL-2同源拮抗物杀伤物(BAK)—诱导线粒体外膜透化并且代表线粒体凋亡的关键守门因子(gatekeeper)和效应因子。因此,促凋亡BAX或BAK的抑制损害在包括心肌细胞和神经元的终末分化细胞中引发过早或不需要的细胞死亡的细胞能力。此外,BAX或BAK的激活促进凋亡并且可克服肿瘤细胞对经受细胞死亡的抗性和封闭性。促凋亡BAX是在非凋亡细胞 ...
【技术保护点】
一种鉴别用作促进或抑制细胞死亡的候选试剂的试剂的方法,所述方法包括:(a)使试剂与BCL‑2相关X蛋白(BAX)单体或其部分、和/或与BAX二聚体接触,以及(b)测量试剂是否抑制或促进BAX的二聚化;其中相比于试剂缺少时,在试剂存在时BAX单体与其它BAX单体或与BAX单体的部分的结合减少表明试剂抑制BAX的二聚化,其中抑制BAX的二聚化的试剂是用于促进细胞死亡的候选试剂;以及其中相比于试剂缺少时,在试剂存在时BAX单体或其部分与其它BAX单体或其部分的结合增加表明试剂促进BAX的二聚化,其中促进BAX的二聚化的试剂是用于抑制细胞死亡的候选试剂。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.30 US 62/005,0131.一种鉴别用作促进或抑制细胞死亡的候选试剂的试剂的方法,所述方法包括:(a)使试剂与BCL-2相关X蛋白(BAX)单体或其部分、和/或与BAX二聚体接触,以及(b)测量试剂是否抑制或促进BAX的二聚化;其中相比于试剂缺少时,在试剂存在时BAX单体与其它BAX单体或与BAX单体的部分的结合减少表明试剂抑制BAX的二聚化,其中抑制BAX的二聚化的试剂是用于促进细胞死亡的候选试剂;以及其中相比于试剂缺少时,在试剂存在时BAX单体或其部分与其它BAX单体或其部分的结合增加表明试剂促进BAX的二聚化,其中促进BAX的二聚化的试剂是用于抑制细胞死亡的候选试剂。2.如权利要求1所述的方法,其中所述试剂结合至BAX的N末端结合位点和/或C末端结合位点的氨基酸残基。3.如权利要求1所述的方法,其中试剂在结合位点残基S16、E17、Q18、I19、M20、K21、T22、G23、A24、L25、L26、I27、Q28、G29、F30、I31、Q32、D33、R34、A35、G36、R37、M38、G39、G40、E41、A42、P43、E44、L45、A46、L47、D48、P49、V50、P51、Q52、D53、A54、V129、P130、E131、L132、I133、R134、T135、I136、M137、G138、W139、T140、L141、D142、F143、L144、R145、E146和R147中一处或多处结合至BAX的N末端。4.如权利要求1所述的方法,其中试剂在结合位点残基N73、M74、E75、L76、D98、M99、F100、S101、D102、G103、N104、F105、N106、W107、G108、R109、I152、Q153、D154、Q155、G156、G157、W158、D159、G160、L161、L162、S163、Y164、F165、G166、T167、P168、T169、W170、Q171、T172、V173、T174、I175、F176、V177、A178、G179、V180、L181、T182、A183、S184、L185、T186、I187、W188、K189K190、M191和G192中一处或多处结合至BAX的C末端。5.如权利要求1-4中任何项所述的方法,其中对二聚体或单体形式的BAX的测量是使用荧光偏振测定法、尺寸排阻层析(SEC)、聚丙烯酰胺凝胶电泳、动态光散射和特异性结合BAX二聚体或BAX单体的抗体中的一者或多者来进行的。6.一种用于鉴别调节BAX的活性的试剂的方法,所述方法包括:在试剂存在和缺少时,使BAX的α9螺旋肽与BAX的N末端结合位点接触;以及测量BAX的α9螺旋肽与BAX的N末端结合位点之间的结合,其中相比于试剂缺少时的结合,在试剂存在时减少的结合表明试剂是BAX活性的调节剂。7.如权利要求6所述的方法,其中试剂是BAX的抑制剂。8.如权利要求6或7所述的方法,其中BAX的α9肽具有氨基酸序列TWQTVTIFVAGVLTASLTIWKKMG(SEQIDNO:11)。9.如权利要求6-8中任何项所述的方法,其中BAX的α9螺旋肽或BAX的N末端结合位点固定在固体基质上。10.如权利要求6-9中任何项所述的方法,其中BAX的α9螺旋肽与BAX的N末端结合位点之间的结合使用荧光测定法来测量。11.如权利要求1-10中任何项所述的方法,其中BAX是人BAX。12.如权利要求1-11中任何项所述的方法,其中试剂是小分子、分离肽、合成肽、具有天然或非天然氨基酸或组合的肽基试剂、烃钉合肽、限制性肽、大环、类肽、模拟肽、折叠体、适体、抗体、单抗体、纳米抗体或它们的组合。1...
【专利技术属性】
技术研发人员:E·加瓦蒂奥斯,
申请(专利权)人:阿尔伯特爱因斯坦医学院公司,
类型:发明
国别省市:美国,US
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