快速定量检测小分子化合物的试剂盒和方法技术

本发明专利技术提供了一种快速定量检测小分子化合物的试剂盒和方法。具体地，本发明专利技术试剂盒包括一测试条和一独立放置的荧光乳胶微粒-抗体偶联物，将待测物样品与该偶联物混合后加至测试条，并通过时间分辨荧光免疫层析方法进行检测，从而确定小分子化合物是否存在或检测其含量。本发明专利技术试剂盒具有极好的稳定性以及较高的灵敏度和特异性，适用于各类样品的检测。

Reagent kit and method for rapid quantitative detection of small molecule compounds

The present invention provides a reagent kit and method for rapid quantitative detection of small molecule compounds. Specifically, the kit of the invention includes a test strip and a separate placed fluorescent latex particles - antibody conjugate, the analyte sample and the conjugate mixture is added to the test strip, and the time-resolved fluorescence immunochromatographic method for testing, to determine the existence of small molecular compounds or its content detection. The kit has excellent stability, high sensitivity and specificity, and is suitable for the detection of various kinds of samples.

【技术实现步骤摘要】
快速定量检测小分子化合物的试剂盒和方法
本专利技术涉及检测领域，具体地，涉及一种快速定量检测小分子化合物的试剂盒和方法。
技术介绍
常用的小分子化合物的检测方法，包括化学显色法、免疫层析检测法、高效液相色谱检测法(HPLC)和气质联用色谱检测法(GC/MS)法等。其中，化学显色法需要大量检测样品，而且灵敏度及精密度均不高；后两者有较高的灵敏度及精密度，但检测要求高，难以推广。免疫层析检测法(Immunochromatographictest)是80年代兴起的一项快速检测技术。经过多年的发展，此项技术已经广泛应用于临床诊断，毒品检测和食品安全等领域。在免疫层析方法中，将小分子物质的完全抗原固定于硝酸纤维膜上的检测区(固相抗原)，待检样品溶液中的小分子物质(游离抗原)与固相抗原竞争结合胶体金或彩色乳胶微球标记的抗小分子物质的单克隆抗体(标记抗体)。如果待检样品中含有的小分子物质，将抑制标记抗体与固定抗原的结合，抑制在硝酸纤维素膜的检测区形成色带。测定后检测区如果形成色带，则结果为阴性，待测样品不含待测小分子物质；反之，不形成色带，则结果为阳性，检测样品含有待测小分子物质。由于胶体金或彩色乳胶微球标记检测是通过肉眼来判别结果，目前以胶体金或彩色微球标记的检测方法只能作为一种定性或半定量的检测。荧光定量免疫层析技术，是免疫荧光技术(Immunofluorescencetechnique)和传统免疫层析技术相结合发展创新的一种定量检测技术。该技术以荧光微球作为标记，通过检测荧光信号实现了检测结果的定量。但是，由于免疫层析检测的材料中硝酸纤维膜等均会在激发光作用下发出不同程度的荧光，同时检测样本如血液、尿样及唾液等均含有蛋白、核酸、糖类均具有荧光效应，因此而导致检测的背景较高，影响检测结果的准确性。为克服上述问题，有研究者开发了时间分辨荧光免疫层析技术，以消除样本中的荧光物质、激发光和膜本身对检测的干扰。然而，虽然时间分辨荧光免疫层析有助于提高检测的准确性，但是由于种种原因，在定量检测时仍会出现较大的偏差和波动，导致检测结果无法满足实际需要。尤其是对于小分子化合物(如甲基苯丙胺、吗啡等毒品)，定量检测结果的准确性一方面与遏制毒品的行动密切相关，也是对于罪犯的量刑的重要参考因素。因此，本领域迫切需要开发快速、定量、且准确(偏差小)的检测小分子化合物的新方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速定量检测小分子化合物的试剂盒和方法。在本专利技术的第一方面，提供了一种用于检测小分子化合物的试剂盒，所述试剂盒包括：(a)测试条，所述测试条包括背衬以及位于背衬上的样品垫、反应膜和吸收垫，其中所述反应膜上设置有检测区和质控区；以及(b)第一容器，以及位于所述第一容器内且与所述测试条独立设置(或放置)的抗体复合物，其中所述抗体复合物包含荧光乳胶微粒以及特异性针对小分子化合物的抗体，所述特异性针对小分子化合物的抗体偶联于所述荧光乳胶微粒；其中，所述的检测区固定有所述小分子化合物的完全抗原。在另一优选例中，在所述的测试条上，所述样品垫和反应膜是直接相邻或相接触的。在另一优选例中，按样品的液体流动方向，所述的测试条上依次包括样品垫、反应膜、和吸收垫。在另一优选例中，所述测试条由样品垫、反应膜、吸收垫、和背衬构成。在另一优选例中，所述的抗体复合物位于独立的包装或容器内。在另一优选例中，所述的测试条不设有结合区。在另一优选例中，所述的测试条在未使用时，不含有用于特异性与所述小分子化合物结合的抗体或所述抗体复合物。在另一优选例中，所述的第一容器为独立的且封闭的包装或试剂杯。在另一优选例中，所述的第一容器中还含有在另一优选例中，所述小分子化合物的分子量为1-1000Da，较佳地为5-800Da，更佳地为10-500Da。在另一优选例中，所述的小分子化合物为甲基苯丙胺。在另一优选例中，所述荧光乳胶微粒为镧系金属和/或镧系金属螯合物包被的乳胶微粒。在另一优选例中，所述质控区包含第二抗体，所述第二抗体特异性结合于特异性针对小分子化合物的抗体。在另一优选例中，所述的第二抗体为多抗或抗血清。在另一优选例中，所述的特异性针对小分子化合物的抗体为鼠抗体，而所述的第二抗体为兔抗鼠IgG抗体或羊抗鼠IgG抗体。在另一优选例中，所述的特异性针对小分子化合物的抗体为兔抗体，而所述的第二抗体为羊抗兔IgG抗体。在另一优选例中，所述的小分子化合物的完全抗原为小分子化合物与载体蛋白的偶联物。在另一优选例中，所述的载体蛋白包括BSA蛋白。在本专利技术的第二方面，提供了一种检测小分子化合物的方法，包括步骤：(1)将待测物样品与一抗体复合物进行混合，获得第一处理混合物，其中所述抗体复合物包含荧光乳胶微粒以及特异性针对小分子化合物的抗体，并且所述特异性针对小分子化合物的抗体偶联于所述荧光乳胶微粒；(2)将所述的第一处理混合物加至一测试条的样品垫，其中，所述测试条包括背衬以及位于背衬上的样品垫、反应膜和吸收垫，其中所述反应膜上设置有检测区和质控区；所述的检测区固定有所述小分子化合物的完全抗原；(3)采用时间分辨荧光免疫层析方法测量所述测试片的检测区的荧光强度及质控区的荧光强度，从而确定小分子化合物是否存在，和/或确定为小分子化合物的含量。在另一优选例中，所述的小分子化合物包括甲基苯丙胺。在另一优选例中，所述的样品包括水溶液、饮料、全血、血浆、血清、尿液、汗液、泪液或唾液。在另一优选例中，在步骤(3)中，将测试区的荧光强度与质控区的荧光强度的比值，和标准曲线进行比较，从而确定小分子化合物的含量。在另一优选例中，所述荧光乳胶微粒为镧系金属和/或镧系金属螯合物包被的乳胶微粒。在本专利技术的第三方面，提供了一种定量检测待测物的荧光测量装置，所述的装置包括：(a)本专利技术第一方面所述的试剂盒；和(b)用于检测荧光强度的检测器。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了本专利技术的一种实施例中免疫层析试纸条(板)的结构示意图，其中，各标识如下：1为样品垫，3为检测区，4为反应膜，5为质控区(对照区)，6为吸收垫，7为背衬。具体实施方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，通过大量筛选和摸索，发现首次意外地发现了一种新的快速定量检测小分子化合物的试剂盒和方法。实验表明，检测时先将待测样品和独立放置的荧光乳胶微粒-抗体偶联物混合，再将该混合物加至测试条，并通过时间分辨荧光免疫层析方法进行检测，可以显著提高检测的灵敏度、特异性和稳定性，在此基础上完成了本专利技术。具体而言，本专利技术人经过研究发现，现有的层析检测条的结构对于定量检测结果的波动(或偏差)造成较大的影响。一个主要的影响因素是结合垫部分(或结合区)。如果将偶联抗体的乳胶微粒包被在结合垫上，进行干燥。检测时乳胶从结合垫上释放就成为影响检测准确性的关键因素之一。此外，乳胶微粒释放的程度、释放的快慢和/或结合垫的材质，都可能是导致定量测定结果波动性大的因素。本专利技术人还发现，在对结合垫进行处理时，结合垫的处理方式以及乳胶的干燥程度也难以保持一致，且固定或位于所述结合垫的检测抗体(如荧光乳胶微粒标记的抗体偶联物)的性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测小分子化合物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：(a)测试条，所述测试条包括背衬以及位于背衬上的样品垫、反应膜和吸收垫，其中所述反应膜上设置有检测区和质控区；以及(b)第一容器，以及位于所述第一容器内且与所述测试条独立设置(或放置)的抗体复合物，其中所述抗体复合物包含荧光乳胶微粒以及特异性针对小分子化合物的抗体，所述特异性针对小分子化合物的抗体偶联于所述荧光乳胶微粒；其中，所述的检测区固定有所述小分子化合物的完全抗原。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测小分子化合物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：(a)测试条，所述测试条包括背衬以及位于背衬上的样品垫、反应膜和吸收垫，其中所述反应膜上设置有检测区和质控区；以及(b)第一容器，以及位于所述第一容器内且与所述测试条独立设置(或放置)的抗体复合物，其中所述抗体复合物包含荧光乳胶微粒以及特异性针对小分子化合物的抗体，所述特异性针对小分子化合物的抗体偶联于所述荧光乳胶微粒；其中，所述的检测区固定有所述小分子化合物的完全抗原。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的小分子化合物为甲基苯丙胺。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的测试条不设有结合区。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述质控区包含第二抗体，所述第二抗体特异性结合于特异性针对小分子化合物的抗体。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的小分子化合物的完全抗原为小分子化合物与载体蛋白的偶联物。6.一种检测小分子化合物的方法，其特征在于，包括步骤：(1)将待测物样品与一抗体复合物进行混合，获得第一处理混合物，其中所述抗体复合物包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾立波，陈连康，胡小龙，张玉荣，
申请(专利权)人：上海市刑事科学技术研究院，上海八通生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31