低分子量PEG修饰剂含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种低分子量PEG修饰剂含量测定方法，首先通过FID检测器建立PEG测定标准曲线，将待检测液加适量纯水稀释到适当浓度，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流量为1mL/min,汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃条件下测定峰面积，根据标准曲线，得到待检测液中低分子量PEG修饰剂的含量。采用气相色谱进行定量检测分析，所建方法快速，简便，准确，可以广泛应用低分子量的PEG修饰剂或药物的含量测分析检测。

Low molecular weight PEG modifiers determination of content

The invention discloses a method for the determination of low molecular weight PEG modification agent content, first through the FID detector to establish PEG standard curve, the test liquid adding dilution water to the appropriate concentration, by capillary column, Gao Chundan carrier gas flow rate is 1mL/min, the column temperature of 250 DEG C, vaporization, using FID detector, temperature the column temperature was 250 C, determine peak area under 150 DEG C, according to the standard curve, the content of the detected liquid of low molecular weight modifier PEG. The method is rapid, simple and accurate. It can be widely used in the determination and analysis of low molecular weight PEG modifiers or drugs.

【技术实现步骤摘要】
低分子量PEG修饰剂含量测定方法
本专利技术属于药物分析

技术介绍
聚乙二醇(PEG)是一种pH中性，无毒，且具有独特理化性质和良好生物相容性的亲水高分子聚合物，也是经FDA批准的极少数可以体内注射的合成聚合物之一。当PEG偶联到蛋白质、多肽、小分子有机药物或纳米颗粒外壳上时，可以降低药物制剂的免疫清除以及肾脏的快速消除，延长药物的体内循环时间，减小药物的毒性。作为新型的药用辅料，PEG的质量控制以及在体内的吸收、分布与排泄过程对于PEG化药物的设计与评价具有十分重要的意义。二乙二醇修饰剂一种新型的功能性PEG修饰剂，是迄今为止已知聚合物中蛋白和细胞吸收水平最低的聚合物，由于二乙二醇无毒及良好的生物相容性，该药物修饰是将活化的二乙二醇通过化学方法偶联到药物上，改善药物的理化性质和生物学活性，改进了药物动力学和药效等性质，显著增强药物的溶解性和稳定性，减少免疫原性和抗原性，降低毒副作用，增加了体内生物活性和疗效等功效，这种技术现已开始应用于蛋白质(肽类)、酶、抗体及小分子药物中。目前对于PEG的分析常采用放射性标记法、比色法、WesternBlot和高效液相色谱法(HPLC)，但这些方法均存在明显的不足。例如，放射性标记法用于标记PEG时成本太高，且目前尚未建立成熟的方法学检验标记效率，也没有对比试验说明标记后的PEG在体内的动力学行为是否发生了变化；比色法和WesternBlot法都不能得到精确的定量结果，且后者是通过测定与PEG结合的抗体量来间接对PEG进行定量。鉴于抗体的选择性差，可能和样本中存在的内源性干扰物质结合，故不适合血浆或组织等复杂生物样本中PEG的定量分析；HPLC法采用折射率检测器，分析时间长，且定量下限仅为50mg/mL，不足以分析生物体内痕量的PEG水平。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种低分子量PEG修饰剂含量测定方法。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种低分子量PEG修饰剂含量测定方法，采用气相色谱法进行检测，检测步骤为：1)通过FID检测器首先建立PEG测定标准曲线，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流速为1mL/min，汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃，进样量为1uL，测定浓度为1、2、3、4、5ug/mL的标准溶液，得到PEG测定标准曲线，峰面积与浓度线性关系良好，R2＝0.992；2)将待检测液加适量纯水稀释到适当浓度，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流量为1mL/min,汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃条件下测定峰面积；3)根据标准曲线，得到待检测液中低分子量PEG修饰剂的含量。进一步地，所述的低分子量PEG修饰剂指的是分子量为2000以内的PEG修饰剂。进一步地，所述的低分子量PEG修饰剂为二乙二醇丙酸甲酯、二乙二醇丙酸乙酯、二乙二醇丙酸正丁酯中的任意一种。有益效果：本专利技术根据低分子量PEG修饰剂的结构特性，采用气相色谱进行定量检测分析，所建方法快速，简便，准确，有望应用低分子量的PEG修饰剂或药物的含量测分析检测。附图说明图1为一种实施例1中二乙二醇丙酸甲酯的标准曲线。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。实施例1二乙二醇丙酸甲酯的测定(1)标准品储备液:精确称取二乙二醇丙酸甲酯标准品100mg，加水溶解并定容到1000mL，得100ug/mL相应标准储备液，保存于4℃的冰箱中。(2)标准使用液：分别吸取1、2、3、4、5mL一定体积标准储备液于100mL容量瓶中，加水定容得相应浓度为1、2、3、4、5ug/mL标准液(现配现用)。待测样品处理：精确量取1ml待测液加适量纯水稀释到浓度为1-5ug/mL适当浓度。采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流量为1ml/min，汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃，峰面积与浓度线性关系良好(R2>0.99，加样回收率98.3—100.5％。标准溶液采用1、2、3、4、5ug/mL浓度，得出标准曲线线性相关系数R2＝0.992，加样回收率98.3—100.5％其最低检测限为0.59ug/mL(S/N＝3)，检测精密度为0.65％。将待检测液加适量纯水稀释到适当浓度，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流量为1mL/min，汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃条件下测定峰面积，根据标准曲线，得到待检测液中低分子量PEG修饰剂的含量。上述实施例中采用的待测物为二乙二醇丙酸甲酯，经试验表明，分子量为2000以内的PEG修饰剂采用上述方法均可以得到较好的结果。虽然说明书中对本专利技术的实施方式进行了说明，但这些实施方式只是作为提示，不应限定本专利技术的保护范围。在不脱离本专利技术宗旨的范围内进行各种省略、置换和变更均应包含在本专利技术的保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种低分子量PEG修饰剂含量测定方法，其特征在于，采用气相色谱法进行检测，检测步骤为：1)通过FID检测器首先建立PEG测定标准曲线，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流速为1mL/min，汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃，进样量为1uL，测定浓度为1、2、3、4、5ug/mL的标准溶液，得到PEG测定标准曲线，峰面积与浓度线性关系良好，R2＝0.992；2)将待检测液加适量纯水稀释到适当浓度，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流量为1mL/min,汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃条件下测定峰面积；3)根据标准曲线，得到待检测液中低分子量PEG修饰剂的含量。

【技术特征摘要】
1.一种低分子量PEG修饰剂含量测定方法，其特征在于，采用气相色谱法进行检测，检测步骤为：1)通过FID检测器首先建立PEG测定标准曲线，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流速为1mL/min，汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃，进样量为1uL，测定浓度为1、2、3、4、5ug/mL的标准溶液，得到PEG测定标准曲线，峰面积与浓度线性关系良好，R2＝0.992；2)将待检测液加适量纯水稀释到适当浓度，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流量...

【专利技术属性】
技术研发人员：施立钦，邱从平，
申请(专利权)人：宁波职业技术学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33