利用鳕鱼内脏制备高纯度海产多不饱和脂肪酸磷脂的方法技术

本发明专利技术提供一种利用鳕鱼内脏制备高纯度海产多不饱和脂肪酸磷脂的方法。本方法采用高效溶剂提取、快速净化、超声强化超临界萃取、聚苯乙烯凝胶柱层析等工艺，具有环保、节能、高效的优势。利用鳕鱼加工下脚料，提取到高纯度的海产多不饱和脂肪酸磷脂。提取过程操作简便，提取效率高；磷脂的纯度大于等于97％。本发明专利技术一方面解决大量剩余海洋副产物资源的浪费问题，减少环境污染；另一方面丰富了磷脂的制备来源，且原料来源广泛廉价，降低了磷脂提取成本，具有重要的生态、经济和社会意义。

Method for preparing high-purity marine polyunsaturated fatty acid phospholipid by using cod viscera

The invention provides a method for preparing high-purity seafood polyunsaturated fatty acid phospholipid by utilizing the viscera of cod. The method uses high efficiency solvent extraction, rapid purification, ultrasonic enhanced supercritical extraction, polystyrene gel column chromatography and so on. The method has the advantages of environmental protection, energy saving and high efficiency. The highly purified marine polyunsaturated fatty acid phospholipid was extracted from processed cod meat. The extraction process is simple and the extraction efficiency is high. The purity of phospholipid is greater than or equal to 97%. One aspect of the invention solves the waste problem of a large number of surplus marine by-product resources, reduce environmental pollution; on the other hand, the preparation of phospholipid rich sources, wide source of raw materials cheap, reduces the cost of extraction of phospholipids, plays an important role in ecology, economy and society.

【技术实现步骤摘要】
利用鳕鱼内脏制备高纯度海产多不饱和脂肪酸磷脂的方法
本专利技术属于海洋活性物质制备的
，具体涉及一种从鳕鱼内脏中提取高纯度海产多不饱和脂肪酸磷脂的方法。
技术介绍
磷脂是一类含磷酸根的类脂化合物，是组织细胞的基本组成成分，包括鞘磷脂和甘油磷脂两大类。前者主要见于高等动物的红细胞膜中，后者在动物肝脏、脑及卵巢中含量丰富。磷脂不仅具有较高的营养价值，还具有生理调节机能，促进人体新陈代谢、增强免疫力、预防疾病等作用。现在，美国、欧洲、日本等发达国家已将磷脂应用于临床中，预防脑、心、肝、肿瘤等疾病。此外，磷脂还具有乳化、润湿、抗氧化、改善物料粘度、防止淀粉老化等特征，使其在食品工业、轻工、化工等领域有着广泛的应用。目前，市场上磷脂产品主要是大豆磷脂和蛋黄磷脂。大豆磷脂虽然存在广泛，价格低廉，但其脂肪酸组成相对简单，不饱和程度较低；蛋黄磷脂的PC纯度较高，但生产成本高，缺少对人体有益的多不饱和脂肪酸。海产动物来源的磷脂因其侧链中富含EPA和DHA等丰富的ω-3多不饱和脂肪酸，具有显著的降血脂、抗衰老、促进神经传导、提高大脑活力、预防心脑血管疾病，保肝、增强免疫力、抑制肿瘤细胞生长等多种功能，开发利用前景广阔。我国海产品加工废弃物原料丰富，高值化利用市场前景好，但目前尚无规模化生产技术。鱼虾贝等加工下脚料大都用于加工低值产品或作为废弃物处理掉，造成了渔业资源的极大浪费，同时还存在着环境污染的隐患。因此，利用这些下脚料提取精制高经济附加值的多不饱和脂肪酸磷脂，对于提高海洋资源利用价值，突破海产磷脂产业化关键技术意义重大，且具有显著的经济价值和社会意义。鳕鱼广泛分布于世界各大海洋，生活在海洋底层和中下层，是海洋渔业捕捞的主要对象之一。全球鳕鱼总产量较高，约占海洋渔业总产量的12％。现代随着人们对健康水平要求的提高，市场对鱼类产品需求越来越大，促使我国的海洋鱼类加工业迅速发展。目前，我国鳕鱼每年加工量约40～50万吨，鳕鱼的加工会产生大量的加工副产物，如鱼头、内脏、鱼皮等，其重量约占原料鱼的50％左右。这些副产物，特别是鳕鱼内脏，大都用于加工低值产品或作为废弃物直接丢弃，既污染了环境，又造成资源的严重浪费。随着科学技术和工业化的快速发展，鱼类加工下脚料的高值化利用越来越受到重视。鳕鱼内脏含有大量的磷脂、不饱和脂肪酸、蛋白质和维生素等，具有极大的利用空间和利用价值。国内外对磷脂的提取纯化进行了很多的研究，常用的方法有：溶剂提取法、吸附色谱法、超临界萃取法、酶解法、无机盐复合沉淀法、微波提取法、膜分离法等。但是，这些方法存在很多的技术缺陷：原料方面主要从大豆和蛋黄中提取，从而和人类抢夺食物资源；超临界萃取法、膜分离法等工艺较为复杂，操作成本高；无机盐沉淀法引入金属离子(Zn2+、Cd2+等)，具有一定的毒性，影响磷脂的质量；硅胶吸附色谱法，常造成死吸附，填料不易重复利用，易造成环境污染等。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种操作简便，成本低，安全环保的利用鳕鱼内脏制备高纯度多不饱和脂肪酸磷脂的方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供的技术方案，一种从鳕鱼内脏中提取高纯度海产多不饱和脂肪酸磷脂的方法，将鳕鱼内脏粉碎，用碱性乙醇液搅拌提取，提取液经包合净化剂脱胆固醇、脱色后得到粗磷脂，粗磷脂经超声强化超临界萃取、聚苯乙烯凝胶柱层析得到高纯度多不饱和脂肪酸磷脂。具体的，包括以下步骤：(1)将鳕鱼内脏粉碎，加入85～100％的碱性乙醇液搅拌提取2～3次，每次2～4小时，合并提取液，用盐酸调pH值到中性；(2)提取液中加入包合净化剂,搅拌30～50min，离心取上清液，于低于50℃下减压浓缩，得到脱胆固醇的粗磷脂；(3)粗磷脂用少量无水乙醇溶解，用适量活性白土分散，挥干溶剂，进行超声强化超临界CO2提取，超声频率为10～25KHz，萃取温度为20～24℃，萃取压力为20～26Mpa,萃取时间为1～2.5h，CO2流量为10～15L/h，萃取结束后收集总磷脂；(4)总磷脂用少量二氯甲烷溶解后，过滤，经Bio-BeadsS-X2聚苯乙烯凝胶柱层析，环己烷洗脱除去小极性杂质后，环己烷-乙酸乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，薄层色谱检测后，合并洗脱液，于低于50℃下减压浓缩，干燥，得到精制磷脂。其中：所述的鳕鱼内脏，包括生殖腺(卵和鱼白)、心脏、肝脏、胃和肠等；所述的原料与碱性乙醇液按照质量体积比1:6～1:12混合；所述的碱性乙醇液为向乙醇液中添加碱性物质，使其pH达到9.0～10.0，碱性物质为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠或醋酸钠等。所述的包合净化剂为β-环糊精和活性炭的混合物，其中，β-环糊精和活性炭的重量比例为1:10，两者直接混合即可；包合净化剂用量为每1000mL提取液中加入10～40g包合净化剂；所述步骤(2)中离心转速为3000～5000rpm。所述步骤(3)中活性白土的用量为粗磷脂重量的2～4倍，超声频率为18～24KHz，萃取温度为20～24℃，萃取压力为22～24Mpa，萃取时间为1.5～2h，CO2流量为10～15L/h；所述步骤(4)中洗脱剂为环己烷-乙酸乙酯按照1:1比例混合后的溶剂，洗脱速度为每小时0.5～1.5倍柱体积。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：(1)利用鳕鱼加工下脚料，进行废物利用，一方面解决大量剩余海洋副产物资源的浪费问题，减少环境污染；另一方面丰富了磷脂的制备来源，且原料来源广泛廉价，降低了磷脂提取成本，具有重要的生态、经济和社会意义；(2)提取过程中通过向乙醇中添加碱性物质，对磷脂起到增溶作用，提高了磷脂的收率；(3)提取过程中温度均控制在50℃以下，避免丧失磷脂的生理活性，适合海产多不饱和脂肪酸磷脂的提取；(4)提取过程操作简便，提取效率高；柱层析所用填料机械强度好，死吸附少，可重复使用。(5)净化过程中采用β-环糊精和活性炭组成的包合净化剂，除去胆固醇的同时进行脱色，快速高效的达到净化的目的。(6)超临界萃取过程中采用更低的萃取温度、更低的萃取压力，但是却具有更短的萃取时间，萃取率得到明显提高，节约能源，降低成本；(7)本专利技术方法得到的鳕鱼内脏高纯度多不饱和脂肪酸磷脂，磷脂的纯度大于等于97％。附图说明图1为本专利技术实施例1至实施例4得到的高纯度磷脂薄层层析结果图：其中图1中1、2、3、4分别为实施例1、2、3、4对应的层析结果。图2为磷酸二氢钾的标准曲线。图3为实施例1得到的高纯度磷脂气质色谱分析结果。具体实施方式下面结合具体试验方法和附图对本专利技术的技术方案及其所产生的技术效果进行进一步的阐述，下述说明仅是为了解释本专利技术，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变换或替换，均属于本专利技术的保护范围。实施例1称取100g冷冻鳕鱼内脏，用组织粉碎机粉碎，加入1000mL90％的乙醇液(醋酸钠使其pH为9.0)，室温下搅拌提取2小时，减压抽滤得到提取液；滤渣加入相同碱性乙醇液重复搅拌提取1次，抽滤得到提取液，合并两次提取液，盐酸调节pH至中性；提取液中加入22g包合净化剂(净化剂中β-环糊精与活性炭的重量比为1:10)，搅拌30min，静置后离心10min，取上清液于47℃下减压浓缩去除溶剂得到粗磷脂；粗磷脂用少量无水乙醇溶解后，用3倍粗磷脂重量的活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用鳕鱼内脏制备高纯度海产多不饱和脂肪酸磷脂的方法，其特征是，将鳕鱼内脏粉碎，用碱性乙醇液搅拌提取，提取液经包合净化剂脱胆固醇、脱色后得到粗磷脂；粗磷脂经超声强化超临界萃取、聚苯乙烯凝胶柱层析得到高纯度多不饱和脂肪酸磷脂。

【技术特征摘要】
1.利用鳕鱼内脏制备高纯度海产多不饱和脂肪酸磷脂的方法，其特征是，将鳕鱼内脏粉碎，用碱性乙醇液搅拌提取，提取液经包合净化剂脱胆固醇、脱色后得到粗磷脂；粗磷脂经超声强化超临界萃取、聚苯乙烯凝胶柱层析得到高纯度多不饱和脂肪酸磷脂。2.如权利要求1所述的利用鳕鱼内脏制备高纯度海产多不饱和脂肪酸磷脂的方法，其特征是，包括以下步骤：(1)将鳕鱼内脏粉碎，加入85～100％的碱性乙醇液搅拌提取2～3次，每次2～4小时，合并提取液，用盐酸调pH值到中性；(2)提取液中加入包合净化剂,搅拌30～50min，离心取上清液，于低于50℃下减压浓缩，得到脱胆固醇、脱色的粗磷脂；(3)粗磷脂用少量无水乙醇溶解，用适量活性白土分散，挥干溶剂，进行超声强化超临界CO2提取，超声频率为10～25KHz，萃取温度为20～24℃，萃取压力为20～26Mpa,萃取时间为1～2.5h，CO2流量为10～15L/h，萃取结束后收集总磷脂；(4)总磷脂用少量二氯甲烷溶解后，过滤，经Bio-BeadsS-X2聚苯乙烯凝胶柱层析，环己烷洗脱除去小极性杂质后，环己烷-乙酸乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，薄层色谱检测后，合并洗脱液，于低于50℃下减压浓缩，干燥，得到精制磷脂。3.如权利要求2所述的利用鳕鱼内脏制备高纯度海产多不饱和脂肪酸磷脂的方法，其特征是，所述步骤(1)中的鳕鱼内脏原料与碱性乙醇液按照质量体积比1:6～...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩利文，李晓彬，何秋霞，刘可春，张姗姗，孙晨，韩建，王希敏，郭敬兰，盛文龙，
申请(专利权)人：山东省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37