培养细胞的分化促进方法以及培养细胞分化促进剂技术

本发明专利技术是能够促进培养细胞的分化的方法以及适用于该方法的培养细胞分化促进剂。通过使含脂环结构的聚合物成型体与被培养的细胞接触，从而诱导细胞的分化。

Method for promoting differentiation of cultured cells and culturing cell differentiation promoter

The present invention is a method for promoting the differentiation of cultured cells and a cell differentiation enhancer suitable for the method. The cell differentiation is induced by contacting the polymer forming material with the lipid ring structure with the cultured cell.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及培养细胞的分化促进方法以及培养细胞分化促进剂。
技术介绍
近年来，利用了ES细胞、iPS细胞等万能细胞、干细胞的再生医疗备受瞩目。万能细胞、干细胞被称为未进行分化的未分化状态的细胞。在再生医疗中，使这些未分化状态的细胞分化成目标的脏器、组织、细胞，使用得到的脏器、组织、细胞进行患者的治疗。实现了例如使用从患者的皮肤的表皮组织采取的干细胞进行皮肤的再生医疗、美容行为。皮肤的表皮在从真皮侧至皮肤表面侧的方向具有基底细胞、有棘细胞、颗粒细胞以及角质细胞，基底细胞一边分化成有棘细胞、颗粒细胞、角质细胞，一边转移至上层，最终成为污垢而剥落。在皮肤的再生医疗中，从受验者的皮肤的最表面的表皮组织采取基底细胞、有棘细胞，将这些细胞一边在培养容器内培养而使其层状地增殖，一边进行分化诱导处理以使层的最外侧的细胞分化成颗粒细胞、接着分化成角质细胞。然后，将通过该分化诱导处理而按照基底细胞、有棘细胞、颗粒细胞、角质细胞的顺序层状地增殖的细胞群(培养表皮)移植至受验者的皮肤。在上述的分化诱导操作中，作为培养容器，一般通用经亲水化处理的聚苯乙烯制皿、烧瓶等。已知在构成表皮的细胞内，基底细胞、有棘细胞在钙的浓度增加的环境中分化成颗粒细胞、角质细胞。此外，在颗粒细胞分化成角质细胞的过程中，角蛋白、内披蛋白(involucrin)、兜甲蛋白等构成角质细胞的蛋白质被生物合成。因此，制作培养表皮时，重要的是在培养细胞中这些蛋白质被生物合成。另外，在培养细胞内这些蛋白质被生物合成的情况可以通过检测与各蛋白质对应的mRNA而进行。如上所述，尽管皮肤的再生医疗技术日益进展，但是现有技术的培养表皮的制作方法不仅费力而且还需要时间，因此存在着在移植手术时来不及培养表皮、与制作培养表皮所需要的工夫、时间成比例地产生高额的费用这样的问题。因此，期望得到能够进一步促进培养细胞的分化的方法。作为促进向角质细胞的分化的方法，已知有使用乳酸菌的乳发酵物的方法。在专利文献1中公开有以下技术：通过在人正常表皮细胞的培养基中添加使用瑞士乳酸菌(Lactobacillushelveticus)而得到的乳发酵物，从而作为表皮细胞的分化标记的角蛋白的mRNA增加。此外，示出通过口服该乳发酵物，可促进皮肤表皮的角质化。然而，该乳发酵物中包含乳酸菌，因此在培养再生医疗用的细胞时所使用的培养基中混入该乳发酵物是不现实的。此外，已知有使用樱桃提取物促进表皮细胞的分化的方法。在专利文献2中示出：通过将樱桃提取物给予表皮细胞，从而作为分化过程中重要成分的角蛋白10和丝聚合蛋白的mRNA产生显著加快。然而，角蛋白10和丝聚合蛋白是从表皮细胞的分化过程的初期到中期在有棘细胞内合成的，樱桃提取物并没有促进向角质细胞的分化。此外，在专利文献2中记载的技术是以化妆品等外用剂为目标的，很难将该见解直接适用于再生医疗用的表皮细胞的分化的促进。现有技术文献专利文献专利文献1：国际专利WO2006/137513号(US2010/0166877)；专利文献2：日本特开第2012-167048号公报。
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术鉴于这样的现有技术的实际情况而完成的，其课题在于提供能够进一步促进培养细胞的分化的方法以及培养细胞分化促进剂。用于解决课题的方案本专利技术者为了解决上述课题进行了深入的研究，结果发现，如果一边使作为分化的对象的细胞和含脂环结构的聚合物接触一边进行培养，则作为分化标记的mRNA增加，从而完成了本专利技术。像这样，根据本专利技术，可提供下述(1)～(2)的培养细胞的分化促进方法、及(3)的培养细胞分化促进剂。(1)一种培养细胞的分化促进方法，其特征在于，使含脂环结构的聚合物成型体与被培养的细胞接触。(2)根据(1)所述的培养细胞的分化促进方法，其中，被培养的细胞是表皮细胞。(3)一种培养细胞分化促进剂，包含含脂环结构的聚合物成型体。专利技术效果根据本专利技术，可提供能够促进培养细胞的分化的方法、以及适用于该方法的培养细胞分化促进剂。附图说明图1是示出兜甲蛋白表达量的图表。图2是示出GATA3表达量的图表。具体实施方式本专利技术中使用的细胞只要是能够分化的细胞即可，没有特别限制。作为能够分化的细胞，可列举出：万能细胞；间充质干细胞等各种的干细胞；各种的祖细胞；由外胚层、中胚层和内胚层分化的细胞、不是最终分化状态的细胞等。作为这样能够分化的细胞，可举出用于皮肤的表皮再生的表皮细胞作为优选例。表皮细胞可以是与真皮相接的表皮的基底细胞、位于基底的皮肤表面侧的有棘细胞、位于有棘细胞的皮肤表面侧的颗粒细胞中的任一种。表皮细胞优选采取自成为皮肤治疗的对象的患者。对细胞进行培养时，通常使用液体培养基。作为液体培养基，通常使用具有pH缓冲作用、渗透压适合细胞、包含细胞的营养成分、并且对细胞没有毒性的液体培养基。作为显示出pH缓冲作用的成分，可列举出三羟甲基氨基甲烷(Tris)盐酸盐、各种磷酸盐、各种碳酸盐等。液体培养基的渗透压调整通常使用调整钾离子、钠离子、钙离子、葡萄糖等浓度的水溶液进行，以使其与细胞渗透压基本相同。作为这样的水溶液，具体而言，可列举出：磷酸缓冲生理盐水、三羟甲基氨基甲烷缓冲生理盐水、HEPES缓冲生理盐水等生理盐水；乳酸林格氏液、醋酸林格氏液、碳酸氢根林格氏液等林格氏液等。作为细胞的营养成分，可列举出氨基酸、核酸、维生素类、矿物质类等。作为液体培养基，可以利用RPMI-1640、HAM、α-MEM、DMEM、EMEM、F-12、F-10、M-199等各种市售品。液体培养基中，也可以配合添加剂。作为添加剂，可列举出蛋白质等的诱导因子、具有分化诱导活性的低分子化合物、矿物质、金属、维生素成分等。其中，优选配合用于分化诱导的添加剂。作为用于分化诱导的添加剂，可列举出：作用于细胞表面的受体的配体、激动剂、拮抗剂；核内受体的配体、激动剂、拮抗剂；骨胶原、纤连蛋白等细胞外基质；细胞外基质的一部分或模拟的化合物；作用于与细胞内的信息传达路径相关的蛋白质的成分；作用于细胞内的初级代谢和次级代谢的酶的成分；影响细胞内的核内或线粒体内的基因的表达的成分；能够与病毒载体等组合而导入细胞内的DNA、RNA等。这些添加剂可以单独使用一种、或组合两种以上使用。细胞的培养条件没有特别限定，可以根据使用的细胞、目的适宜决定。例如，可以使用将二氧化碳浓度固定维持为5％左右、将温度固定维持为20℃～37℃的范围的经加湿的恒温器来对细胞进行培养。在本专利技术中使用的含脂环结构的聚合物成型体是将含脂环结构的聚合物成型为任意形状而成的。含脂环结构的聚合物是在主链和/或侧链具有脂环结构的树脂，从机械强度、耐热性等的观点来看，优选在主链含有脂环结构的聚合物。作为脂环结构，可列举出饱和环状烃(环烷烃)结构、不饱和环状烃(环烯烃)结构等，但从机械强度、耐热性等的观点来看，优选环烷烃结构、环烯烃结构，其中，最优选具有环烷烃结构的脂环结构。构成脂环结构的碳原子数没有特别的限制，但通常为4～30个，优选为5～20个，进一步优选为5～15个。当构成脂环结构的碳原子数在该范围内时，机械强度、耐热性以及成型性的特性高度平衡，因此优选。含脂环结构的聚合物中的具有脂环结构的重复单元的比例只要根据使用目的适宜选择即可，但通常为30重量％以上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种培养细胞的分化促进方法，其特征在于，使含脂环结构的聚合物成型体与被培养的细胞接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.26 JP 2014-130942;2015.02.10 JP 2015-023741.一种培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：市村直也，平野孝明，
申请(专利权)人：日本瑞翁株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP