一种重楼组织培养的方法技术

本发明专利技术公开了一种重楼组织培养的方法，包括（1）：顶芽处理；（2）：接种①人员准备、②设备准备、③苗簇分拣、④生根苗接种、⑤继代苗接种、⑥标记、⑦培养等步骤。在培养中通过光源控制、温度控制、湿度控制、尘、菌控制、监控系统等相关措施的实施等相关措施的实施，更加提高了重楼组织培养的效率与效果，使得得到的产品质量稳定。本发明专利技术通过对重楼组织的培养使其生长周期缩短短并且提高了繁殖率同时能有效降低灾害性气候对重楼生长的不利影响。

A method of Paris tissue culture

The invention discloses a method of culturing tissue of Paris, including: (1) the tip; (2): 1, the vaccination staff in the preparation of equipment preparation, the Miao, the sorting rooting seedlings inoculation, the subculture seedlings were inoculated and six markers, and training steps. The implementation of relevant measures in training through the source control, temperature control, humidity control, dust, bacteria control and monitoring systems, the implementation of relevant measures, more to improve the efficiency and effectiveness of Paris tissue culture, the product quality is stable and the. The invention can shorten the growth cycle is short and improve the reproduction rate and can effectively reduce the adverse effects of climate disasters of Paris growth through the cultivation of Paris organization.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物的组织培养方法，具体涉及一种重楼组织培养的方法。
技术介绍
重楼是名贵中药材之一，全世界共有24种，我国拥有19种，其中又以西南地区各省的种类和资源尤为丰富，如云南、四川、贵州等地。重楼主要有效成分是甾体皂苷，其苷元主要为异螺甾烷醇类的薯蓣皂苷元和偏诺皂苷元，并含有氨基酸、甾酮、蜕皮激素、黄酮苷等化合物。现代药理研究表明，重楼具有抗肿瘤、止血、止咳平喘、抗菌、抗病毒等作用，其良好的疗效已被众多的制药工业用于药剂的使用，是云南白药、宫血宁、热毒清等重要中成药的主要成分。随着中医药产业的快速发展，重楼药材的需求正以每年20％的幅度递增，而其野生资源却逐年减少，导致重楼价格迅速上涨，严重制约了制药企业的产量和质量。当前，重楼主要靠采挖野生资源，由于长期过度采挖，并缺乏对其生态环境的保护，致使野生重楼资源遭到了毁灭性的破坏，现已濒临灭绝。当前重楼主要是靠种子和根茎进行繁殖，由于重楼种子存在种胚发育不完全，胚乳坚硬，胚轴后熟等明显“双重休眠”特性，因此重楼种子在播种后通常需要经历两个冬天才能萌发成苗，是典型的“二年生种子”，而且在自然状态下重楼种子出苗率很低、生长周期长，从出苗到成材需要8～10年的时间。
技术实现思路
本专利技术提供一种生长周期短，繁殖率高、能有效降低灾害性气候对植物生长的不利影响的重楼组织培养的方法。本专利技术的一种重楼组织培养的方法，包括以下步骤：步骤（1）：顶芽处理利用手术刀摘取植株顶芽部分，用清水将顶芽冲洗干净，用配制好的1/1000的氯化汞溶液，浸泡顶芽18-22分钟，利用无菌流动水冲洗顶芽2-4分钟。步骤（2）：接种①人员准备：组培人员进入实验室前需更换拖鞋、风淋机去尘、更换无菌服、佩戴口罩、佩戴发套后方可进入组培室，操作前需洗手消毒，操作时严禁讲话。②设备准备：采用75%酒精溶液消毒组培台面；之后开启紫外杀菌灯8-12分钟；开启高温消毒器（对镊子和手术刀进行温消毒用），开启工作台通风，准备长柄镊子、长柄手术刀各两套（方便消毒和使用的轮替），打开无菌纸袋，将无菌牛皮纸平铺在工作台上。③苗簇分拣：右手持长柄镊，将苗簇从培养瓶中小心取出，放在无菌纸上。左手持手术刀，对取出的苗簇按生长程度进行分拣，已经发育出根系的幼苗称为生根苗，尚未发育根系的组织称为继代苗。④生根苗接种：拿取装有培养基的培养瓶，在工作台面上打开瓶盖，瓶身侧立，从无菌纸上夹区长短相似的生根苗，栽种到培养瓶中，栽种时注意将根部插入培养基，每株间距相对均匀，每瓶栽种20-25棵。⑤继代苗接种：同样方法，拿取装有培养基的培养瓶，在工作台面上打开瓶盖，瓶身侧立，从无菌纸上夹起长势良好的继代苗，栽种到培养瓶中，栽种时注意底部触碰培养基。⑥标记：对栽种好的培养瓶进行信息标记，包含植物品种、代数、接苗日期、操作员等。⑦培养：把接种好的培养瓶，按照内部植株类型和长势的不同，放入不同条件的培养室进行培养。上述的一种重楼组织培养的方法，其中步骤（2）所述的培养基其制备方法包括以下步骤：①配制母液：将MgSO4·7H2O280mg、KH2PO4250mg、CaCl2430mg、(NH4)2·SO4850mg、KCL2000mg、H3BO33.0mg、MnSO4·4H2O22.3mg、ZnSO4·7H2O3.8mg、CuSO4·5H2O0.025mg、Na2-EDTA37.3mg、FeSO4·7H2O27.8mg、肌醇55.5mg、甘氨酸2.0mg、叶酸0.50mg、盐酸硫胺素0.25mg、盐酸吡哆醇1.25mg、琼脂8000mg、蔗糖30000mg、6-苄基氨嘌呤2.0mg、吲哚丁酸1.0mg、倒入容器内，调节PH值5，备用；②榨取果汁：香蕉去皮1.5Kg、苹果去果核500g，使用破壁机榨成混合果汁；③初步混合：将果汁沿着容器壁缓缓倒入母液，边倒入边顺时针搅拌，搅拌速度保持均匀，搅拌过程中应避免搅拌棒触碰容器底、壁，以免产生气泡；④加水稀释：将过滤水煮沸后，沿容器壁缓缓倒入混合液，边倒入边顺时针搅拌，搅拌速度保持均匀，搅拌过程中应避免搅拌棒触碰容器底、壁，以免产生气泡；⑤加入碳粉：均匀的撒入碳粉500mg，同样的方法搅拌均匀，碳粉具有催生根系的作用，如果只是扩大生产规模增，无需催生根系，则跳过此步骤，不加碳粉的培养基为半透明的乳白色；⑥培养基的分装：根据试管苗的生长习性，选择不同种类的试管瓶分装，石斛生长瓶750ml，底宽口窄，使用过滤网通气瓶盖，花卉生长瓶250ml，底口同径，使用密封瓶盖；培养基用量杯进行分装，小瓶30ml—40ml，大瓶70-100ml，培养基倒入培养瓶时应匀速缓慢，避免培养基溅到瓶口、瓶壁。分装完成后加盖，整齐摆放在培养筛上；⑦培养基消毒：利用高温消毒器对分装好的培养基进行消毒，在120摄氏度的状态下，保持40分钟；⑧培养基冷却：通过无菌通道，将消毒好的培养基转入冷却室，自然冷却后，培养基由液态转变为果冻态，冷却后的培养基保质期为45天。上述的一种重楼组织培养的方法，其中步骤（2）所述的培养，包括以下特征：①为了提供合适的生长光源，组培室采用自然光+人工补光的光控系统，室外光照超出植物需求时，通过窗帘和百叶窗的闭合，来减少光照亮；室外光照不足时，采用红绿蓝三基色的LED光源，对组培室进行补光。②温度控制：植物不同的生长状态，对温度的需要不尽相同，培养室采用了空调+加热器的组合模式，来达到对温度的控制。③湿度控制：组培室还配备了湿度调节器，以保证组培室的湿度在合理的范围内。④尘、菌控制：为了保证组培室无尘、无菌，组培室所有人员出入口均采用双道门的设计，并在两门之间安装风淋机，减少人员出入带入菌尘的可能；组培室所有采光窗口严格密封，避免飞虫及灰尘的进入；组培室内空调出风口装有空气过滤器，确保痛风系统的清洁。⑤监控系统：为了提高组培室的环境指数，每间组培室均放置了报警器，一旦有温度、湿度、光照、及灰尘超出预设警戒值，则会系统报警。本专利技术与现有技术相比，具有明显有益效果，从以上技术方案可知:本专利技术通过对重楼组织的培养使其生长周期缩短短并且提高了繁殖率同时能有效降低灾害性气候对重楼生长的不利影响，本专利技术操作简单，通过组培室采用自然光+人工补光的光控系统、温度控制、湿度控制、尘、菌控制、监控系统等相关措施的实施，更加提高了重楼组织培养的效率与效果，使得得到的产品质量稳定。具体实施方式实施例1：一种重楼组织培养的方法，包括以下步骤：步骤（1）：顶芽处理利用手术刀摘取植株顶芽部分，用清水将顶芽冲洗干净。用配制好的1/1000的氯化汞溶液，浸泡顶芽22分钟，利用无菌流动水冲洗顶芽2分钟。步骤（2）：接种（1）人员准备：组培人员进入实验室前需更换拖鞋、风淋机去尘、更换无菌服、佩戴口罩、佩戴发套后方可进入组培室，操作前需洗手消毒，操作时严禁讲话。（2）设备准备：采用75%酒精溶液消毒组培台面；之后开启紫外杀菌灯8分钟；开启高温消毒器（对镊子和手术刀进行温消毒用），开启工作台通风，准备长柄镊子、长柄手术刀各两套（方便消毒和使用的轮替），打开无菌纸袋，将无菌牛皮纸平铺在工作台上。（3）苗簇分拣：右手持长柄镊，将苗簇从培养瓶中小心取出，放在无菌纸上。左手持手术刀，对取出的苗簇按生长程度进行分拣，已经发育出根系的幼苗称为生根苗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重楼组织培养的方法，包括以下步骤：步骤（1）：顶芽处理利用手术刀摘取植株顶芽部分，用清水将顶芽冲洗干净，用配制好的1/1000的氯化汞溶液，浸泡顶芽18‑22分钟，利用无菌流动水冲洗顶芽2‑4分钟；步骤（2）：接种①人员准备：组培人员进入实验室前需更换拖鞋、风淋机去尘、更换无菌服、佩戴口罩、佩戴发套后方可进入组培室，操作前需洗手消毒，操作时严禁讲话；②设备准备：采用75%酒精溶液消毒组培台面；之后开启紫外杀菌灯8‑12分钟；开启高温消毒器对镊子和手术刀进行温消毒，开启工作台通风，准备长柄镊子、长柄手术刀各两套方便消毒和使用的轮替，打开无菌纸袋，将无菌牛皮纸平铺在工作台上；③苗簇分拣：右手持长柄镊，将苗簇从培养瓶中小心取出，放在无菌纸上；左手持手术刀，对取出的苗簇按生长程度进行分拣，已经发育出根系的幼苗称为生根苗，尚未发育根系的组织称为继代苗；④生根苗接种：拿取装有培养基的培养瓶，在工作台面上打开瓶盖，瓶身侧立，从无菌纸上夹区长短相似的生根苗，栽种到培养瓶中，栽种时注意将根部插入培养基，每株间距相对均匀，每瓶栽种20‑25棵；⑤继代苗接种：同样方法，拿取装有培养基的培养瓶，在工作台面上打开瓶盖，瓶身侧立，从无菌纸上夹起长势良好的继代苗，栽种到培养瓶中，栽种时注意底部触碰培养基；⑥标记：对栽种好的培养瓶进行信息标记，包含植物品种、代数、接苗日期、操作员；⑦培养：把接种好的培养瓶，按照内部植株类型和长势的不同，放入不同条件的培养室进行培养。...

【技术特征摘要】
1.一种重楼组织培养的方法，包括以下步骤：步骤（1）：顶芽处理利用手术刀摘取植株顶芽部分，用清水将顶芽冲洗干净，用配制好的1/1000的氯化汞溶液，浸泡顶芽18-22分钟，利用无菌流动水冲洗顶芽2-4分钟；步骤（2）：接种①人员准备：组培人员进入实验室前需更换拖鞋、风淋机去尘、更换无菌服、佩戴口罩、佩戴发套后方可进入组培室，操作前需洗手消毒，操作时严禁讲话；②设备准备：采用75%酒精溶液消毒组培台面；之后开启紫外杀菌灯8-12分钟；开启高温消毒器对镊子和手术刀进行温消毒，开启工作台通风，准备长柄镊子、长柄手术刀各两套方便消毒和使用的轮替，打开无菌纸袋，将无菌牛皮纸平铺在工作台上；③苗簇分拣：右手持长柄镊，将苗簇从培养瓶中小心取出，放在无菌纸上；左手持手术刀，对取出的苗簇按生长程度进行分拣，已经发育出根系的幼苗称为生根苗，尚未发育根系的组织称为继代苗；④生根苗接种：拿取装有培养基的培养瓶，在工作台面上打开瓶盖，瓶身侧立，从无菌纸上夹区长短相似的生根苗，栽种到培养瓶中，栽种时注意将根部插入培养基，每株间距相对均匀，每瓶栽种20-25棵；⑤继代苗接种：同样方法，拿取装有培养基的培养瓶，在工作台面上打开瓶盖，瓶身侧立，从无菌纸上夹起长势良好的继代苗，栽种到培养瓶中，栽种时注意底部触碰培养基；⑥标记：对栽种好的培养瓶进行信息标记，包含植物品种、代数、接苗日期、操作员；⑦培养：把接种好的培养瓶，按照内部植株类型和长势的不同，放入不同条件的培养室进行培养。2.根据权利要求1所述的重楼组织培养的方法，其特征在于：其中步骤（2）所述的培养基的配制包括以下步骤：①配制母液：将MgSO4·7H2O280mg、KH2PO4250mg、CaCl2430mg、(NH4)2·SO4850mg、KCL2000mg、H3BO33.0mg、MnSO4·4H2O22.3mg、ZnSO4·7H2O3.8mg、CuSO4·5H2O0.025mg、Na2-EDTA37.3mg、FeSO4·7H2O27.8mg、肌醇55.5mg、甘氨酸2.0mg、叶酸0.50mg、盐酸硫胺素0.25mg、盐酸吡哆醇1.25mg、琼脂8000mg、蔗糖30000mg、6-苄基氨嘌呤2.0mg、吲哚丁酸1.0mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄麒参，胡旭，
申请(专利权)人：贵州中科绿谷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52