用作NAALAD酶抑制剂的氧膦基衍生物制造技术

本发明专利技术涉及二肽酶抑制剂，特别是涉及抑制Ｎ－乙酰化α－链接的酸性二肽酶（ＮＡＡＬＡＤ酶）活性的新的膦酸盐衍生物、羟基氧膦基衍生物和氨基磷酸盐衍生物，含有这类衍生物的药物组合物，以及利用这类衍生物抑制ＮＡＡＬＡＤ酶活性和治疗前列腺疾病的方法，特别是利用本发明专利技术化合物抑制前列腺癌细胞生长的方法。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
相关申请本申请是1996年6月17日申请、专利技术名称为“膦酰基甲基戊二酸衍生物”、序号为08/665,776的美国专利申请的部分连续(CIP)申请，也是1996年12月31日申请、专利技术名称为“NAALAD酶活性抑制剂”、序号为08/775,586的美国专利申请的部分连续申请及1996年12月31日申请、专利技术名称为“氨基磷酸盐衍生物”、序号为08/778,733的美国专利申请的部分连续申请。本专利技术背景1．专利
本专利技术涉及抑制N-乙酰化α-链接的酸性二肽酶(NAALAD酶)的酶活性的新的膦酸盐衍生物、羟基氧膦基衍生物和氨基磷酸盐衍生物，含有这类衍生物的药物组合物，以及利用这类衍生物抑制NAALAD酶的酶活性和治疗动物前列腺疾病的方法。2．现有技术的描述前列腺癌在美国，前列腺癌是主要类型的癌症，它是男人死于癌症的第二主要原因。据美国癌症研究协会估计，仅在1996年就诊断出了317,100例新的前列腺癌患者且有41,400人死于前列腺癌。1980年与1990年之间，前列腺癌的发病率增加了65％，而且随着诊断试验的改进和更长时间的预测，这个数字还将继续上升。尽管在前列腺癌发作之前，多数男人死于其它疾病，但随着男人寿命的增加，这种疾病会有更多的传播时间，前列腺癌的死亡率预计会更加提高。在1993年，有报道认为前列腺特异性膜抗原(PSMA)的分子克隆是有力的前列腺癌标记物并被假设为前列腺癌的造影和细胞毒素治疗方法的目的物。PSMA抗体，特别是标记铟-111和标记氚的PSMA抗体已被公开过并为前列腺癌的诊断和治疗进行过临床试验。PSMA表达在前列腺管上皮中，它存在于精液血浆、前列腺流体和小便中。在1996年，人们发现PSMA cDNA表达可赋予NAALAD酶活性。NAALAD酶抑制剂在某些与谷氨酸盐异常和神经中毒性相关的人和动物病态中涉及到了NAAG和NAALAD酶，例如人们已经揭示出在海马内注射NAAG可引起癫痫发作活性加长。最近报道，具有遗传性癫痫发作倾向的大鼠的NAALAD酶活性的基本水平持续增加。这些观察结果支持了突触谷氨酸盐的有效性增加激励了癫痫发作的感受性的假说，同时可提出NAALAD酶抑制剂可提供抗癫痫活性。在ALS发病机理和被称为遗传性犬脊柱肌肉萎缩(HCSMA)的病理学类似动物疾病中也涉及到了NAAG和NAALAD酶。结果表明NAAG浓度及其代谢物-NAA、谷氨酸盐和天冬氨酸盐--在ALS患者和HCSMA狗的脑脊髓液中被提高了2-至3-倍。另外，NAALAD酶活性在ALS患者和HCSMA狗的死后脊髓组织中显著增加(2至3倍)。同样地，如果NAAG代谢增加可改变这些酸性氨基酸和肽的CSF水平，则NAALAD酶抑制剂在临床上也可用于抑制ALS的传播。NAAG水平和NAALAD酶活性异常也可在神经分裂症死后的大脑，特别是在额叶前部和大脑边缘区域中得到证明。上述结果表明NAALAD酶抑制剂可用于治疗谷氨酸盐异常。但是，本专利技术的目的在于惊奇且出人意料地发现本专利技术新化合物不仅是有效的NAALAD酶抑制剂，而且可有效地用于治疗前列腺疾病，特别是前列腺癌。尽管癌症数据与前列腺癌细胞有关，但预期NAALAD酶抑制剂同样有效地用于治疗属于NAALAD酶的其它组织的癌症，所述组织如脑、肾和睾丸。尽管已认识到了几种NAALAD酶抑制剂，但它们仅被用于非临床研究。这类抑制剂的实例包括一般的金属肽酶抑制剂，如o-菲咯啉金属螯合剂如EGTA和EDTA，以及肽类似物，如使君子酸和β-NAAG。因此有必要确认更多的NAALAD酶抑制剂，特别是确认能够治疗前列腺疾病(如前列腺癌)的NAALAD酶抑制剂。专利技术概要本专利技术涉及抑制N-乙酰化α-链接的酸性二肽酶(NAALAD酶)的酶活性的新的膦酸盐衍生物、羟基氧膦基衍生物和氨基磷酸盐衍生物，含有这类衍生物的药物组合物，以及利用这类衍生物抑制NAALAD酶的酶活性和治疗动物如癌症类疾病以及治疗与前列腺疾病相关的疾病的方法。本专利技术优选的组合物包含式Ⅰ化合物 其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C8直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；X为CH2、O或N；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代。本专利技术也涉及一种药物组合物，该组合物包含(ⅰ)治疗有效量的式Ⅰ化合物；和(ⅱ)可药用载体。优选地，式Ⅰ化合物以抑制NAALAD酶的酶活性或治疗动物前列腺疾病的有效量存在。本专利技术进一步涉及抑制动物NAALAD酶的酶活性的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的式Ⅰ化合物。最后，本专利技术涉及治疗动物前列腺疾病的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的式Ⅰ化合物。附图简述附图说明图1是表示前列腺癌细胞系LNCAP生长与不同使君子酸浓度之间的条线图。图1表示了利用使君子酸盐进行7-天治疗对LNCAP细胞生长的作用。正如胸腺嘧啶核甙掺入量的显著降低所示，浓度为10nM至1μM的使君子酸盐显示出LNCAP细胞增生的降低明显与剂量有关。图2是表示前列腺癌细胞系LNCAP生长与不同2-(膦酰基甲基)戊二酸浓度之间的条线图。图2表示了利用2-(膦酰基甲基)戊二酸进行7-天治疗对LNCAP细胞生长的作用。正如胸腺嘧啶核甙掺入量的显著降低所示，浓度为100pM至10nM的2-(膦酰基甲基)戊二酸显示出LNCAP细胞增生的降低明显与剂量有关。图3是利用2-(膦酰基甲基)戊二酸进行日治疗时LnCap人前列腺肿瘤的响应的曲线图。在开始治疗之后将各个肿瘤体积的平均值绘制成时间的函数曲线，误差表示为SEM。利用2-(膦酰基甲基)戊二酸治疗6周后导致对照组与日注射给药的动物(p=0.04)之间和对照组与植入聚合物的动物(p=0.02)之间产生显著差异。图4是利用2-(膦酰基甲基)戊二酸进行治疗的动物存活百分数与天数之间的曲线图。与载体对比，图4表明注射与聚合物混合的2-(膦酰基甲基)戊二酸及接受肿瘤内注射2-(膦酰基甲基)戊二酸的存活百分数平均值更高。该图表明72天后，利用聚合物治疗的动物存活率为88％，而利用肿瘤内注射进行治疗的动物存活率为55％，利用载体进行治疗的对照组的动物存活率为32％。图5为肿瘤生长与进行大鼠Dunning细胞R3327-G注射后天数之间的曲线图。在0天时注入前列腺癌细胞，从第1天至第84天皮下日注射不同剂量的2-(膦酰基甲基)戊二酸和对照载体。图5表明肿瘤生长速度的降低是2-(膦酰基甲基)戊二酸剂量的函数。图6是R3327-G大鼠前列腺肿瘤对利用2-甲基]戊二酸进行治疗的响应曲线图。将以相对于治疗开始时肿瘤体积表示的各个肿瘤体积平均值(V/V0)绘制成时间的函数。利用2-甲基]戊二酸治疗2.5周后得到了对照组与肿瘤内日注射1μg药物的动物之间的显著差异(p=0.02)。本专利技术定义的详细描述“化合物3”是指2-(膦酰基甲基)戊二酸，NAALAD酶抑制剂。在酶的上下文中的“抑制”是指可逆酶抑制，如竞争性、无竞争性和非竞争性抑制。竞争性、无竞争性和非竞争性抑制可通过抑制剂对酶的反应动力学的影响而加以区分。当抑制剂与酶可逆结合时则发生竞争性抑制，所述结合以在活本文档来自技高网...

【技术保护点】
式Ⅰ化合物或其可药用盐、水合物或其混合物：Ｒ↓［１］－＊＊＊ Ⅰ其中Ｒ↓［１］为氢、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［９］直链或支链烷基、Ｃ↓［２］－Ｃ↓［９］直链或支链链烯基、Ｃ↓［３］－Ｃ↓［８］环烷基、Ｃ↓［５］－Ｃ↓［７］环烯基或Ａｒ↓ ［１］；Ｘ为ＣＨ↓［２］、Ｏ或ＮＲ↓［１］，其中Ｒ↓［１］如上文定义；和Ｒ↓［２］为Ｃ↓［１］－Ｃ↓［９］直链或支链烷基、Ｃ↓［２］－Ｃ↓［９］直链或支链链烯基、Ｃ↓［３］－Ｃ↓［８］环烷基、Ｃ↓［５］－Ｃ↓［７］环烯基或Ａｒ↓［１ ］，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基可任意地被下述基团取代：Ｃ↓［３］－Ｃ↓［８］环烷基、Ｃ↓［３］或Ｃ↓［５］环烷基、Ｃ↓［５］－Ｃ↓［７］环烯基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］ 烷基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［６］直链或支链烷基或链烯基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］烷氧基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］链烯氧基、苯氧基、苄氧基或Ａｒ↓［１］；其中Ａｒ↓［１］选自１－萘基、２－萘基、２－吲哚基、３－吲哚基、４－吲哚基、２－呋喃基、３－呋喃基、四氢呋喃基、２－噻吩基、３－噻吩基、４－噻吩基、２－、３－、或４－吡啶基或苯基，它们可具有１至５个取代基，该取代基独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［６］氟甲基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［６］直链或支链烷基或链烯基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］烷氧基或Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］链烯氧基、苯氧基和苄氧基。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：保罗F杰克逊，芭芭拉S斯卢舍，凯文L泰勒，凯斯M麦克林，
申请(专利权)人：吉尔福德医药公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]