The invention relates to a luminescent biosensor of silver doped poly dopamine nano microspheres supported graphene quantum dot PDANS@Ag/GQDs based on the electrochemical preparation method and application of field preparation and biological sensor detection technology is a new type of functional nano composite materials. Polydopamine nanospheres with high specific surface area and high load characteristics based on the silver doped poly dopamine nano microspheres supported electrochemical luminescence materials of graphene quantum dots, thereby improving the electrochemical luminescence stability for labeled probe pDNA. Using multi walled carbon nanotubes MWCNT supported Pd nano cube complexes as the base material for fixing the thrombin aptamer, through specific recognition of aptamer and target signal, the successful construction of low cost and simple operation closed type light-emitting electrochemical biosensor, realizes the high sensitive detection of thrombin.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于银掺杂的聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器的制备方法,具体涉及到将石墨烯量子点作为发光材料,利用银掺杂的聚多巴胺纳米微球的高负载性和电化学稳定性负载石墨烯量子点作为标记物,多壁碳纳米管负载Pd纳米立方体复合物作为基底材料用于固定凝血酶核酸适配体,制备一种检测凝血酶的信号关闭型电化学发光生物传感器,属于新型功能材料与生物传感
技术介绍
由丝氨酸蛋白质水解而成的凝血酶是一种重要的丝氨酸蛋白酶。在人体生理和病理过程中都发挥着重要作用,可以作为相关疾病诊断的生物标识物。衡量凝血机制的重要指标是凝血酶的浓度和活性,对于揭示肿瘤的发生机制及作为早期诊断、治疗、疗效及愈后的判断依据意义重大。电化学发光分析是对电极施加一定的电压进行电化学反应,反应的产物之间或反应的产物与体系中的某种组分发生化学反应,产生激发态物质,激发态物质回到基态时产生发光,根据发光光谱和强度对物质进行痕量分析的一种方法。该法具有灵敏度高、线性范围宽、过程控制性强、选择性好、仪器简单、无放射性等优点;同时,核酸适配体是通过SELEX技术筛选出来的,将筛选出来的适配体作为识别元件与电化学发光传感器相结合,具有适配体的高选择性和特异性结合的优势。本专利技术制备了一种基于银掺杂的聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器。本专利技术采用原位还原的方法,将银纳米粒子原位生长在聚多巴胺纳米微球表面,利用聚多巴胺纳米微球大的比表面积及高负载特性负载大量的石墨烯量子点,不仅实现了石墨烯量子点作为标记物的用途,而且增强了石墨烯量子点的电化学发光稳定性和 ...
【技术保护点】
一种基于聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将直径4 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝抛光粉依次做抛光处理,用超纯水冲洗干净;(2)滴加6 μL、0.5~1.5 mg/mL的MWCNT/Pd纳米立方体溶液至电极表面,室温下晾干,用超纯水冲洗电极表面,晾干;(3)依次滴加10 µL 0.5~1.5 μmol/L凝血酶核酸适配体溶液,3 µL质量分数1%的牛血清白蛋白,封闭非特异性结合位点,超纯水冲洗,4 ℃冰箱中晾干;(4)滴加10 µL pDNA‑PDANS@Ag/GQD溶液,在37℃下孵化1~3 h,置于4 ℃冰箱中晾干后用超纯水冲洗电极表面;(5)将电极浸入1×10‑14~1×10‑11 mol/L一系列不同浓度的凝血酶溶液中,在37 ℃下孵化40 min,制得了一种基于聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器。
【技术特征摘要】
1.一种基于聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将直径4mm的玻碳电极依次用1.0μm、0.3μm、0.05μm氧化铝抛光粉依次做抛光处理,用超纯水冲洗干净;(2)滴加6μL、0.5~1.5mg/mL的MWCNT/Pd纳米立方体溶液至电极表面,室温下晾干,用超纯水冲洗电极表面,晾干;(3)依次滴加10µL0.5~1.5μmol/L凝血酶核酸适配体溶液,3µL质量分数1%的牛血清白蛋白,封闭非特异性结合位点,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;(4)滴加10µLpDNA-PDANS@Ag/GQD溶液,在37℃下孵化1~3h,置于4℃冰箱中晾干后用超纯水冲洗电极表面;(5)将电极浸入1×10-14~1×10-11mol/L一系列不同浓度的凝血酶溶液中,在37℃下孵化40min,制得了一种基于聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器。2.一种基于聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器的制备方法,所述的PDANS@Ag/GQD制备,其特征在于,包括以下步骤:(1)PDANS@Ag的制备80~120mg盐酸多巴胺加入到80~120mLpH=8.8的Tris-盐酸缓冲溶液与30~70mL异丙醇的混合液中,在室温下避光反应24h,将产品离心分离并用超纯水洗涤五次,之后将产物分散到5mL超纯水中备用;取1mLPDANS稀释到5mL超纯水中,在搅拌的条件下依次加入500~700mg柠檬酸三钠、20mL0.015~0.035mol/LA...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘媛媛,赵彦华,诸宗伟,邢振远,马洪敏,张勇,王欢,魏琴,
申请(专利权)人:济南大学,
类型:发明
国别省市:山东;37
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