一种PCSK9抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种PCSK9抗体及其制备方法和应用。所述PCSK9抗体包括PCSK9抗体的重链可变区重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PCSK9抗体的轻链可变区轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，其氨基酸序列分别如本发明专利技术中所述。所述PCSK9抗体是全人源的，具有高亲和力，与人源PCSK9蛋白具有高度亲和力；能够抑制PCSK9与其受体LDLR的结合；能够显著抑制PCSK9蛋白介导的LDLR的表达水平；并且能够显著抑制PCSK9蛋白介导的LDL摄入现象，因此运用于抗动脉粥样硬化、高胆固醇血脂症或冠心病的制备中。

PCSK9 antibody and preparation method and application thereof

The invention discloses a PCSK9 antibody and a preparation method and application thereof. The PCSK9 heavy chain variable region heavy chain CDR1 PCSK9, including one or more antibody heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3, and / or, one or more PCSK9 antibody light chain variable region of light chain CDR1 and light chain CDR2 and light chain CDR3, its amino acid sequence respectively, such as the present invention. The PCSK9 is a fully human antibody, with high affinity, high affinity with human PCSK9 protein can inhibit the binding of PCSK9 to its receptor; LDLR; expression level can significantly inhibit PCSK9 protein mediated LDLR; and can significantly inhibit PCSK9 protein mediated LDL uptake into the phenomenon, therefore used in anti atherosclerosis high cholesterol, blood lipid and coronary heart disease in the preparation of.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗体领域，具体涉及一种PCSK9抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
据统计，2008年大约有1700万人死于心血管疾病，占全球死亡人数的三分之一；而预计到2030年，这一数字将会增加至2330万。各种数据显示，血液中低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)的含量升高是引发心血管疾病的主要危险因素之一。因此，通过降低LDL-C的含量来缓解动脉粥样硬化及其并发症，已成为干预心血管疾病最为有效地措施之一。2003年，研究人员在一法国家族中发现了PCSK9的突变基因，该突变基因也成为除LDLR和ApoB之外第三个与常染色体显性家族性高胆固醇血症有关的基因。PCSK9是一种分泌型丝氨酸蛋白酶，PCSK9与低密度脂蛋白胆固醇受体(low-densitylipoproteinreceptor，LDLR)结合后，能够将LDLR内化引导至溶酶体降解，抑制其再循环到肝细胞表面。由于体循环中大部分的低密度脂蛋白(LDL)颗粒通过肝细胞表面的低密度脂蛋白受体(LDLR)被清除，因而PCSK9的存在能够减弱肝脏代谢血浆LDL-C的能力。体外实验表明，PCSK9能够降低HepG2细胞表面LDLR的表达水平。同样的，在小鼠体内PCSK9的蛋白水平的上升同样能够降低肝脏中LDLR的表达水平，而在PCSK9敲除的小鼠的肝脏中，LDLR的表达水平也有所升高。由此可见，PCSK9提供了一种新的治疗模式：通过调节LDL-C的表达水平来防治心血管疾病。因此，PCSK9抗体被视为他汀类药物之后，抗心血管疾病药物的最大进步。同时，PCSK9抗体在治疗与PCSK9功能相关或受PCSK9功能影响的病症中非常重要，这些病症包括但不限于高胆固醇血脂症、冠心病、代谢综合症和急性冠状动脉综合症等。人源抗体转基因小鼠技术最早由Abgenix(XenoMouse)和Madarex(HuMabmouse)开发，并应用于全人源抗体的制备。早期的转基因小鼠产生全人免疫球蛋白(Ig)，即抗体的可变区和恒定区全为人源序列，因人IgFc与小鼠宿主Fc受体不匹配，因而导致免疫反应很弱，抗原免疫后血清中抗体效价很低，单抗制备效率低。而目前，通过常规分子生物学方法能够将小鼠源抗体可变区的CDR结构域嫁接到人源抗体架构上，使小鼠源抗体成分降低到5％以下得到人源化抗体，从而大大增加了抗体在人体内使用的安全性。目前人源化抗体是抗体药物市场的主要产品。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服目前缺少人源化的PCSK9抗体的不足，提供一种亲和力高、特异性强的人源PCSK9抗体及其制备方法和应用。所述的PCSK9抗体，与人源PCSK9蛋白具有高度亲和力，与食蟹猴源PCSK9蛋白有相似的结合能力；能够抑制PCSK9与其受体LDLR的结合；能够显著抑制PCSK9蛋白介导的LDLR的表达水平；并且能够显著抑制PCSK9蛋白介导的LDL摄入现象。本专利技术人以人源PCSK9蛋白作为免疫原，采用人源抗体转基因小鼠技术，克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因，可变区基因可以嫁接到人源抗体恒定区基因从而形成人鼠嵌合抗体，即获得PCSK9抗体的先导抗体。再通过一系列的对先导抗体的初步生产、纯化和检定，获得与人源PCSK9蛋白等蛋白具有高度亲和力；能够显著抑制PCSK9蛋白介导的LDLR的表达水平；并且能够显著抑制PCSK9蛋白介导的LDL摄入现象的PCSK9抗体。然后通过分子生物学方法测序获知PCSK9抗体的重链可变区和PCSK9抗体的轻链可变区的氨基酸序列。最后通过分子生物学手段，获得全人源的PCSK9抗体。本专利技术提供一种分离的蛋白质，其包括PCSK9抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PCSK9抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，其中，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.18、SEQIDNo.26或SEQIDNo.34所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3、SEQIDNo.11、SEQIDNo.19、SEQIDNo.27或SEQIDNo.35所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12、SEQIDNo.20、SEQIDNo.28或SEQIDNo.36所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14、SEQIDNo.22、SEQIDNo.30或SEQIDNo.38所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15、SEQIDNo.23、SEQIDNo.31或SEQIDNo.39所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16、SEQIDNo.24、SEQIDNo.32或SEQIDNo.40所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.18、SEQIDNo.26或SEQIDNo.34所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.3、SEQIDNo.11、SEQIDNo.19、SEQIDNo.27或SEQIDNo.35所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12、SEQIDNo.20、SEQIDNo.28或SEQIDNo.36所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14、SEQIDNo.22、SEQIDNo.30或SEQIDNo.38所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15、SEQIDNo.23、SEQIDNo.31或SEQIDNo.39所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16、SEQIDNo.24、SEQIDNo.32或SEQIDNo.40所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。较佳地，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.2所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.10所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.11所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.12所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.18所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.19所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.20所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.26所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SE本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的蛋白质，其特征在于，其包括PCSK9抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PCSK9抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2、SEQ ID No.10、SEQ ID No.18、SEQ ID No.26或SEQ ID No.34所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.3、SEQ ID No.11、SEQ ID No.19、SEQ ID No.27或SEQ ID No.35所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.4、SEQ ID No.12、SEQ ID No.20、SEQ ID No.28或SEQ ID No.36所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.6、SEQ ID No.14、SEQ ID No.22、SEQ ID No.30或SEQ ID No.38所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.7、SEQ ID No.15、SEQ ID No.23、SEQ ID No.31或SEQ ID No.39所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.8、SEQ ID No.16、SEQ ID No.24、SEQ ID No.32或SEQ ID No.40所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.2、SEQ ID No.10、SEQ ID No.18、SEQ ID No.26或SEQ ID No.34所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.3、SEQ ID No.11、SEQ ID No.19、SEQ ID No.27或SEQ ID No.35所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.4、SEQ ID No.12、SEQ ID No.20、SEQ ID No.28或SEQ ID No.36所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.6、SEQ ID No.14、SEQ ID No.22、SEQ ID No.30或SEQ ID No.38所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.7、SEQ ID No.15、SEQ ID No.23、SEQ ID No.31或SEQ ID No.39所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.8、SEQ ID No.16、SEQ ID No.24、SEQ ID No.32或SEQ ID No.40所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。...

【技术特征摘要】
1.一种分离的蛋白质，其特征在于，其包括PCSK9抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PCSK9抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.18、SEQIDNo.26或SEQIDNo.34所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3、SEQIDNo.11、SEQIDNo.19、SEQIDNo.27或SEQIDNo.35所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12、SEQIDNo.20、SEQIDNo.28或SEQIDNo.36所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14、SEQIDNo.22、SEQIDNo.30或SEQIDNo.38所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15、SEQIDNo.23、SEQIDNo.31或SEQIDNo.39所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16、SEQIDNo.24、SEQIDNo.32或SEQIDNo.40所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.18、SEQIDNo.26或SEQIDNo.34所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.3、SEQIDNo.11、SEQIDNo.19、SEQIDNo.27或SEQIDNo.35所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12、SEQIDNo.20、SEQIDNo.28或SEQIDNo.36所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14、SEQIDNo.22、SEQIDNo.30或SEQIDNo.38所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15、SEQIDNo.23、SEQIDNo.31或SEQIDNo.39所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述
\t轻链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16、SEQIDNo.24、SEQIDNo.32或SEQIDNo.40所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。2.如权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.2所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.10所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.11所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.12所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.18所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.19所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.20所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.26所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.27所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.28所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.34所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.35所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.36所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.6所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.7所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.8所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.14所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.15所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.16所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.22所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.23所示，且所述轻链CDR3的氨基
\t酸序列如序列表SEQIDNo.24所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.30所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3...

【专利技术属性】
技术研发人员：高婧，杨欣秀，翟杨杨，胡少平，黄丽妮，徐丽娜，张瑜，顾红专，刘礼乐，
申请(专利权)人：钜川生物医药，
类型：发明
国别省市：维尔京群岛;VG