多巴-肽的合成,血栓相关活性及应用制造技术

本发明专利技术公开下式的3,4‑二羟基‑Phe(Ala)‑Arg‑Gly‑Asp‑Phe,公开了它的制备方法,公开了它的抗血栓活性,公开了它的溶血栓活性,公开了它治疗脑缺血大鼠的作用,因而本发明专利技术公开了它在制备抗血栓药物,溶血栓药物以及治疗缺血性中风药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及3,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe,涉及它的制备方法,涉及它的抗血栓活性,涉及它的溶血栓活性,涉及它治疗脑缺血大鼠的作用,因而本专利技术涉及它在制备抗血栓药物,溶血栓药物以及治疗缺血性中风药物中的应用。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
缺血性中风是一类较常见且危害严重的脑血管疾病，特点是发病率高、病死率高、致残率高和复发率高。目前临床治疗缺血性中风面临没有有效药物的现实，尤其中风面4h以上的患者非死即残。专利技术对中风面4h以上的患者有效的药物是临床的重要需求。专利技术人曾经公开式II的咪唑啉化合物在中风面24h的大鼠缺血性中风模型上，显示优秀疗效。即连续静脉注射6天式II的咪唑啉化合物，每天1次，首次剂量为5μmol/kg，后5次的剂量为2μmol/kg具有优秀疗效。式中aa1和aa2可为同时存在,aa1存在但aa2不存在,或同时不存在；当aa1和aa2同时存在时,aa1为R(Arg),且aa2为G(Gly),A(Ala)或Q(Gln)；当aa1存在但aa2不存在时,aa1为R(Arg)；aa3可为S(Ser),V(Val)或F(Phe)。由于式II的咪唑啉化合物的2-位是4-氧乙酰-Lys。而该Lys的侧链氨基和主链羧基分别与RGD抗血栓四肽及ARPAK溶栓肽相连接,所以结构比较复杂需要简化。专利技术人经过3年实验研究，发现用3,4-二羟基-Phe(Ala)残基代替上式中的1-取代苯基咪唑啉基可以获得结构简单和疗效好的双重意想不到的技术效果。按照这个发现，专利技术人提出了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的内容之一是提供下式的3,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe本专利技术的内容之二是提供3,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe的制备方法,该方法由以下方法构成:(1)制备(S)-3,4-二羟基-Phe-OBzl；(2)制备(S)-3,4-二羟基-Phe(Boc-Ala)-OBzl；(3)制备(S)-3,4-二羟基-Phe(Boc-Ala)；(4)制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl；(5)制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl；(6)制备(S)-3,4-二羟基-Phe(Boc-Ala)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl；(7)制备(S)-3,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe；本专利技术的内容之三是评价3,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe的抗血栓活性。本专利技术的内容之四是评价3,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe的溶血栓活性。本专利技术的内容之五是评价3,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe在脑缺血24h后治疗脑缺血的活性。附图说明图13,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe的合成路线,(i)对甲苯磺酸,苯甲醇,正己烷；(ii)DCC,HOBt,THF,NMM；(iii)Pd/C,甲醇；(iv)4N氯化氢-乙酸乙酯溶液；(v)4N氢氧化钠溶液,甲醇；(vi)TFA,TFMSA。具体实施方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。实施例1制备(S)-3,4-二羟基-Phe-OBzl将1g(5.08mmol)(S)-3,4-二羟基-Phe,1.02g对甲苯磺酸,8mL苯甲醇和8mL正己烷的溶液90～95℃搅拌36h,冷却至室温,倒入大量乙醚使析出大量无色固体,静置,过滤。滤饼用乙醚磨洗，干燥，得1.08g(77％)标题化合物，为黄色粉末。ESI-MS(m/z)：288[M+H]+。实施例2制备(S)-3,4-二羟基-Phe(Boc-Ala)-OBzl将207mg(1.1mmol)Boc-Ala溶于15mL无水四氢呋喃(THF),冰浴下往里加149mg(1.1mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)和268mg(1.3mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)的无水THF溶液,冰浴搅拌20分钟,得对应的活泼酯溶液。将460mg(1.0mmol)(S)-3,4-二羟基-Phe-OBzl用无水THF溶解,然后与刚刚得到的活泼酯溶液混溶,滴加N-甲基吗啉(NMM)调节pH8,得到的反应混合物室温反应24小时。过滤,滤液减压浓缩至干,残留物用乙酸乙酯溶解,溶液依次用饱和KHSO4溶液洗3次,饱和NaCl溶液洗3次,所得乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥,过滤,滤液减压浓缩。得到的黄色油状物经柱层析(石油醚/丙酮,6/1-1/1)纯化,得260mg(45％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/z)：459[M+H]+。实施例3制备(S)-3,4-二羟基-Phe(Boc-Ala)向458mg(1.0mmol)(S)-3,4-二羟基-Phe(Boc-Ala)-OBzl中加入20mL甲醇和30mg的Pd/C。往得到的悬浮液中通氢气,室温搅拌24小时,TLC(CH2Cl2/MeOH,30/1)监控反应原料点消失。滤除Pd/C,滤液减压浓缩除去溶剂得319mg(86％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/z)：367[M-H]-。实施例4制备Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl按照实施例2的方法从350mg(1.1mmol)Boc-Arg(NO2)和337mg(1.0mmol)HCl·Gly-OBzl得312mg(67％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/z):466[M+H]+。实施例5制备Boc-Arg(NO2)-Gly将466mg(1.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl用20mL甲醇溶解,冰浴下加入4NNaOH溶液调节pH12,冰浴反应3h,TLC(CHCl2/MeOH,30/1)显示原料点消失。后处理：加入5％KHSO4水溶液调节pH至中性,旋转蒸发仪旋去甲醇,再加入饱和KHSO4水溶液调节pH＝2,乙酸乙酯萃洗,干燥,旋干得到310mg(78％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/z):375[M-H]-。实施例6制备Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl按照实施例2的方法从355mg(1.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和291mg(1.0mmol)HCl·Phe-OBzl得284mg(50％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/z)：561[M+H]+。实施例7制备HCl·Asp(OBzl)-Phe-OBzl向560mg(1mmol)Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl中加入10mL4M氯化氢-乙酸乙酯溶液,室温搅拌3小时,TLC(CHCl2/MeOH,30/1)显示原料点消失。反应液减压浓缩至干,残留物加少量干燥乙酸乙酯,再减压浓缩至干。该操作重复3次。残留物加少量无水乙醚,减压浓缩至干。该操作重复3次。得440mg(96％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/z)：461[M+H]+。实施例8制备Boc本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式的3,4‑二羟基‑Phe(Ala)‑Arg‑Gly‑Asp‑Phe

【技术特征摘要】
1.下式的3,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe2.权利要求1的3,4-二羟基-Phe(Ala)-Arg-Gly-Asp-Phe的制备方法,包括以下步骤:(1)制备(S)-3,4-二羟基-Phe-OBzl；(2)制备(S)-3,4-二羟基-Phe(Boc-Ala)-OBzl；(3)制备(S)-3,4-二羟基-Phe(Boc-Ala)；(4)制备Ia:(4a)制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl；(4b)制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl；...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，王夏，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京;11