新基因MDL1及其定量检测方法技术

本发明专利技术公开了人类线粒体新基因MDL1和MDL1AS的全长核苷酸序列及其表达量的定量检测方法，属于生物技术领域。基因MDL1的核苷酸序列为：1)SEQ ID NO.1所示核苷酸序列；或2)SEQ ID NO.1所示核苷酸序列经替换、删除或插入一个或几个核苷酸形成的核苷酸序列。基因MDL1AS的核苷酸序列为：1)SEQ ID NO.2所示核苷酸序列；或2)SEQ ID NO.2所示核苷酸序列经替换、删除或插入一个或几个核苷酸形成的核苷酸序列。MDL1和MDL1AS是调控线粒体基因表达的关键基因，线粒体供能是各种生命活动的基础，本发明专利技术验证了MDL1在多种肿瘤细胞中表达的显著性变化，有非常重要的临床检测和治疗价值。

Novel gene MDL1 and quantitative detection method thereof

The invention discloses a full-length nucleotide sequence of human mitochondrial gene MDL1 and MDL1AS and a quantitative detection method for the quantitative expression of the gene. The nucleotide sequence of MDL1 gene: 1) SEQ ID NO.1 shown in nucleotide sequence; or 2) SEQ ID NO.1 nucleotide sequences shown by nucleotide substitution, deletion or insertion of one or more nucleotides formed. The nucleotide sequence of MDL1AS gene: 1) SEQ ID NO.2 shown in nucleotide sequence; or 2) SEQ ID NO.2 nucleotide sequences shown by nucleotide substitution, deletion or insertion of one or more nucleotides formed. MDL1 and MDL1AS is the key gene expression regulation of mitochondrial genes, mitochondrial energy supply is the basis of life activities, the invention verifies the significant changes of MDL1 expression in various tumor cells, valuable clinical detection and treatment is very important.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及两个人类线粒体新基因MDL1和MDL1AS的全长序列，其表达量的检测方法以及应用。
技术介绍
动物线粒体进化上极端保守，基本上包括2个rRNA，13个mRNA和22个tRNA编码基因。线粒体是细胞进行有氧呼吸的主要场所，为生命活动提供能量。肿瘤等多种疾病的发生，需要短时间内大量的能量供给，因此离不开线粒体的异常复制和表达。但是，人们对于有关线粒体复制和表达等调控的分子机制的了解仍然处于初级阶段。直到2016年，南开大学高山和卜文俊等通过单分子转录组测序数据挖掘，在国际上首次发现了两个潜在的线粒体基因表达调控基因MDL1和MDL1AS，并通过多种实验手段确认了它们的全长序列。这两个基因来自一直以来被认为是不发生转录的线粒体基因组区域，称作D-Loop区。后来研究发现，动物线粒体D-Loop区普遍存在编码RNA的现象。进一步的实验又发现，MDL1基因在肿瘤等一些线粒体异常表达的组织或细胞中有显著性变化，因此，该基因有作为临床检测或治疗靶点的可能性。
技术实现思路
本专利技术的目的是在国际上首次设计提供一套简单的基于qRT-PCR的检测方法，检测MDL1基因和MDL1AS基因在各种组织或细胞中的表达量，以支持基础研究和临床检测。所述的一种人类线粒体基因MDL1，其特征在于其核苷酸序列为(1)SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；或(2)SEQIDNO.1所示核苷酸序列经替换、删除或插入一个或几个核苷酸形成的核苷酸序列。所述的一种人类线粒体基因MDL1AS，其特征在于其核苷酸序列为(1)SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；或(2)SEQIDNO.2所示核苷酸序列经替换、删除或插入一个或几个核苷酸形成的核苷酸序列。所述的基因MDL1转录的RNA的qRT-PCR检测方法，其特征在于RNA反转引物由20个bp以上的接头序列(5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′)与18个Oligo(dT)组成。所述基因MDL1转录的RNA的qRT-PCR检测方法，其特征在于cDNA扩增需要如下任何一对引物：(1)引物对1上游5′-CCACAGCACTTAAACACATCTCTGC-3′引物对1下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(2)引物对2上游5′-AACACATCTCTGCCAAACCCCAA-3′引物对2下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(3)引物对3上游5′-AACAAAGAACCCTAACACCAGCC-3′引物对3下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(4)引物对4上游5′-ACACCAGCCTAACCAGATTTC-3′引物对4下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(5)引物对5上游5′-TGCACTTTTAACAGTCACCCC-3′引物对5下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(6)引物对6上游5′-ACACATTATTTTCCCCTCCCACTCC-3′引物对6下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(7)引物对7上游5′-CCCCTCCCACTCCCATACTACTAAT-3′引物对7下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(8)引物对8上游5′-TAACCCCATACCCCGAACCAA-3′引物对8下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(9)引物对9上游5′-TATTTTCCCCTCCCACTCCCATACT-3′引物对9下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(10)引物对10上游5′-AACCCTAACACCAGCCTAACCAG-3′引物对10下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(11)引物对11上游5′-CTTAAACACATCTCTGCCAAACCCC-3′引物对11下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(12)引物对12上游5′-CTCCCACTCCCATACTACTAATC-3′引物对12下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(13)引物对13上游5′-CATACCCCGAACCAACCAA-3′引物对13下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(14)引物对14上游5′-CCGAACCAACCAAACCCCAAA-3′引物对14下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(15)引物对15上游5′-CAACCAAACCCCAAAGACACC-3′引物对15下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(16)引物对16上游5′-TCTCTGCCAAACCCCAAAA-3′引物对16下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(17)引物对17上游5′-GCACTTAAACACATCTCTGCC-3′引物对17下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(18)引物对18上游5′-CTAACACCAGCCTAACCAGAT-3′引物对18下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(19)引物对19上游5′-CGGTATGCACTTTTAACAGTCACCC-3′引物对19下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(20)引物对20上游5′-ACACACACACCGCTGCTAA-3′引物对20下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′所述基因MDL1AS转录的RNA的qRT-PCR检测方法，其特征在于cDNA扩增需要如下任何一对引物：(1)引物对1上游5′-CTATGTACTGTTAAGGGTGGGTAGG-3′引物对1下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(2)引物对2上游5′-GGTGGCTTTGGAGTTGCAGTT-3′引物对2下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(3)引物对3上游5′-GTTGAGGGTTGATTGCTGTACTTGC-3′引物对3下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(4)引物对4上游5′-GGGGTTTTGATGTGGATTGGGT-3′引物对4下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(5)引物对5上游5′-GGTACCGTACAATATTCATGGTGGC-3′引物对5下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(6)引物对6上游5′-TACATAGCGGTTGTTGATGGGTGAG-3′引物对6下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(7)引物对7上游5′-TGGTACCCAAATCTGCTTCCC-3′引物对7下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(8)引物对8上游5′-GCAGTTGATGTGTGATAGTTGAGGG-3′引物对8下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(9)引物对9上游5′-ACTGTTAAGGGTGGGTAGGTTTG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人类线粒体基因MDL1，其特征在于其核苷酸序列为(1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；或(2)SEQ ID NO.1所示核苷酸序列经替换、删除或插入一个或几个核苷酸形成的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种人类线粒体基因MDL1，其特征在于其核苷酸序列为(1)SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；或(2)SEQIDNO.1所示核苷酸序列经替换、删除或插入一个或几个核苷酸形成的核苷酸序列。2.一种人类线粒体基因MDL1AS，其特征在于其核苷酸序列为(1)SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；或(2)SEQIDNO.2所示核苷酸序列经替换、删除或插入一个或几个核苷酸形成的核苷酸序列。3.如权利要求1所述基因MDL1转录的RNA的qRT-PCR检测方法，其特征在于RNA反转引物由20个bp以上的接头序列(5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′)与18个Oligo(dT)组成。4.如权利要求1所述基因MDL1转录的RNA的qRT-PCR检测方法，其特征在于cDNA扩增需要如下任何一对引物：(1)引物对1上游5′-CCACAGCACTTAAACACATCTCTGC-3′引物对1下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(2)引物对2上游5′-AACACATCTCTGCCAAACCCCAA-3′引物对2下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(3)引物对3上游5′-AACAAAGAACCCTAACACCAGCC-3′引物对3下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(4)引物对4上游5′-ACACCAGCCTAACCAGATTTC-3′引物对4下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(5)引物对5上游5′-TGCACTTTTAACAGTCACCCC-3′引物对5下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(6)引物对6上游5′-ACACATTATTTTCCCCTCCCACTCC-3′引物对6下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(7)引物对7上游5′-CCCCTCCCACTCCCATACTACTAAT-3′引物对7下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(8)引物对8上游5′-TAACCCCATACCCCGAACCAA-3′引物对8下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(9)引物对9上游5′-TATTTTCCCCTCCCACTCCCATACT-3′引物对9下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(10)引物对10上游5′-AACCCTAACACCAGCCTAACCAG-3′引物对10下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(11)引物对11上游5′-CTTAAACACATCTCTGCCAAACCCC-3′引物对11下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(12)引物对12上游5′-CTCCCACTCCCATACTACTAATC-3′引物对12下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(13)引物对13上游5′-CATACCCCGAACCAACCAA-3′引物对13下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(14)引物对14上游5′-CCGAACCAACCAAACCCCAAA-3′引物对14下游5′-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3′(15)引物对15上游5...

【专利技术属性】
技术研发人员：高山，姚雪，卜文俊，阮吉寿，程智，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12