本发明专利技术提供了一种中药组合物冻干注射剂中多种组分含量的测定方法,本发明专利技术中药冻干注射剂原料包括人参和淫羊藿,临床用于运动神经元疾病(肌萎缩侧索硬化症、进行性脊肌萎缩症、进行性延髓麻痹、原发性侧索硬化症)、进行性肌营养不良症、先天性肌病等疾病所致的肌肉萎缩及重症肌无力的治疗,本发明专利技术方法采用高效液相色谱法进行指纹图谱测定,用于产品定性质量控制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药冻干注射剂定性的测定方法,属于药物制剂分析
技术介绍
中药冻干注射剂在质量标准上,要求控制的项目比较多,其中,指纹图谱的定性是一种综合的,可量化的鉴定手段,它是建立在中药化学成分系统研究的基础上,主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。“整体性”和“模糊性”为其显著特点。目前,中药指纹图谱技术已涉及众多方法,包括薄层扫描(TLCS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)和高效毛细管电泳法(HPCE)等色谱法以及紫外光谱法(UV)、红外光谱法(IR)、质谱法(MS)、核磁共振法(NMR)和X-射线衍射法等光谱法。其中色谱方法为主流方法,尤其是HPLC、TLCS和GC已成为公认的三种常规分析手段。由于HPLC具有分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点;中药成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测,且积累较丰富的应用经验。因此高效液相色谱法已成为中药指纹图谱技术的首选方法。CN1785223A公开了一种治疗肌肉萎缩及重症肌无力的药物及其制备方法,该专利公开了该药物的组方、制剂以及胶囊、片剂等制备方法;该专利还公开了该药物的药效学实验,证实该药物具有增强正常运动神经元活力,促进神经突起生长,又能保护兴奋性氨基酸毒性损伤运动神经元,减少细胞凋亡,在维持中枢神经系统功能,延缓病情发展,提高患者生存质量方面具有重要的临床应用价值;该专利还公开了其中人参提取物的制备方法,“取人参药材,用60-90%乙醇提取1-3次,第1次加药材8-12倍量溶剂提取1-2小时,第2次加6-10倍量溶剂提取1-2小时,第3次加6-10倍量溶剂提取0.5-1小时;合并上述提取液,趁热滤过,减压回收乙醇,并浓缩,放入不锈钢桶内,加纯水搅拌均匀,冷藏24-36h;将冷藏液取出,放至常温,板框过滤器过滤,用少量水洗涤板框,滤液加纯水稀释,备用;取人参浓缩药液通过处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱,并分别用pH值8-9的氨水、20%乙醇、80%乙醇洗脱,收集80%乙醇洗脱液。将80%洗脱液加入纯水,配成50%醇溶液,通过中性氧化铝柱,收集洗脱液,再用少量50%乙醇洗涤柱子,合并洗脱液备用;取药液加入活性炭,回流加热,煮沸20min,趁热板框抽滤,收集滤液,浓缩,冷藏过夜;澄清板过滤,减压干燥,即得人参提取物。”该人参提取物即为人参总皂苷提取物;该专利还公开了淫羊藿提取物的提取方法,“取淫羊藿药材,加水煎煮提取2-5次,加水量为10-30倍,第一次提取时间定为0.5-2h,以后3次为0.5-1h;合并上述提取液,趁热滤过,减压浓缩,放入不锈钢桶内,加乙醇至药液含醇浓度为70%,冷藏;过滤,滤液回收乙醇并浓缩,加水搅拌均匀,冷藏,过滤,备用;取淫羊藿药液通过处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱,并分别用纯水、20%乙醇、50%乙醇洗脱,收集50%乙醇洗脱液;洗脱液拌入适量硅藻土混匀,用无水乙醇提取2-5次,提取液合并,回收乙醇并浓缩,浓缩液加入丙酮,并搅拌均匀,冷藏,过滤,沉淀加丙酮再同前处理2次,合并3次滤液,回收溶剂,并浓缩,减压干燥,即得淫羊藿提取物。”该淫羊藿提取物即为淫羊藿总黄酮提取物。该专利未公开冻干注射剂制备及其质量控制的测定方法。-->由CN1785223A公开的
技术实现思路
,可以看出,该中药组合物包括的原料包含淫羊藿总黄酮提取物和人参总皂苷提取物。本专利申请即是在CN1785223A的基础上做了进一步的研发,在研制该中药组合物的冻干注射剂的基础上,制定了该中药冻干注射剂定性的鉴别的测定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种中药冻干注射剂定性的测定方法。本专利技术所述中药冻干注射剂是由如下重量份比例的原料制成:人参总皂苷提取物30-70 淫羊藿总黄酮提取物20-60。本专利技术采用高效液相色谱法,测定本专利技术所述中药冻干注射剂的指纹图谱,用于本专利技术所述中药冻干注射剂的定性表征。本专利技术建立了所述中药冻干注射剂的指纹图谱测定方法,建立该中药指纹图谱将能较为全面地反映本专利技术所述中药冻干注射剂中所含化学成分的种类与数量,进而对药品质量进行整体描述和评价,以确保其安全有效。本专利技术测定方法中,液相色谱条件优选如下:液相色谱条件:色谱柱为C18柱;流动相:A为水,B为乙腈;流速为1mL/min;梯度如下:0-23分钟,A为80%、23-40分钟,A由80%匀速降至65%、40-51分钟,A由65%匀速降至20%、51-62分钟,A由20%匀速降至0%、62-68分钟,A为0%、68-75分钟,A由0%匀速升至80%、75-85分钟,A为80%;检测器蒸发光检测器,气体压力为25psi,漂移管温度为75℃,加热级别66%;供试品溶液的制备精密称取本专利技术中药冻干注射剂内容物0.50g,50%乙腈充分溶解,定容到25ml量瓶中,即得;测定法分别精密吸取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。本专利技术所述测定方法中色谱条件中:柱温优选为25℃;流动相流速优选为1mL/min;色谱柱优选为ES-C18柱。本专利技术检测方法所检测的本专利技术所述中药冻干注射剂的原料重量比例优选为:人参总皂苷提取物35 淫羊藿总黄酮提取物55。还优选为:人参总皂苷提取物65 淫羊藿总黄酮提取物25。或者:人参总皂苷提取物50 淫羊藿总黄酮提取物40。为证实本专利技术方法可行性,专利技术人进行了如下的验证试验:1、样品制备:人参总皂苷提取物50克 淫羊藿总黄酮提取物40克制备方法:a、将800克羟丙基-β-环糊精加水4000ml溶解制成20%的溶液,将淫羊藿总黄酮提取物加水750ml(5.33%)加热溶解,分次缓慢加入羟丙基-β-环糊精溶液中,保温80℃±1℃,动态搅拌包合,包合时间3小时,将人参总皂苷提取物加水100ml(50%)加热溶解,加入包合液中,继续包合1小时;b、加水调节溶液总量至6000ml,用10%的氢氧化钠溶液调节PH到7.5,加入活-->性炭24克(即含活性炭0.4%),煮沸10分钟,趁热用澄清板框过滤,滤除活性炭,再用0.22μm微孔滤膜过滤,用水定容至6000ml;c、105℃热压灭菌30分钟,取出,放至常温,用0.22μm微孔滤膜过滤,分装至15ml西林瓶,每支6ml,半压塞,置冻干机中,-40℃预冻3小时;d、按照预冻条件,在真空度为0.05Pa状态下,从-40℃至0℃升温升华28小时,再从0℃至30℃升温干燥4.5小时;e、在升华和干燥的真空状态下压塞,出箱,压铝盖,灯检,包装。2、方法学验证2.1仪器与试药Waters2695-2420型高效液相色谱仪(包括四元泵、在线脱气机、蒸发光检测器、柱温箱、100μl进样阀、化学工作站等,waters公司)。人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2和Rd对照品;朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C和淫羊藿苷对照品;乙腈(色谱纯);水(超纯水);其余试剂均为分析纯。2.2色谱条件选择2.2.1流动相的选择试验过程中,考察了多种流动相比例和组成,最终确定表1中的流动相条件,结果表明该条件的色谱峰分离效果好、保留时间适中。表1乙腈-水系统梯度洗脱的时间、比例和流速2.2.2检测器选择先后比较了多波长紫外检测器、PDA检测器、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种中药冻干注射剂定性的测定方法,该中药冻干注射剂是由30‑70重量份的人参总皂苷提取物和20‑60重量份的淫羊藿总黄酮提取物制成,其特征在于该方法采用高效液相色谱法测定其指纹图谱。
【技术特征摘要】
1.一种中药冻干注射剂定性的测定方法,该中药冻干注射剂是由30-70重量份的人参总皂苷提取物和20-60重量份的淫羊藿总黄酮提取物制成,其特征在于该方法采用高效液相色谱法测定其指纹图谱。2.根据权利要求1所述测定方法,其特征在于所述高效液相色谱法的色谱条件为:液相色谱条件:色谱柱为C18柱;流动相:A为水,B为乙腈;梯度如下:0-23分钟,A为80%、23-40分钟,A由80%匀速降至65%、40-51分钟,A由65%匀速降至20%、51-62分钟,A由20%匀速降至0%、62-68分钟,A为0%、68-75分钟,A由0%匀速升至80%、75-85分钟,A为80%;检测器为蒸发光检测器,气体压力为25psi,漂移管温度为75℃,加热级别66%;供试品溶液的制备精密称取本发明中药冻干注射剂内容物0.50g,50%乙腈充分溶解,定容到25...
【专利技术属性】
技术研发人员:宋剑,刘兴国,郑亚杰,蔡艳,王贵金,贾继明,裴彩云,王胜超,
申请(专利权)人:河北以岭医药研究院有限公司,
类型:发明
国别省市:河北;13
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