杂交瘤细胞株XA272-917、抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及杂交瘤细胞株XA272‑917、抗体及其应用。所涉及的杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C2016113。所涉及的抗体为本发明专利技术的杂交瘤细胞株分泌的抗体。所涉及的应用为所述抗体用于检测人CTRP9A的应用以及所述抗体用于制备人CTRP9A检测试剂盒的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及杂交瘤细胞株、抗体及其应用，具体涉及用于检测人CTRP9的杂交瘤细胞株、抗体及其应用。
技术介绍
C1qandtumornecrosisfactorrelatedprotein9(CTRP9)是主要由脂肪细胞分泌的脂肪细胞因子，作用于肌肉和肝脏，调节全身葡萄糖和脂质代谢等。在肾脏、小肠、肺脏及成纤维细胞等器官、组织细胞中也有所表达。CTRP9由分泌信号肽、短N端可变区域、胶原区域及C端球状结构域构成，成熟蛋白不含其N端信号肽(19个氨基酸残基)。C端球状结构域与C1q结构类似，与脂联素高度相似，可以与其他蛋白或者受体相互作用，因此被认为是其功能结构域。CTRP9是具有诸多生理功能的新型脂肪因子，具有降低血糖、舒张血管及心肌保护等诸多生理作用。骨骼肌细胞中，CTRP9可以长期激活AMPK通路，增加线粒体的含量和上调脂肪酸氧化相关基因的表达，从而降低了脂肪组织的形成。在股动脉损伤模型中，CTRP9过量表达可以激活cAMP/PKA/ERK通路，抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移，大幅度降低新生内膜的形成。人脐静脉内皮细胞和新分离血管环中，重组CTRP9蛋白可以通过AMPK/eNOS通路提高一氧化氮产量使血管扩张。同时，CTRP9具有显著的缺血心肌及血管保护作用，尤其是在心肌及血管组织表达分泌量是脂联素的100倍以上，而心肌缺血损伤时其心肌分泌及血浆含量均显著降低，具有很高的特异性，CTRPs是潜在的肥胖相关心脏病病情评估的生物标记物及干预靶点，有望在治疗代谢综合征和心力衰竭等方面发挥重要作用。天然情况下，人体内存在CTRP9A和CTRP9B两种异构形式，由两个不同的基因表达，但是两者氨基酸残基相似性超过98％，区别仅在C端球状区域。CTRP9A可以单独表达分泌，而CTRP9B的分泌需要有CTRP9A存在。前述CTRP9的体内体外研究结果均是CTRPA。最近研究结果表明，CTRP9A和CTRP9B的混合多聚体会结合不同于CTRP9A的受体分子，CTRP9A/CTRP9B的比值在应激条件如缺血、再灌注时会发生变化，这提示两者的比值可能在心血管疾病等疾病的发病机制、药物新靶标的筛选以及相关疾病的早期预测、疗效监测和预后判断中具有重要价值。专利技术人利用纯化的CTRP9A和CTRP9B蛋白分别为样品，应用BioVendorHumanCTRP9ELISA试剂盒进行检测，结果显示，该试剂盒不能区分CTRP9A或CTRP9B，其测定的CTRP9含量是CTRP9A和CTRP9B的总和。所以，目前尚没有一种特异性针对体内CTRP9A或CTRP9B的定量检测方法。
技术实现思路
针对现有技术的缺陷或不足，本专利技术提供了一种用于生产抗人CTRP9A的单克隆抗体的杂交瘤细胞株XA272-917，该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO：C2016113，地址：武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏时间：2016年6月16日。本专利技术杂交瘤细胞株产生的抗人CTRP9A的单克隆抗体。本专利技术杂交瘤细胞株产生的抗体，该抗体的序列为：重链可变区：QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMSVAWIRQPSGKALEWLAHIWWNDYKYYNPALKSRLTLSKDTSNNQVFLKIASVVSADTATYYCARIGSYGNVDFWGQGTTLTVSS；CDR1序列：GMSVA；CDR2序列：HIWWNDYKYYNPALKS；CDR3序列：IGSYGNVDF；轻链可变区：DVVMTQPPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWSLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPPTFGAGTKLELK；CDR1序列：RSSQSLVHSNGNTYLH；CDR2序列：KVSNRFS；CDR3序列：SQSTHVPPT。本专利技术的抗体用于检测人CTRP9A的应用。本专利技术的抗体用于制备人CTRP9A检测试剂盒的应用。本专利技术的人CTRP9A检测试剂盒包括权利要求2所述抗体。本专利技术的试剂盒还包括：样品稀释液、底物稀释液、底物、洗涤液、标准品和非离子活性剂。附图说明图1为重组人CTRP9A蛋白电泳图，其中：1、Marker；2、破碎上清；3、镍柱流穿液；4、500mM咪唑洗脱液；5、重组人CTRP9A蛋白；图2为重组人CTRP9B蛋白电泳图，其中：1、Marker；2、500mM咪唑洗脱液；3、重组人CTRP9B蛋白。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术做进一步的阐述。实施例是对本专利技术进行详细说明，但本专利技术并不受这些的任何限定。以下实施例过程中使用的辣根过氧化物酶(HRP)购自上海生工生物工程技术服务有限公司；基因序列优化、合成克隆由北京奥科鼎盛生物科技有限公司完成；抗体测序由北京安必奇生物科技有限公司完成；Ni-NTA纯化柱购自GE公司；内毒素去除柱购自赛默飞世尔(中国)有限公司；DMEM高塘培养基、胎牛血清为Hycolon公司产品。实施例1:本专利技术杂交瘤细胞株的制备根据人CTRP9A序列(GenBankACCESSIONNM_030945)开放阅读框序列，进行针对大肠杆菌偏好性进行密码子优化，人CTRP9A全基因合成(序列为：ATGCAGGATACCTGCAGACAGGGTCACCCAGGTATTCCAGGTAACCCTGGTCATAATGGTCTGCCAGGTAGAGATGGTCGTGATGGTGCCAAAGGTGACAAAGGTGATGCTGGAGAGCCAGGTAGACCAGGTTCACCTGGTAAGGATGGAACCTCTGGTGAGAAGGGAGAACGTGGTGCCGACGGTAAAGTGGAAGCCAAGGGTATCAAGGGTGACCAGGGTTCTCGTGGTTCTCCAGGTAAACACGGTCCTAAAGGTTTGGCCGGTCCTATGGGAGAAAAGGGTCTGAGAGGTGAGACTGGTCCACAGGGACAGAAAGGTAACAAGGGTGACGTTGGTCCTACTGGTCCTGAGGGTCCTCGTGGTAATATTGGTCCACTGGGTCCTACCGGTCTGCCAGGTCCAATGGGTCCAATTGGTAAGCCAGGTCCAAAGGGTGAAGCTGGTCCTACCGGACCACAGGGAGAACCAGGTGTGCGTGGTATTAGAGGTTGGAAGGGTGATCGTGGAGAGAAGGGTAAAATCGGTGAGACCCTGGTGCTGCCAAAATCTGCCTTTACCGTTGGTCTGACCGTGCTGTCTAAGTTTCCTTCTTCTGATATGCCAATTAAATTTGACAAAATTCTGTACAACGAGTTCAACCATTATGACACTGCCGCCGGTAAGTTCACCTGCCATATCGCCGGTGTTTACTACTTTACCTATCATATTACCGTGTTCTCTCGTAACGTTCAGGTGTCTCTGGTGAAGAACGGTGTGAAGATCCTGCACACCAAGGACGCCTACATGTCTTCTGAGGACCA本文档来自技高网...

【技术保护点】
杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C2016113。

【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCCNO:C2016113。2.权利要求1所述杂交瘤细胞株产生的抗人CTRP9A的单克隆抗体。3.如权利要求2所述的抗体，其特征在于，该抗体的序列为：重链可变区如SEQ.ID.NO.1所示；轻链可变如SEQ.ID.NO.2所示。4.权利要求2或...

【专利技术属性】
技术研发人员：易蔚，冯攀，孙阳，赵达君，谭延振，金振晓，俞世强，宋朝君，金伯泉，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61