一种使用专属性肽段组鉴别海地瓜的方法技术

本发明专利技术涉及一种使用专属性肽段组鉴别海地瓜(Acaudina molpadioides)的方法，以及一组用于通过质谱法鉴定海地瓜的对照多肽，所述多肽的序列为：SEQ ID NO.1～.5：在其他物种中未见表达。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体而言，涉及一种使用专属性肽段组鉴别海地瓜的方法。
技术介绍
海参富含酸性黏多糖，对人体有免疫调节剂、抗凝血、控制血糖和降血脂等功效。故此，海参享有“营养宝库”之美誉，现代人把海参誉为“海味八珍之首”。市场上海参种类繁多，不同海参因其营养价值、口感等不同而价格相差巨大，海地瓜(Acaudinamolpadioides)为芋海参科棘皮动物，俗称香参，也称为白参、海茄子。海地瓜的营养十分丰富，但这一海洋资源迄今尚未充分地开发利用。海参是唯一不含胆固醇的动物性食品。鲜海地瓜含有丰富的蛋白质和较低的脂肪。鲜海地瓜含有丰富的氨基酸，且含有人体所需的8种必需氨基酸。鲜海地瓜中铁和钙的含量极高，锌也相当丰富，还含有生命元素硒。海地瓜不仅含有较高的蛋白质，多种人体所必需的氨基酸、微量元素和多种维生素，而且还含有能治病、防癌的药用皂甙和海参多糖。不同品种的海参相比较，有的粘多糖含量高，对心脑血管有好处；有的皂甙含量高，对抗癌有益。海参同人参一样，如果皂甙含量高，则药用价值高，但可能味道不好；而有的海参蛋白质含量高，如茄参和刺参，可以大量用在宾馆和家庭餐桌上，对蛋白质缺乏、营养不良的人群提供身体所需的营养物质。由于目前缺乏特别有效的识别海参品种的方法，鉴别海参种类的方法还只是靠传统的外观观察，缺乏技术水平的支持，导致不少不良商人以次充好、以假充真欺骗消费者，因此需要一种高效准确的鉴定海参的方法。
技术实现思路
本专利技术对海地瓜(Acaudinamolpadioides)的多肽进行了研究，建立了从多肽水平对海地瓜进行鉴别的技术，填补了国内外海参鉴别的空白。本专利技术首先涉及一组用于单独或组合检测海地瓜的多肽，所述的多肽的序列为：SEQIDNO.1：VMTDEMER；SEQIDNO.2：FNENEEMYEK；SEQIDNO.3：FNENEEMYETK；SEQIDNO.4：MSELESQVVSSK；SEQIDNO.5：DDLVNNLGTIAK。本专利技术还涉及一种检测海地瓜的方法，所述方法包括如下步骤：(1)对待测样本进行质谱前处理，获得待测多肽滤液：(2)通过质谱法检验待测样本的多肽成分，分析样本中的海地瓜成分。所述的质谱前处理步骤如下：(1)称取1g海参样品均质成粉末状态，加入10mL蛋白提取液(8M尿素，50mMNH4HCO3)震荡提取蛋白，高速低温离心(20000r/min)，取上清液200ul转移到1mlEP管中；(2)取2μL1mol/LDTT(0.154g二硫基苏糖醇DTT溶于1mL去离子水中)加入到100μL上述蛋白溶液中37℃反应1小时；(3)取10μL现配的IAA(准确称取0.185g碘代乙酰胺IAA溶于1mL去离子水中，配置成1mol/L的IAA母液备用，配置过程需避光，现用现配)加入到已经冷却至室温的上述反应液中，室温避光反应1小时；(4)采用10K滤膜20000g超滤30分钟，使用200μL50mmol/L碳酸氢铵溶液反复冲洗滤膜上层3次后，转移至新的EP管中；(5)再加入200μL碳酸氢铵溶液重复此步骤，合并溶液完成膜下蛋白提取；(6)取5ulTrypsin酶溶液(1μg/μL的Trypsin酶溶液)加入到上述蛋白溶液中37℃酶解16-18小时；(7)采用10K滤膜14000g超滤20分钟，收集下层的肽段滤液，待上机检测。所述的质谱法检测为，采用ABSCIEX5600检测，流动相A：0.1％甲酸-乙腈，流动相B：0.1％甲酸-水，流速：0.25mL/min，TOF扫描范围：350-1500Da，正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，CurtainGas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：10。所述的分析样本中的海地瓜成分为，将待测样品的质谱结果对比SEQIDNO.1～5的各条特异性多肽的质谱谱图，出现SEQIDNO.1～5的各条特异性多肽的质谱检测谱图时，即可判断该组织样本为海地瓜样本。附图说明图1，VMTDEMER在AB5600上肽段断裂图图2，VMTDEMER在海地瓜中的质谱图图3，FNENEEMYEK在AB5600上肽段断裂图图4，FNENEEMYEK在海地瓜中的质谱图图5，FNENEEMYETK在AB5600上肽段断裂图图6，FNENEEMYETK在海地瓜中的质谱图图7，MSELESQVVSSK在AB5600上肽段断裂图图8，MSELESQVVSSK在海地瓜中的质谱图图9，DDLVNNLGTIAK在AB5600上肽段断裂图图10，DDLVNNLGTIAK在海地瓜中的质谱图具体实施方式实施例1，特异性多肽的序列来源和比对信息1.海地瓜独有的多肽VMTDEMER、FNENEEMYEK、FNENEEMYETK、MSELESQVVSSK来源海地瓜独有的多肽VMTDEMER、FNENEEMYEK、FNENEEMYETK、MSELESQVVSSK均来自于蛋白tropomyosin[Apostichopusjaponicus]，其在NCBI上的Accesionnumber是gi|302340969，序列如下SEQIDNO.6所示，分析发现EMTEEMER第1位Glu突变成了Val，第4位Glu突变成了Asp，得到了多肽VMTDEMER；FTENEEMYEK第2位Thr突变成了Asn，得到了多肽FNENEEMYEK；FTENEEMYEKK第2位Thr突变成了Asn，第10位Lys突变成了Thr，得到了多肽FNENEEMYETK；MSELETQVMSSK第6位Thr突变成了Ser，第9位Met突变成了Val，得到了多肽MSELESQVVSSK；经过NCBIblast比对，上述多肽VMTDEMER、FNENEEMYEK、FNENEEMYETK、MSELESQVVSSK未发现与其他任何物种一致，为海地瓜独有的多肽：SEQIDNO.6：MDTIKKKLSQLKADKEKALDEKDVAEASMKEAMERVEQVNDENKELQTRIKQLETELDDTSEKLNTTVIKCEAAEKAQQTAEEEMANLQRKLQLTEEELSRSEERVADLQSKYTDIEQSSEENERQRKVLESRSAADDERMSELETQVMSSKTSLEDSDRKYDEASRKLTVTEEELARSEERSAAFESSLSQMKEELHQLHNNVKSLEAQEEKFTENEEMYEKKVRDLEDKL本文档来自技高网...

【技术保护点】
一组用于单独或任意组合检测海地瓜(Acaudina molpadioides)的多肽，所述的多肽的序列为：SEQ ID NO.1：VMTDEMER；SEQ ID NO.2：FNENEEMYEK；SEQ ID NO.3：FNENEEMYETK；SEQ ID NO.4：MSELESQVVSSK；SEQ ID NO.5：DDLVNNLGTIAK。

【技术特征摘要】
1.一组用于单独或任意组合检测海地瓜(Acaudinamolpadioides)的多肽，所述的多肽的
序列为：
SEQIDNO.1：VMTDEMER；
SEQIDNO.2：FNENEEMYEK；
SEQIDNO.3：FNENEEMYETK；
SEQIDNO.4：MSELESQVVSSK；
SEQIDNO.5：DDLVNNLGTIAK。
2.一种检测海地瓜的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)对待测样本进行质谱前处理，获得待测多肽滤液：
(2)通过质谱法检验待测样本的多肽成分，分析样本中的海地瓜成分。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的质谱前处理步骤如下：
(1)称取海参样品均质成粉末状态，加入蛋白提取液(8M尿素，50mMNH4HCO3)震
荡提取蛋白，高速低温离心，取上清液转移到EP管中；
(2)取DTT加入到上述蛋白溶液中，37℃反应1小时；
(3)取现配的IAA加入到已经冷却至室温的上述反应液中，室温避光反应1小时；
(4)采用10K滤膜超滤30分钟，使用碳...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鸿伟，张晓梅，王凤美，徐彪，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：山东;37